Антигени груп крові

1. Трансмембранні транспортери (аг системи колтон – це аквапорин, тобто транспортер води; кідд – переносник сечовини)

3. Рецептори та молекули клітинної адгезії

4. Ферменти (аг системи кел та ін.)

5. Структурні білки (аг систем mns, гербіх – глікофорини, що містять велика кількістьсіалових кислот, що забезпечують негативний зарядеритроцитів)

Антигени еритроцитів:

1. гетерофільні антигени, що зустрічаються у багатьох видів тварин та бактерій;

2. неспецифічні, або видові антигени, які не зустрічаються в інших видів тварин; але які у еритроцитах всіх людей;

3. специфічні, чи групові антигени – ізоантигени, які у еритроцитах одних індивідуумів і відсутні в інших. У трансфузіології найбільше значеннямають системи АВО та Rh.

Кров кожної людини належить до будь-якої однієї з 4 груп системи АВ0 залежно від наявності на еритроцитах антигенів А і В та відповідних їм природних антитіл-аглютинінів анти-А і анти-В до відсутнього антигену.

Розрізняють: 0(І); 0A, АА (II); 0B, ВР (III); AB (IV)

Існує кілька видів антигенів А - А1, А2, А3, А4 та антигену В: В1, Вх, В3 та ін. При цьому інтенсивність реакцій з відповідними анти-А або анти-В антитілами прогресивно знижується від кожного попереднього до наступного. Так антиген А2 реагує слабше, ніж А1 тощо. Серед осіб із групою крові А(II) частота виявлення аг А1 становить 80% спостережень, для А2 – 15%, інші варіанти зустрічаються значно рідше. При цьому приблизно 1-8% осіб з групою крові А2(II) та 25-35% людей з групою А2В(IY) містять у крові (надлишкові) антитіла А1, які можуть мати природне або імунне походження. Імунні антитіла до антигенів еритроцитів можуть утворюватися при гемотрансфузіях. Це створює труднощі при ідентифікації груп крові, виявляється у пробі на індивідуальну сумісність та вимагає підтвердження спеціальними моноклональними реагентами.

Людям, які мають антитіла проти антигенів А і В, не можна переливати кров осіб з відповідними антигенами. Так, реципієнтам з І групою крові не можна переливати кров людей інших груп, крім О (І). Групові антигени вирізняються високою стабільністю. Вони виявляються в єгипетських муміяхвиготовлені до нашої ери.

Не менш важлива у трансфузіології система антигенів резус-фактора. Система резус Rh антиген було відкрито Ландштейнером і Вінером 1940г. Головна відмінність системи резус від системи АВО полягає в тому, що кров людини містить тільки аглютиногени при повній відсутностіантитіл, подібних до альфа- і бета-аглютинінів системи АВО. Розрізняють 5 основних аг цієї системи: D(RhO), C(rh'), c(hr'), E(rh), e(hr). Ці антигени, перебуваючи на еритроцитах в різних поєднанняхутворюють 27 груп системи резус.

Антиген Rho(D) - основний у системі резус, він міститься в еритроцитах 85% людей, у решти 15% він відсутній. Це притаманно європейців. У монголоїдної раси він міститься у 95%. У нормі Rh-антитіл у сироватці немає, вони виникають під час вагітності або в результаті переливання крові резус- позитивної кровірезус-негативного пацієнта. Наслідками сенсибілізації за резус-фактором у вагітної жінки є народження дітей із гемолітичною хворобою або внутрішньоутробна загибель плода. Якщо ж пацієнту, у крові якого містяться такі антитіла, переливається резус-позитивна кров виникає резус-конфлікт з гемолізом еритроцитів, що переливаються. Тому Rh (відр) пацієнтам можна переливати тільки Rh (відр) кров. Крім того, D-антиген має слабкі варіанти, які поєднуються в групу D(week) або D(u). Частота цих варіантів вбирається у 1%. Донори, які мають ці антигени, повинні розглядатися як резус-позитивні, оскільки переливання їх крові резус-негативним пацієнтам може вести до сенсибілізації, а у сенсибілізованих викликати тяжкі трансфузійні реакції. Але, реципієнти, які мають антиген D(u) повинні розглядатися, як резус-негативні, і їм можна переливати тільки резус-негативну кров, т.к. нормальний антиген D може призводити до сенсибілізації пацієнта з розвитком конфлікту як у резус-негативних осіб.

Еритроцитарні антигени резус-системи Келл, Кідд, Даффі та ін. порівняно рідко ведуть до сенсибілізації і набувають практичну значимістьпри багаторазових гемотрансфузіях та повторних вагітностей

Між організмом Rh-негативної матері, що не містить Д антигени та резус-позитивного плода, що містить цей антиген, що призводять до гемолітичної хворобиплоду.

Якщо у Rh (відр.) жінки плід успадковував Rh(+) батька, його антигени можуть надходити через плаценту в організм матері, де індукують синтез Rh-антитіл, які проникають через плаценту плода та викликають руйнування його еритроцитів – гемолітична анемія плода.

При вагітності Rh-антигени проникають в організм матері лише в невеликій кількості та високих титрів специф. антитіл не утворюють, тому за першої вагітності у Rh(відр) матері конфлікту немає. Виняток: інфекція, підвищення проникності плаценти.

Т.к. Rh-антигени проникають в організм матері в основному при пологах, то в кожній наступній вагітності кількість антитіл наростає - резус-конфлікт.

Для запобігання резусу конфлікту Rh(отр) жінкам перед пологами вводять сироватку, що блокує Rh-антигени і скасовують продукцію антирезусних антитіл.

Rh-конфлікт може виникнути і при переливанні крові, якщо Rh(відр) пацієнту перелити Rh(+) кров - синтез а/рез. антитіл та при повторних переливаннях - резус-конфлікт.

Антигени еритроцитів.

На поверхневій мембрані та стромі еритроцитів міститься понад 100 антигенів 19 окремих систем.

В еритроцитах людини розрізняють ІІІ основні різновиди антигенів:

гетерофільні антигени - зустрічаються у багатьох видів тварин та бактерій;

неспецифічні чи видові антигени – не зустрічаються в інших видів тварин, але містяться в еритроцитах всіх людей;

специфічні або групові антигени - ізоАГ - містяться в еритроцитах одних індивідуумів і відсутні в інших.

З усіх систем еритроцитарних антигенів найбільше значення мають системи АВО та Rh.

Система АВО. У 1901 р. Ландштайнер виявив в еритроцитах людини два антигени: А і В. за змістом їх люди діляться на 4 групи:

Про (I) – немає антигенів А та В;

А (II) є антиген А;

(III) - є антиген В;

АВ (IV) – є обидва антигени А та В.

