Проба Кумбс при діагностиці гемолітичної хвороби новонароджених. Типи та причини проведення проби кумбсу Проба кумбса позитивна що

Гемолітичні анемії, Викликані аутоімунними тілами, які спрямовані проти власних еритроцитів, точно не з'ясовані. Однак передбачається, що якісь фактори (наприклад, вірус, ненормальний білок) так змінюють еритроцити, що організм сприймає їх уже як щось чуже і вступає з ними в боротьбу за допомогою антитіл. За іншою теорією, спрямовані проти еритроцитів антитіла виникають майже випадково в процесі утворення ненормальних білкових тіл плазми при деяких хворобах. Такі білкові тіла, так само «випадково», можуть дати реакції, які можна використовувати для встановлення діагнозу (наприклад, вірусна пневмонія, як відомо, дає позитивну реакцію Вассермана, позитивну реакцію Пауль - Буннеля і реакцію холодової аглютинації).

Є два головного типу аутоантитілпри гемолітичних анеміях, а саме: теплові антитіла (реагують при 37°) та холодові антитіла (реактивна здатність яких посилюється при наближенні температури до нуля). Теплові антитіла зустрічаються частіше за Холодові. Dacie виявив, що теплові гемолізини зустрічаються в 2 рази частіше, ніж холодові. Гемолізини та аглютиніни не є принципово різними антитілами: вони відрізняються лише характером їхньої дії. Аглютинини аглютинують еритроцити, а гемолізини роблять їх більш схильними до складного процесу гемолізу (комплемент!). Аутоантитіла, фіксуючись на еритроцитах, утворюють комплекс еритроцитів – глобін. Цей комплекс виявляється за допомогою антиглобінової проби Кумбса.

Проба Кумбсапроводиться із сироваткою Кумбса, для приготування якої сенсибілізують кролика сироваткою людини, проти якої у сироватці кролика утворюються антитіла. При дії такої сенсибілізованої сироватки на еритроцити людини настає їхня аглютинація, якщо рецептори еритроцитів зайняті блокуючими антитілами. Так як ці блокуючі антитіла походять із сироватки людини, вони дають аглютинацію із сироваткою кролика, сенсибілізованою до плазми людини і містить преципітини. Ця реакція названа пробою Кумбса; для гемолітичної анемії на ґрунті аутоімунних тіл (Lo tit) вона майже специфічна (подробиці див. у Maier).

Загалом при гемолітичних анеміяхз первинним порушенням еритроцитів проба Кумбса негативна, а при набутих – позитивна. Однак з цього правила є деякі винятки: хибнопозитивна проба Кумбса знайдена при кризах конституційних гемолітичних анемій, а слабкою мірою - також іноді після спленектомії, при ревматичному поліартриті, саркоїдозі, після частих переливань крові і при системному червоному вовчаку. Природно, що з набутих гемолітичних анеміях без утворення аутоімунних тіл вона негативна.

Гемолітичні анемії, Викликані аутоімунними тілами, можна підрозділити на:
а) гострі, підгострі та хронічні форми, а також на
б) ідіопатичні з невідомою етіологією та в) симптоматичні [вірусна пневмонія (тільки холодові аглютинини) (переважно теплові, рідше холодові агглютини) iescher з співробітниками)).
в) симптоматичні [вірусна пневмонія (тільки холодові аглютинини), хронічний лімфатичний лейкоз, ретикулосаркома, лімфосаркома, системний червоний вовчак (переважно теплові, рідше холодові аглютинини), сифіліс (холодові аглютини)

Клініка гемолітичних анемій, що розвиваються під дією аутоімунних тіл, дуже різноманітна, і навряд чи тому можна намалювати їхню загальну клінічну картину. Уражаються особи різного віку та обох статей поступово. Все ж таки ідіопатичні форми начебто частіше спостерігаються у жінок (Sacks і Workman).

Клінічна картина ідіопатичної формизмінюється залежно від тяжкості захворювання. У хронічних випадках початок поступово, хвороба тягнеться багато років із частими загостреннями. Тяжкість анемії різна в залежності від ступеня гемолізу. Спостерігаються падіння гемоглобіну до 10%, в інших випадках гемоглобін довго утримується на 50-60%. Інтенсивність ретикулоцитозу та жовтяничного забарвлення шкіри та сироватки відповідає ступеню гемолізу. Білірубін у сечі знаходять дуже рідко, оскільки він не проходить через нирки, але гемоглобінурія спостерігається. Селезінка в хронічних випадках частіше збільшена і може навіть досягати дуже значних розмірів, в інших випадках вона ще промацується. Печінка рідко коли не збільшена.

У крові у більшості випадківспостерігається макроцитоз, у гострих стадіях також багато мікроцитів, рідко відсутні нормобластоз та поліхромазія, лейкоцитоз може досягати 30 000, тромбоцити в нормі. У деяких випадках, однак, є виражена тромбоцитопенія. Evans пояснює ці випадки одночасною наявністю антитіл проти тромбоцитів, так що є одночасно гемолітична анемія і тромбоцитопенія на грунті дії аутоімунних тіл-синдром Еванса (Evans). Осмотична резистентність злегка знижена, але не такою мірою і не так постійно, як при конституціональній кулястоклітинній анемії. Проба на стійкість до нагрівання (Hegglin-Maier) після 6 годин також може дати незначний гемоліз (власне спостереження), але меншою мірою, ніж анемія Маркіафава. У сечі знаходять також гемосидерин (власне спостереження).

Антиглобуліновий тест, або реакція Кумбсапроводиться для того, щоб виявити певні антитіла, що атакують червоні кров'яні клітини (еритроцити).