Антигени А і В містяться тільки в лейкоцитах, трмбоцитах, різних тканинах, слині, спермі, сльозах, сечі, але відсутні в кришталику очі, плаценті, шкірі та спиномозковій рідині.

У сироватці крові постійно містяться антитіла до антигенів, які відсутні в еритроцитах даного індивідуума. Ці антитіла викликають аглютинацію еритроцитів, які містять гомологічний антиген. На основі цих закономірностей було створено вчення про сумісність груп крові та розроблено схеми, що забезпечують можливість безпечного переливання крові з лікувальною метою.

Визначення групи крові використовується для визначення батьківства, материнства, а також у судово-медичній практиці та криміналістиці – для встановлення плям крові та плям іншого походження.

Система Rh-антигенів. Rh-антиген відкрито Ландштанером у 1940 році. Вони встановили, що сироватка кроликів, імунізованих еритроцитами мавп макакі-резус, аглютинує еритроцити людини. З цього випливало, що еритроцити мавп та людини містять загальний антиген, названий Rh-антигеном. Він є в еритроцитах 85% населення європейських народів.

Є 6 різновидів цього антигену: C, D, E, c, d, e. Головна роль належить антигену D. Він є у населення всього світу, крім деяких народностей Далекого Сходу, де зустрічається лише у 4%. З цим антигеном пов'язані імунологічні конфлікти між організмом резус-негативної матері та резус-позитивного плода, що призводить до гемолітичної хвороби новонароджених. Для нейтралізації резус-антигенів плода жінкам перед пологами вводять антирезусну сироватку, що блокує Rh-антигени та скасовує індукцію утворення протирезусних антитіл в організмі породіллі.

Лейкоцитарні антигени. Видова антигенна специфічність лейкоцитів встановлена ​​Безрідко О.М. 1900 року. В даний час відомо близько 30 лейкоцитарних антигенів, які містяться і в інших тканинах: тромбоцитах, гранулоцитах, фібробластах, епітелії шкіри, спермі. У зв'язку з тим, що ці антигени викликають реакції трансплантаційного імунітету називають трансплантаційними антигенами або антигенами гістосумісності.

У хімічному відношенні трансплантаційні антигени є ліпопротеїни, глікопротеїни або білки. Людина вони ставляться до системи HLA, у мишей до Н2.

Молекули HLA-генів складаються з двох легких і двох важких ланцюгів, тобто. мають структурну схожість з імуноглобулінами. Тому вони можуть виконувати функції рецепторів Т-лімфоцитів. Всі HLA-гени контролюються окремим локусом генів, розташованим на короткому плечі VI пари хромосом. Система HLAє самостійною та не залежить від еритроцитарних систем. Антигени розрізняють за локусами A, B, C, D, DR.

Метод аглютинації в гелі для визначення антигенів еритроцитів та антиеритроцитарних антитіл

Вступ

Гелева технологія в мікропробірках (ГТМ) була запропонована Y. Lapierre в 1989 р. Метод заснований на аглютинації еритроцитів в агаровому гелі "сефадекс", вміщеному в мікропробірки. Зазвичай система є пластикові картки, що містять мікропробірки, заповнені гелем (патент DiaMed AG, Швейцарія) Імуногематологічні дослідження, засновані на реакції гемаглютинації, зазвичай проводять у рідкофазних системах.

Одним з найбільш важливих умовОтримання коректних даних реакції аглютинації є оцінка результату. Слабка реакція може бути неправильно інтерпретована, особливо недосвідченим персоналом. Несправжні слабкі або негативні результати непрямого антиглобулінового тесту можуть мати місце за рахунок нейтралізації антиглобулінового реагенту слідами сироватки внаслідок недостатньо ефективного відмивання еритроцитів. Неадекватне перемішування еритроцитів та елюція слабофіксованих антитіл у процесі відмивання можуть спричинити помилки при проведенні непрямого антиглобулінового тесту.

Методика аглютинації в гелі була розроблена з метою стандартизації реакцій гемаглютинації та отримання достовірних результатів. Гелева технологія передбачає розподіл еритроцитів при центрифугуванні, при цьому неаглютиновані еритроцити проходять через гель і осідають на дні пробірок ( негативний результат), в той час як аглютиновані затримуються на поверхні або в товщі гелю ( позитивний результат). Центрифугування в гелі може бути кінцевою фазою будь-яких серологічних досліджень, заснованих на реакції гемаглютинації, крім методів, які потребують диспергування для оцінки результату.

Діапазон виконуваних тестів включає визначення фенотипу еритроцитів (включаючи слабкі варіанти антигенів), антиглобуліновий тест, скринінг та ідентифікацію антитіл, тести на сумісність та деякі інші.

Принцип гелевого тіста

Забуферений декстрановий гель Sephadex ТМ G 100 superline може бути як нейтральним, так і таким, що містить специфічні антисироватки або антиглобуліновий реагент на гелевому матриксі. На гель наносяться еритроцити або суміш еритроцитів та сироватки. Клітини завжди вносяться перед сироватками - на відміну від стандартних серологічних методик - для того, щоб сироватки, що тестуються, не контактували з гелем, що особливо важливо при проведенні антиглобулінового тесту. Після інкубації слід центрифугування в певному режимі. Якщо умови центрифугування не виконуються (центрифугування недостатньо тривале або занадто м'яке) можуть мати місце хибнопозитивні результати. Хибнонегативні результати також можуть мати місце за порушення умов (форсування) центрифугування. Використання автоматичного ID-центрифуги (ДіаМед) усуває ці проблеми. Для проведення тестів зазвичай використовуються три види гелю:

1. нейтральний, що не містить специфічних антитіл (застосовується для пошуку та ідентифікації антитіл сольовим та ферментним методами, холодової стадії проби на сумісність крові донора та реципієнта);
2. специфічний, що містить антитіла (моноклональні або поліклональні) до антигенів еритроцитів крові людини (застосовується для типування антигенів еритроцитів систем АВО, Резус, Кел і т.д.)
3. антиглобуліновий, що містить антитіла (поліспецифічні або моноспецифічні) до імуноглобулінів людини та компонентів системи комплементу (застосовується для прямого та непрямого антиглобулінового тесту (реакції Кумбса) при пошуку та ідентифікації ауто- та ало імунних антитіл, пробі на сумісність крові донора та реципієнта).

Досліджувана кров додається в верхню частинумікропробірок діагностичних карт, і при центрифугуванні здійснюється поділ аглютинованих і неаглютинованих еритроцитів наступним чином: неаглютиновані еритроцити мають розмір, порівнянний з розміром частинок гелю і вільно проходять крізь них під дією відцентрової сили, формуючи на дні мікропробір; аглютиновані еритроцити через великі розміри затримуються на поверхні гелю або в його товщі - позитивний результат.

Фіксована аглютинація в гелі дозволяє легко оцінювати результат реакції, а наявність контрольної мікропробірки в діагностичної картипідтверджує достовірність даних.

Залежно від сили реакції аглютинації в гелевому середовищі прийнято таку оцінку отриманих результатів:

• сильнопозитивний (++++) - аглютинати еритроцитів, що утворилися, затрималися на поверхні гелю;
• позитивний (+++) - аглютинати розташовуються в верхньої третинистовпчика гелю;
• слабопозитивний (++) – аглютинати фіксовані у верхніх двох третинах гелю;
• дуже слабопозитивний (+) – аглютинати розташовуються в нижній третині гелю;
• негативний (-) – еритроцити формують на дні мікропробірки компактний осад.

Обладнання та реактиви

• ID-картки для визначення антигенів еритроцитів та антиеритроцитарних антитіл;
• ID-центрифуга для центрифугування карток;
• термостат на +37 ° С;
• штатив для пробірок та карт;
• пробірки місткістю 5 та 10 мл;
• напівавтоматичні піпетки одноканальні (10, 25, 50 мкл);
• рукавички гумові хірургічні;
• розчин для розведення 1 (розчин бромеліну);
• розчин для розведення 2 (розчин низької іонної сили – LISS, РНІС);
• 0,9% розчин хлориду натрію;
• стандартні типовані еритроцити людини виявлення антитіл і проведення перехресної реакції.

Характеристика ідентифікаційних карт

Ідентифікаційні карти (ID-карти) Діа-Мед є пластиковими картками, в які вбудовано по шість мікропробирок. У п'яти пробірках міститься суміш гелю та антисироваток. Кожна картка має шосту контрольну пробірку, що містить нейтральний гель без антитіл. Маркування пробірок в ID-карті здійснюється за антигенами, що виявляються, наприклад: А-В-АВ-D-СDЕ-сtl або С-с-Е-е-К-ctl. Ідентифікаційні карти для виявлення антитіл до антигенів еритроцитів мають деякі відмінності, наприклад, карти "Coombs / Enzyme Test": у трьох пробірках, розташованих зліва, міститься гель, що містить антитіла до глобулінів людини (моноспецифічні анти-IgD або поліспецифічні - до імуноглобулін) - Реакція Кумбса. У наступних трьох пробірках міститься лише нейтральний гель, призначений виявлення антитіл до антигенів еритроцитів в сольовому середовищі.

Загальні правила використання ідентифікаційних карт

1. Ідентифікаційні картки повинні зберігатись у сухому, захищеному від світла місці при температурі 18-25°С. Термін придатності вказаний у паспортній частині кожної картки та на пакувальних коробках.
2. Розчини для приготування суспензії еритроцитів, а також стандартні сироваткиі стандартні ID-еритроцити, що використовуються в окремих дослідженняхповинні зберігатися в сухому, захищеному від світла місці при температурі 2-8°С. Термін придатності вказаний на етикетці кожного флакона та пакувальної коробки.
3. Щоб уникнути помилкових результатів досліджень, забороняється використання будь-яких реагентів і карток з термінами придатності, що закінчилися, а також висохлих, що містять бульбашки газу або при пошкодженні оболонки.
4. Заготівля крові здійснюється із застосуванням сучасних флеботомічних методик, а також придатна артеріальна, капілярна та пуповинна (без відмивання) кров. Для досліджень придатні як зразки цільної крові(взяті в чисту, суху пробірку), і зразки крові, взяті на консервантах і стабілізаторах.

Типування антигенів еритроцитів

ID-картки ДіаМед призначені для одночасного визначення групи крові за системою АВО та резус-належності еритроцитів донорів та реципієнтів (включаючи їх слабкі варіанти антигенів), а також для типування інших антигенів еритроцитів. ID-карти ДіаМед можна використовувати натомість або паралельно з ізогемагглютинуючими сироватками, реагентами анти-D, анти-DСЕ, цоліклонами анти-А, анти-В, анти-D та анти-D Супер.

• [показати] .

  Початковий етап виконується по-різному, залежно від виду ID-карт, що використовуються, містять поліклональні (див. нижче п.1а) або моноклональні (див. п. 16) антитіла:

  1а)Приготувати завись досліджуваних еритроцитів у Розчині для розведення ICID-карти, що містять поліклональні антитіла) для чого:

  • Розчин для розведення 1 до досягнення ним кімнатної температури;
  • приготувати 5% суспензію досліджуваних еритроцитів у Розчині для розведення 1, помістивши в пробірку 0,5 мл Розчину для розведення 1 і 50 мкл цільної досліджуваної крові або 25 мкл еритроцитної маси;
  • акуратно змішати та інкубувати 10 хв при кімнатній температурі;
  • використовувати пізніше 15 хв після інкубації.

  16) Приготувати завись досліджуваних еритроцитів у Розчині для розведення 2 (ID-карти, що містять моноклінальні антитіла) для чого:

  • Розчин для розведення 2 до досягнення ним кімнатної температури;
  • промаркувати чисті пробірки;
  • приготувати 5% суспензію досліджуваних еритроцитів у розчині для розведення 2, помістивши в пробірку 0,5 мл розчину для розведення 1 і 50 мкл цільної досліджуваної крові або 25 мкл еритроцитної маси.
• Подальші дії [показати] .
  1. Промаркувати ID-карту (N досліджуваного зразка сироватки або П.І.Б. пацієнта).
  2. Зняти захисну фольгу із пробірок ID-картки.
  3. У кожну пробірку ID-карти внести по 10 мкл досліджуваних еритроцитів, приготовлених відповідно до п.1а, або по 50 мкл досліджуваних еритроцитів, приготовлених відповідно до п.16.
  4. Встановити ID-картки в ротор ID-центрифуги (з обов'язковим врівноваженням інших ID-карток, можливо, невикористаних).
  5. Центрифугувати ID-картки (час та швидкість центрифугування постійні та задані автоматично).
  6. Оцінити результат дослідження: Результат у контрольній мікропробірці – "ctl" – повинен бути завжди негативним. Позитивна реакція у "контролі" може бути викликана присутністю аутоантитіл і неспецифічними білками плазми. Якщо "контроль" позитивний - визначення недостовірно, його необхідно повторити після одноразового відмивання зразка еритроцитів 0,9% розчином натрію хлориду або Розчином для розведення 2.
  7. Результати визначення кожного антигену внести до відповідної графи ID-карти (на білому полі внизу під кожним антигеном).
  8. Ідентифікувати результат за наступною схемою (табл. 18.7-18.9)

  Таблиця 18.7. Результати дослідження антигенів групи крові АВО та резус-приладдя в ID-карті АВО/Rh
  Антигени, що виявляються					Висновок
  А	У	АВ	D	СДЕ
  +	+	+	+	+	АВ Rh+
  +	+	+	-	-	АВ Rh-
  +	-	+	+	+	А Rh+
  +	-	+	-	-	А Rh-
  -	+	+	+	+	У Rh+
  -	+	+	-	-	У Rh-
  -	-	-	+	+	0 Rh+
  -	-	-	-	-	0 Rh-
  Примітка: Специфіка дослідження підтверджується за негативним результатом у пробірці з контролем ID-картки.

  Таблиця 18.8 Визначення антигенів еритроцитів системи АВО
  Група крові
  	анти-А	анти-В	анти-АВ
  0(1)	-	-	-
  А1(II)	++++	-	++++
  А2(II)	++++	-	++++
  А3(II)	++/+++	-	++/++++
  А x (II) *	-/++	-	+/++
  В(II)	-	++++	++++
  В3(III)	-	+/+++	+/+++
  У x (III)*	-	-/++	-/++
  А1В(IV)	++++	++++	++++
  А2В(IV)	+++/++++	++++	++++
  Примітка: * - Визначення дуже слабких варіантів антигенів А і В вимагає подальших досліджень.

  Таблиця 18.9 Визначення резус-приладдя (D, CDE)
  Резус-приналежність	Результати дослідження із сироватками
  	Анти-D	Анти-СDЕ
  D-позитивна	++++	++++
  D-негативна	-	-
  D-негативна, С	Е-позитивна *	-
  Слабкопозитивна (D u)	від ± до +++	від +++ до ++++
  Примітка: * - Позитивна реакція із сироваткою анти-СDЕ при негативної реакціїз сироваткою анти-D свідчить про наявність антигенів С, Е і вимагає подальшого типування з використанням ID-карт: С-С-Е-К-СTL або С-С w-С-Е-Е-К

ID-картки, що використовуються

При визначенні груп крові та резус-приладдя застосовують поліклональні (табл. 18.10 [показати] ) та моноклональні (табл. 18.11 [показати] ) реагенти. Найбільш часте застосуванняпрактично внаслідок економічної доцільності знаходять моноклональні сироватки.

за сучасної класифікаціїособи з ослабленим варіантом антигену D, здатні виробляти анти-D-антитіла, поділяються на сім категорій. Найбільшу частоту народження та практичне значеннямає категорію VI, еритроцити якої несуть тільки епітоп Z антигену D. Особи категорії VI (резус-негативні реципієнти, але резус-позитивні донори!) можуть виробляти антитіла до незміненого D та часткового D всіх інших категорій. Для підтвердження групи крові використовують різні ID-картки: D(IV-) – для реципієнтів, D(IV+) – для донорів.

Визначення групи крові АВО та резус-приладдя проводять шляхом ідентифікації специфічних антигенів та антитіл (подвійна чи перехресна реакція) (табл. 18.12 [показати] ).

Для поглибленого обстеженнявикористовують інші карти (табл. 18.13-18.14 [показати] ).

Виявлення антиеритроцитарних антитіл

Принцип методу

Досліджувані сироватки та стандартні еритроцити для виявлення антитіл додаються у верхню частину мікропробирок. Після інкубації та центрифугування аглютиновані еритроцити залишаються у верхній частині пробірки, тому що не проходять через гель через великого розміруаглютинатів (позитивний результат). За відсутності антитіл до антигенів тест-еритроцитів аглютинати не утворюються. Неаглютиновані еритроцити легко проходять через гель і осідають на дні пробірки (негативний результат). Характер аглютинації при виявленні антитіл до еритроцитів залежить від титру антитіл, їхня активність і оцінюється від ++++ до +.

• Алгоритм проведення досліджень [показати] .

  Типовані еритроцити перед дослідженням необхідно попередньо двічі відмити від консерванту 0,9% розчином натрію хлориду, а потім виконати наступні дії:

  • витримати розчин для розведення 2 до досягнення кімнатної температури;
  • промаркувати пробірки;
  • приготувати 0,8% завись типованих еритроцитів в розчині для розведення 2, помістивши в пробірку 1,0 мл розчину для розведення 2 і 10 мкл крові;
  • зняти захисну фольгу з ID-картки;
  • промаркувати ID-карту (номер досліджуваного зразка сироватки або П.І.Б. пацієнта);
  • додати по 50 мкл стандартних еритроцитів до мікропробірки;
  • додати по 25 мкл сироватки або плазми досліджуваного зразка у кожну мікропробірку;
  • інкубувати 15 хв при температурі +37"С;
  • центрифугувати ID-картки в ID-центрифузі (час та швидкість центрифугування постійні та задані автоматично).

  Примітка: стандартні еритроцити панелі ID-DiaCell I-II-III та ID-DiaCell I-Ii-III P фірми DiaMed готові до застосування без попереднього відмивання та обробки Розчином для розведення 2.

• Інтерпретація результатів [показати] .

  Позитивна реакція означає наявність у досліджуваному зразку імунних антитіл.

  Якщо має місце позитивна реакціяз усіма еритроцитами панелі ID-DiaCell, рекомендується виконувати аутоконтроль для виключення аутоантитіл у досліджуваному зразку.

  Якщо з одним або більше видом еритроцитів панелі ID-DiaCell реакція залишається негативною, специфічність антитіл може бути встановлена ​​за допомогою супровідного листа таблиці антигенних профілів, що додається до всіх упаковок ID-DiaCell. При цьому необхідно переконатися, що номери панелі ID-DiaCell1 та супровідного листа збігаються.

  Якщо дана панель не дозволяє встановити специфічність антитіл, рекомендується продовжити ідентифікацію за допомогою розширеної панелі еритроцитів ID-DiaРanel та/або ID-DiaРanel Р (залежно від спочатку використаної методики).

Скринінг та ідентифікація антитіл

Скринінг антитіл виконується як в нейтральному гелі, так і гелі, що містить антиглобуліновий реагент (табл. 18.15-18.16 [показати] ). У першому випадку для дослідження використовуються оброблені ферментом еритроцити, у другому – суспензія еритроцитів у розчині низької іонної сили. Скринінг та ідентифікація антитіл виконуються за допомогою стандартної панелі еритроцитів. При оцінці ефективності гелевого тесту для скринінгу та ідентифікації антитіл було встановлено його більш високу чутливість порівняно з традиційними методиками.

Методи дослідження антитіл до антигенів еритроцитів

• Антиглобуліновий тест ( непряма реакціяКумбса) [показати] .

  Непрямий антиглобуліновий тест (НАТ) використовується для виявлення антиеритроцитарних антитіл. Зазвичай НАТ виконується у два етапи:

  1. інкубація еритроцитів і сироватки (фіксація антитіл) з подальшим відмиванням для видалення глобулінів, що не зв'язалися; Постановка непрямого антиглобулінового тесту в гелевому тесті не вимагає відмивання еритроцитів!
  2. інкубація відмитих еритроцитів із антилюдським глобуліном (АЧГ). Аглютинація свідчить про наявність у сироватці антитіл, що зв'язалися з антигенами еритроцитів in vitro.

  НАТ використовується для:

  1. визначення у сироватці реципієнта антитіл до еритроцитів донора - при постановці проби на сумісність;
  2. при скринінгу "несподіваних" антиеритро-цитарних антитіл;
  3. при дослідженні антиеритроцитарних антитіл у вагітних;
  4. при дослідженні антитіл у сироватці хворих на аутоімунну гемолітичну анемію.

  Хід визначення:

  • внести три розташовані зліва пробірки ID-карти по 50 мкл суспензії типованих еритроцитів;
  • додати до пробірок по 25 мкл досліджуваної сироватки;
  • центрифугувати ID-картки протягом 10 хв;
  • оцінити результати дослідження. Вписати отриманий результат у ID-картку.

  Результати визначення:

  • позитивний результат свідчить про наявність імунних (алло) антитіл у досліджуваній сироватці або плазмі (для з'ясування специфічності антитіл використовується таблиця, що додається до стандартних еритроцитів);
  • негативний результат свідчить про відсутність імунних антитіл у досліджуваній сироватці чи плазмі.
• Ферментний метод [показати] .

  Обробка протеолітичними ферментами підвищує аглютинабельність еритроцитів.

  Хід визначення:

  • внести в розташовані праворуч три пробірки ID-картки по 50 мкл суспензії стандартних типованих еритроцитів;
  • додати до пробірок по 25 мкл Розчину для розведення 1;
  • додати в пробірки по 25 мкл сироватки, що досліджується.

  Примітка: Розчин для розведення 1 не додається, якщо для дослідження використовують стандартні типовані еритроцити, попередньо оброблені протеолітичним ферментом (наприклад, ID-DiaCell I-II-III P фірми DiaMed).

  • інкубувати протягом 15 хв за температури +37°С;
  • центрифугувати ID-картки в Ш-цент-рифузі протягом 10 хв (параметри встановлені автоматично);
  • вписати отриманий результат до ID-картки.

  Результати дослідження:

  • позитивний результат свідчить про наявність алоантитіл у досліджуваній сироватці або плазмі (для з'ясування специфічності антитіл використовується таблиця, що додається до стандартних еритроцитів);
  • негативний результат свідчить про відсутність алоантитіл у досліджуваній сироватці чи плазмі.
• Метод холодової аглютинації [показати] .

  Хід визначення:

  • Розчин для розведення 2, типовані еритроцити і ID-карти протягом 30 хв при температурі 2-8°С;
  • обробити типовані еритроцити Розчином для розведення 2, для чого:
    • промаркувати пробірку;
    • приготувати 0,8% завись типованих еритроцитів в розчині для розведення 2, помістивши в пробірку 1,0 мл розчину для розведення 2 і 10 мкл крові.

  Примітка: стандартні еритроцити ID-DiaCell (фірми DiaMed) готові до використання та не потребують розведення;

  • внести три розташовані праворуч пробірки ID-карти по 50 мкл суспензії типованих еритроцитів, оброблених Розчином для розведення 2;
  • додати ці пробірки по 25 мкл досліджуваної сироватки;
  • інкубувати протягом 30 хв при температурі 2-8°С;
  • центрифугувати ID-картки в ID-центрифузі протягом 10 хв (параметри встановлені автоматично);
  • оцінити результат дослідження;
  • вписати отриманий результат до ID-картки. Результати дослідження:
  • позитивний результат свідчить про наявність холодових антитіл у досліджуваній сироватці або плазмі (для з'ясування специфічності антитіл використовується таблиця, що додається до стандартних еритроцитів);
  • негативний результат свідчить про відсутність холодових антитіл у досліджуваній сироватці чи плазмі.

  За наявності в досліджуваній сироватці холодових або теплових аутоантитіл можуть спостерігатися хибнопозитивні результати. Для виключення їх необхідно встановити аутоконтроль:

  • приготувати 0,8% завись еритроцитів досліджуваної крові в розчині для розведення 2, додавши до 1,0 мл розчину для розведення 2 10 мкл цільної крові;
  • внести по 50 мкл приготовленої суспензії еритроцитів в пробірку ID-карти, розташовану зліва (для реакції Кумбса), або в пробірку ID-карти, розташовану праворуч (для ферментного методу та холодової аглютинації);
  • в пробірки ID-карти внести по 25 мкл досліджуваної сироватки (для ферментного методу необхідно внести в пробірки ще по 25 мкл розчину для розведення 1);
  • картки інкубувати 15 хв при температурі +37°С (для реакції Кумбса та ферментного методу) або при температурі 2-8°С (для постановки аутоконтролю холодової аглютинації).

  Позитивний результат в аутоконтролі свідчить про присутність у досліджуваній сироватці аутоантитіл.

Визначення сумісності крові донора та реципієнта

Метою проби на індивідуальну сумісність є запобігання трансфузіям гемокомпонентів, несумісних антигенів еритроцитів. Тестування сироватки реципієнта з еритроцитами передбачуваного донора - найбільш надійний спосіб виявлення антитіл, здатних викликати ушкодження перелитих еритроцитів, посттрансфузійні реакції та ускладнення гемолітичного типу. Проведення такої проби дозволяє:

1. підтвердити АВО-сумісність донора та реципієнта;
2. виявити антитіла у сироватці реципієнта, спрямовані проти антигенів еритроцитів донора.

Тестування на індивідуальну сумісність крові донора та реципієнта з антигенів еритроцитів (табл.18.17 [показати] ) не замінює обов'язкове імуногематологічне дослідження (типування антигенів еритроцитів систем АВО, Резус, Келл, виявлення антиеритроцитарних антитіл, пошук та ідентифікацію алоантіеритроцитарних антитіл), а лише доповнює його.

Зважаючи на те, що сенсибілізація може з'явитися навіть після трансфузій індивідуально підібраних гемокомпонентів, для проведення проб на сумісність необхідно використовувати щоразу свіжу сироватку пацієнта, отриману після останньої трансфузії гемокомпонентів.

Проба на сумісність має бути проведена для кожного зразка крові донора!

• Хід визначення [показати]
  • Розчин для розведення 2 до досягнення кімнатної температури (20-24°С);
  • промаркувати ID-карти та пробірки (П.І.Б. донора та реципієнта);
  • приготувати 0,8% суспензію еритроцитів донора і реципієнта в Розчині для розведення 2 для чого в дві марковані пробірки внести по 1 мл Розчину для розведення 2 додати по 10 мкл крові донора і реципієнта, відповідно;
  • змішати;
  • зняти захисну фольгу з відповідної ID-картки;
  • додати по 50 мкл приготовленої суспензії еритроцитів донора мікропробірки ID-карти 1, 2, 3, 4, 5;
  • додати по 50 мкл приготовленої суспензії еритроцитів реципієнта мікропробірки ID-карти 4, 5, 6;
  • додати по 25 мкл сироватки або плазми реципієнта мікропробірки ID-карти 1, 2, 3, 6;
  • додати 25 мкл Розчину для розведення 1 мікропробірку ID-карти 4 (ферментний тест);
  • інкубувати 15 хв за температури +37°С;
  • центрифугувати (час та швидкість центрифугування постійні та задані автоматично);
  • оцінити результати дослідження. Сумісність з антигенами А, В, D (1, 2, 3 мікропробірки):
  • чіткий позитивний чи негативний результат свідчить про відповідність антигенів А, У, Про еритроцитів крові донора і реципієнта;
  • якщо спостерігається подвійна популяція еритроцитів (в одній мікропробірці позитивний та негативний результат) антигени А, В, D донора та реципієнта не ідентичні!
  • визначення сумісності за антигенами А, В, D дійсне лише при негативній реакції у 6-ій мікропробірці (аутоконтроль).
• Результати проби на сумісність (4, 5 мікропробірки) [показати]
  • позитивний результат у мікропробірках ID-карт 4, 5 при негативному контролі (мікропробірка 6) свідчить про несумісність крові донора та реципієнта за антигенами еритроцитів;
  • негативний результат у мікропробірках ID-карт 4, 5, 6 свідчить про сумісність крові донора та реципієнта за антигенами еритроцитів;
  • позитивна реакція в мікропробірці ID-карти 6 (аутоконтроль) вимагає подальшого визначення ауто- та алоантитіл у сироватці (плазмі) реципієнта.
• Обмеження [показати]
  • певні лікарські засобиможуть викликати хибно-позитивну реакцію Кумбса;
  • за деяких патологічних станаху хворих може спостерігатись позитивна реакція Кумбса;
  • бактеріальне або інше забруднення використовуваного матеріалу може викликати хибнопозитивний або хибнонегативний результат;
  • залишки фібрину в досліджуваних зразках можуть пов'язувати неаглютиновані клітини і після центрифугування утворювати тонку рожеву лінію на поверхні гелю, тоді як більшість клітин буде локалізовано на дні мікропробірки;
  • суспензії еритроцитів, що мають надмірну концентрацію, можуть викликати хибно-позитивні реакції.
• Умови зберігання та експлуатації [показати]

  ID-картки ДіаМед повинні зберігатися при кімнатній температурі (+18-25°С) у сухому приміщенні протягом усього терміну придатності.

  Термін придатності карток – 18 місяців. Термін придатності реагентів – 2 роки.

  Результати дослідження на карті зберігаються у незмінному вигляді:

  • 48 годин при кімнатній температурі;
  • три тижні у холодильнику (при +2-8°С) при заклеєній липкою стрічкою верхньої частини ID-картки.

  Нижнє поле ID-карти можна відклеїти або відрізати та використовувати як документ в історії хвороби чи картотеці.

  Не допускається використання ID-карток з ознаками висихання гелю, бульбашками у його товщі або пошкодженням захисної фольги.

  Перед використанням зразки та реагенти мають бути витримані до кімнатної температури.

Висновок

Гелевий тест є простим, відтворюваним, швидким і дуже чутливим методом, що дозволяє одразу виявляти слабкі варіанти антигенів еритроцитів. Тест оцінюється лише макроскопічно. Після короткого навчання персоналу, необхідного для правильного виконаннятесту, зводяться до мінімуму витрати робочого дня і помилки, які при використанні традиційних методик.

Гелевий тест дозволяє стандартизувати лабораторні методикидати об'єктивну оцінкурезультатів реакції гемаглютинації. Стабільність результатів тесту дозволяє перевіряти ще раз отримані дані, що необхідно для контролю. Результати тесту можуть бути фотокопійовані для збереження їх в архіві або для навчальних цілей у випадках, що складно діагностуються. Для тесту використовується невелика кількість сироватки або еритроцитів, що є надзвичайно важливим для педіатричних клінік.

Використання гелевої системи дозволяє знизити ризик зараження персоналу навіть під час роботи з потенційно інфікованими зразками. Гелевий тест може бути використаний для проведення проб на сумісність антигенів еритроцитів перед переливанням крові. Для цього використовуються непрямий антиглобуліновий тест та одностадійний ферментний метод.

Гелевий тест виконується та оцінюється за наведеними вище правилами. Відсутність етапів відмивання еритроцитів під час виконання непрямого атиглобулінового тесту дозволяє ефективніше використовувати робочий час, а також завдяки стабільності результатів тесту контролювати усі отримані результати.

Джерело: Медична Лабораторна діагностика, програми та алгоритми. За ред. проф. Карпіщенко А.І., СПб, Інтермедика, 2001

Підбір донорів проводять за єдиними медичними критеріями, що забезпечує нешкідливість, високу активністьта ефективність крові та її компонентів.

Кожен донор перед здаванням крові проходить обстеження: у нього збирають анамнез, проводять ретельний медичний огляд та спеціальне обстеженнядля виявлення протипоказань до здачі крові та виключення можливості передачі з кров'ю збудників інфекційних захворювань. Проводять серологічне, вірусологічне та бактеріологічне обстеження. донорської крові.

Успіхи клінічної трансфузіології знижують небезпеку передачі з кров'ю та її компонентами збудників інфекційних захворювань (ВІЛ-інфекції, гепатитів В та С, сифілісу, цитомегаловірусної інфекції та ін.).

Основні антигенні системи крові

Встановлено, що антигенна структура крові людини складна, всі формові елементи крові та білки плазми різних людей відрізняються за антигенами. Вже відомо близько 500 антигенів крові, що утворюють понад 40 різних антигенних систем.

Під антигенною системою розуміють сукупність антигенів крові, успадкованих (контрольованих) алельними генами.

Усі антигени крові ділять на клітинні та плазмові. Основне значення у трансфузіології мають клітинні антигени.

Клітинні антигени

Клітинні антигени – складні вуглеводно-білкові комплекси (глікопептиди), структурні компоненти мембрани клітин крові. Від інших компонентів клітинної мембранивони відрізняються імуногенністю та серологічною активністю.

Імуногенність -здатність антигенів індукувати синтез антитіл, якщо вони потрапляють до організму, у якого ці антигени відсутні.

Серологічна активність -здатність антигенів поєднуватися з однойменними антитілами.

Молекула клітинних антигенівскладається з двох компонентів:

Шлеппер (білкова частина антигену, розташована у внутрішніх шарах мембрани), що визначає імуногенність;

Гаптен (полісахаридна частина антигену, розташована в поверхневих шарах клітинної мембрани), що визначає серологічну активність.

На поверхні гаптена розташовані антигенні детермінанти (епітопи) – молекули вуглеводів, до яких приєднуються антитіла. Відомі антигени крові відрізняються один від одного епітопами.

Наприклад, гаптени антигенів системи АВ0 мають наступний набір вуглеводів: епітоп антигену 0 – фукозу, антигену А – N-ацетилгалактозамін, антигену В – галактозу. З ними і поєднуються групові антитіла.

Розрізняють три види клітинних антигенів:

Еритроцитарні;

Лейкоцитарні;

Тромбоцитарні.

Еритроцитарні антигени

Відомо понад 250 антигенів еритроцитів, що утворюють понад 20 антигенних систем. Клінічне значення має 11 систем: АВ0, Резус (Rh-Hr), MNSs, Келл (Kell), Лютеран (Lutheran), Кідд (Kidd), Дієго (Diego), Даффі (Duffy), Домброк (Dombrock), ферментні групи еритроцитів .

Людина в еритроцитах присутні одночасно антигени кількох антигенних систем.

Основними в трансфузіології визнані антигенні системи АВ0 та Резус. Інші антигенні системи еритроцитів нині істотного значення у клінічній трансфузіології немає.

Антигенна система АВ0

Система АВ0 - основна серологічна система, що визначає сумісність або несумісність крові, що переливається. Її складають два генетично детермінованих аглютиногену (антигени А і В) і два аглютиніни (антитіла α і β).

Аглютиногени А і В містяться в стромі еритроцитів, а аглютиніни α і β - у сироватці крові. Аглютинін - антитіло по відношенню до аглютиногену А, а аглютинін - по відношенню до аглютиногену В. В еритроцитах і сироватці крові однієї людини не може бути однойменних аглютиногенів і аглютинінів. При зустрічі однойменних антигенів та антитіл виникає реакція ізогемаглютинації. Саме ця реакція – причина несумісності крові при гемотрансфузії.

Залежно від поєднання в еритроцитах антигенів А та В (і відповідно у сироватці антитіл α та β) всіх людей поділяють на чотири групи.

Антигенна система Резус

Резус-фактор (Rh-фактор), названий так внаслідок того, що вперше був виявлений у макак резус, є у 85% людей, а у 15% відсутній.

В даний час відомо, що система Резус є достатньо складною і представлена ​​п'ятьма антигенами. Роль резус-фактора при гемотрансфузії, а також при вагітності дуже велика. Помилки, що призводять до розвитку резус-конфлікту, викликають важкі ускладнення, а іноді й смерть хворого.

Другорядні антигенні системи

Другорядні еритроцитарні групові системи представлені великою кількістю антигенів. Знання цієї множини систем має значення для вирішення деяких питань в антропології, судово-медичних досліджень, а також для запобігання розвитку посттрансфузійних ускладнень та деяких захворювань у новонароджених.

Система MNSsвключає фактори М, N, S, s. Доведено наявність двох тісно зчеплених між собою генних локусів MN та Ss. Надалі виявлено інші різноманітні варіанти антигенів системи MNSs. За хімічною структурою MNSs – глікопротеїди.

Система Р.Система антигену Р має певне клінічне значення. Відзначено випадки ранніх та пізніх викиднів, причиною яких стали ізоантитіла анти-Р.Описано кілька випадків посттрансфузійних ускладнень, пов'язаних із несумісністю донора та реципієнта за системою антигенів Р.

Система Келлпредставлена ​​трьома парами антигенів. Найбільшу імуногенну активність мають антигени Келл (К) і Челлано (к). Антигени системи Келл можуть викликати сенсибілізацію організму під час вагітності та при переливанні крові, ставати причиною гемотрансфузійних ускладнень та розвитку гемолітичної хвороби новонароджених.

Система Лютеран.Один із донорів на прізвище Лютеран мав в еритроцитах крові якийсь раніше невідомий антиген, що призвів до імунізації реципієнта. Антиген був позначений буквами Lu а. Через кілька років було відкрито другий антиген цієї системи Lu b. Їх частота: Lu а – 0,1%, Lu b – 99,9%. Антитіла анти-Lu b ізоімунні, що підтверджено і повідомленнями про значення цих антитіл у походження гемолітичної хвороби новонароджених. Клінічне значення антигенів системи Лютеран невелике.

Система Кідд.Антигени та антитіла системи Кідд мають певне практичне значення. Вони можуть бути причиною розвитку гемолітичної хвороби новонароджених та посттрансфузійних ускладнень при багаторазовому переливанні крові, яка не сумісна з антигенами цієї системи. Частота антигенів становить близько 75%.

Система Дієго.У 1953 р. у Венесуелі в сім'ї Дієго народилася дитина з ознаками гемолітичної хвороби. При з'ясуванні причини цього захворювання у дитини виявили раніше невідомий антиген, позначений фактором Дієго (Di). У 1955 р. проведені дослідження виявили, що антиген Дієго - расова ознака, характерна для народів монголоїдної раси.

Система Даффіскладається з двох основних антигенів - Fy а та Fy b. Антитіла анти-Fy а - неповні антитіла, вони виявляють свою дію лише у непрямому антиглобуліновому тесті Кумбса. Пізніше були виявлені антигени Fy x, Fy 3, Fy 4, Fy 5. Частота залежить від расової приналежності людини, що має значення для антропологів. У негроїдних популяціях частота фактора Fy a – 25%, серед китайського населення, ескімосів та аборигенів Австралії – майже 100%, у людей європеоїдної раси – 60-82%.

Система Домброк.У 1973 р. були виявлені антигени Do а та Do b. Фактор Do а зустрічають у 55-60% випадків, а фактор Do b – у 85-90%. Така частота висуває цю серологічну систему крові на п'яте місце з інформативності в аспекті судово-медичного визначення батьківства (Резус, MNSs, AB0 і Даффі).

Ферментні групи еритроцитів.Починаючи з 1963 р. стала відома значна кількість генетично-поліморфних ферментних систем еритроцитів крові людини. Ці відкриття відіграли значну роль у розвитку загальної серології груп крові людини, а також у аспекті судово-медичної експертизи спірного батьківства. До ферментних систем еритроцитів відносять фосфатглюкомутазу, аденозиндезаміназу, глутамат-піруват-трансаміназу, естеразу-Д та ін.

Алоімунні антитіла- Антитіла до антигенів еритроцитів. Основні показання до застосування: профілактика резус-конфлікту при вагітності, невиношування вагітності, гемолітична хвороба новонароджених, переливання крові з метою профілактики посттрансфузійних ускладнень.

В еритроцитах людини міститься велика кількість групових антигенів, що утворюють групові системи, що складаються з однієї або декількох пар антигенів. Відомі такі групові системи крові, як - АВ0, резус-фактор, Келл, Левіс (Lewis), Кідд, MNSs, Даффі, Дієго та інші.
Алоімунні антиеритроцитарні антитіла - антитіла до резус-фактору та інших еритроцитарних антигенів, що з'являються в крові після переливання несумісної донорської крові або вагітності. Поява в сироватці крові алоімунних антитіл свідчить про сенсибілізацію організму та збільшення ризику ускладнень при переливанні несумісної крові, наявності ризику невиношування вагітності та розвитку гемолітичної хвороби плода у резус- негативної жінкипри резус-позитивної крові у плода.
Резус - антитіла відносяться до так званих алоімунних антитіл, оскільки з'являються в крові резус - негативних людейлише за особливих умов. Умовами, що сприяють утворенню резус - антитіл, є введення резус - негативній людинірезус – позитивної крові або вагітність резус – негативної жінки резус – позитивним плодом. Аллоантитіла містяться у сироватці індивіда і взаємодіють з антигенами власних еритроцитів. Вони взаємодіють з антигенами еритроцитів інших пацієнтів після переливання крові або вагітності.
Визначення резус – антитіл поряд з визначенням резус – приналежності хворого та донора необхідне для попередження переливання резус – несумісної крові, а також для діагностики можливого захворюванняплода чи новонародженого гемолітичною хворобою. Визначення резус - антитіл потрібно також при підготовці матеріалу з метою використання для приготування сироваток антирезус. Резус - антитіла бувають різні за специфічністю: анти-D, анти-С, анти-Е, анти-с, анти-е; та за формою: повні та неповні. Специфіка антитіл визначається тим, з яким із антигенів вони реагують. Форма антитіл визначається тим, як вони реагують з еритроцитами, містять специфічні їм резус - антигени. Повні антитіла, з'єднуючись з резус-антигенами еритроцитів, викликають аглютинацію цих еритроцитів при реакції в сольовому середовищі. Неповні антитілау умовах лише з'єднуються з еритроцитами, але з викликають аглютинації, отже зовні ця реакція нічим не проявляється. Для того, щоб встановити, чи відбулася реакція між неповними резус - антитілами та еритроцитами, необхідні спеціальні умовизокрема, додавання різних колоїдів (желатин, поліглюкін) або проведення проби Кумбса. За всіх перерахованих умов реакція між резус - антитілами та еритроцитами, що містять резус - антиген, зрештою також проявляється у вигляді аглютинації еритроцитів.
Антигени системи резус мають білкове походження. Одною з характерних рисданої системи є виражений поліморфізм, що зумовлює наявність багатьох різновидів антигенів. В еритроцитах людини виявляється велика кількість антигенів та їх систем – D, Du, C, c, E, e, Cw, M, N, S, Kell, Kidd, Duffy, Diego та інші. Найбільше клінічне значення нині мають антигени з групи резусів Rh (5 основних) – D, C, c, E, e, і навіть антигени системи Kell (антигени – До, до, Кu та інших.). Антиген D і є, так званий, резус-фактор (Rh) . 86% населення Російської Федераціївідносять до резус-позитивних (Rh+). Інші 14% населення є резус-негативними (Rh-). Резус-негативними вважають донорів, кров яких містить жодного з антигенів – D, C і E. Антиген D має різновиду, звані, «слабкі» варіанти, які становлять групу – Du і які з частотою 1%. Донори, що містять Du, мають бути віднесені до резус-позитивних. Це необхідно враховувати при переливанні крові, щоб уникнути гемотрансфузійних ускладнень.

Виявити такі антигени можна, застосовуючи спеціальні методи.
В основі тесту лежить імунологічна особливість еритроцитів групи 0 – вони не несуть на собі ні А-, ні В-антигенів. Тому будь-яка аглютинація при додаванні до них сироватки пацієнта буде зумовлена ​​присутністю в ній нетипових антитіл. Відсутність аглютинації свідчить про їх відсутність.
У ряді випадків до даних антигенів в організмі людини починається вироблення антитіл (аллоімунних антитіл). Такий стан частіше спостерігається при вагітності та переливанні крові. Під час вагітності у резус-негативної матері резус-позитивного плода може розвинутись резус-конфлікт, що полягає в утворенні антитіл в організмі матері до еритроцитів плода, що сприяє руйнуванню еритроцитів плода. Такий конфлікт може призводити до викидня або гемолітичної анеміїплоду. Якщо плід резус-негативний у резус-позитивної матері, то резус-конфлікт не розвивається. Найбільший ризик можливий при вагітності, якщо мати належить до першої групи крові та резус-негативна, а батько – першої групи та резус-позитивний. У цьому випадку є один шанс із чотирьох, що дитина буде резус-позитивною.
Будь-який з вище перерахованих антигенів при попаданні в кров антиген-негативної матері (що не містить різні видиеритроцитарних антигенів) може спричинити появу аутоантитіл та ускладнювати перебіг вагітності. Імуногенність основних антигенів системи-резус зменшується в порядку: с-Е-С-е.

Для профілактики резус-конфлікту при вагітності резус-негативні жінки повинні перебувати на обліку в жіночих консультаціяхі проходити періодичні обстеження на появу алоімунних антитіл (частіше визначають антитіла до резус-фактору), оскільки ризик розвитку резус конфлікту у цій ситуації може становити до 15%.