Антитіла це білки, що виробляються імунною системою. Як правило, антитіла зв'язуються зі сторонніми речовинами, такими як бактерії та віруси, та знищують їх.

2. Навіщо потрібний тест на антитіла?

Тест на антитіла може проводитись у таких випадках:

Перед переливанням крові

Ви, напевно, знаєте, що у людини може бути одна з чотирьох груп крові. І антиглобуліновий тест можна проводити визначення можливості переливання крові. Якщо вам роблять переливання, кров донора повинна відповідати вашому типу (мати однакові антигени). Якщо при переливанні антигени відрізняються, імунна система зруйнує перелиті клітини. Це може призвести до серйозних захворювань і смерті. Саме тому пошук потрібного типу крові є важливим чинником.

Для виявлення ризику резус-сенсибілізації

Резус – це антиген. Його повна назва – резус-фактор. Тест Кумбса використовується виявлення антитіл до резус-фактору в крові у вагітних жінок. Якщо жінка з негативним резус-фактором крові вагітна дитиною з позитивним резус-фактором (він може передаватися від батька), є ризик настання резус-сенсибілізації. Резус-сенсибілізація відбувається, коли кров дитини поєднується з кров'ю матері під час вагітності або пологів. Якщо група крові матері несумісна з групою крові дитини, її імунна система може атакувати плід, сприймаючи його чужорідним об'єктом. При цьому може розвинутись тяжке захворювання, яке називається еритробластозою плода. У поодиноких випадках, якщо захворювання не лікувати, плід або новонароджений можуть загинути.

Жінці з негативним резус-фактором крові можуть провести ін'єкцію анти-Rh-гаммаглобуліну (наприклад, RhoGAM), який використовується для запобігання розвитку Rh-гемолітичної хвороби.

Для діагностики аутоімунної гемолітичної анемії

Автоімунна гемолітична анемія є рідкісним захворюванням, пов'язаним з утворенням антитіл до власних антигенів еритроцитів.

3. Типи антиглобулінової проби

Існують два типи антиглобулінової проби, або реакції Кумбса: прямий та непрямий.

Пряма реакція Кумбса, або прямий антиглобуліновий тествиявляє антитіла, пов'язані з еритроцитами. Він використовується визначення анемії. За цієї хвороби еритроцити руйнуються швидше, ніж виробляються.

Непряма реакція Кумбса, або непрямий антиглобуліновий тестпроводиться для пошуку антитіл, не пов'язаних із еритроцитами. Для проби використовується сироватка крові, в якій знаходяться антитіла. Ця процедура досить рідкісна: переважно її проводять визначення можливості переливання крові чи як етап обстеження вагітних жінок.

4. Результати реакції Кумбса

Норма:

Негативний результат тесту – антитіла не виявлено.

• Прямий тест Кумбса. Негативний результат прямого антиглобулінового тесту означає, що ваша кров не має антитіл, пов'язаних із еритроцитами.
• Непрямий тест Кумбса. Негативний результат непрямого антиглобулінового тесту означає, що ваша кров сумісна з кров'ю донора. Для вагітної жінки такий результат означає, що її організм не виробив антитіла проти резус-позитивного типу крові своєї дитини (резус-сенсибілізації не сталося).

Відхилення від норми:

• Прямий тест Кумбса. Позитивний результат прямого антиглобулінового тесту означає, що ваша кров має антитіла, які борються проти еритроцитів. Це може бути спричинене переливанням несумісної крові або такими захворюваннями, як гемолітична анемія або гемолітична хвороба новонароджених (ГБН).
• Непрямий тест Кумбса. Позитивний результат непрямого антиглобулінового тесту означає, що кров несумісна з кров'ю донора. У вагітної жінки такі результати означають наявність антитіл проти позитивного резус-фактора крові дитини (резус-сенсибілізація). Якщо дитина має позитивний резус-фактор крові, мати уважно спостерігатиметься лікарем протягом усієї вагітності.

Coombs test

Пряма проба Кумбса - антиглобуліновий тест (аглютинація в гелі, що дозволяє виявити повні двовалентні антитіла), за допомогою якого визначають антитіла класу IgG і С3-компонент комплементу на поверхні еритроцитів. Зазвичай антитіла, що виявляються прямою пробою Кумбса, мають широку специфічність, не асоційовану з добре встановленим антигеном. Позитивна пряма проба Кумбса чітко вказує на наявність у хворого на гемолітичну анемію, хоча не всі хворі з позитивним прямим антиглобуліновим тестом страждають на це захворювання. Приблизно у 10% хворих антитіла або компоненти комплементу на мембрані еритроцитів не вдається визначити прямою пробою Кумбса (тест негативний), але вони страждають на аутоімунну гемолітичну анемію. Для уточнення специфічності антитіл у таких випадках використовують тести з їх елюцією. Пряма проба Кумбса, позитивна тільки до комплементу, зазвичай має відношення до холодових антитіл типу IgM. У цьому випадку антитіла IgM відсутні на еритроцитах при базальній температурі тіла. Однак внаслідок того, що антитіла IgM активно фіксують комплемент, і комплемент залишається на еритроцитах, при даній формі аутоімунної гемолітичної анемії (хвороба холодових аггютининов) проба Кумбса буде позитивна тільки до комплементу.

Пряма проба Кумбса позитивна при аутоімунній гемолітичній анемії, що викликається тепловими антитілами, аутоімунної лікарської анемії (при прийомі метилдопу до 20% хворих мають позитивну реакцію), лікарсько-адсорбційному типі гемолітичної анемії, імунокомплексному типі гемолітичної анемії аутоімунної гемолітичної анемії, що викликається холодовими антитілами - хвороби холодових аглютинінів (проба позитивна тільки по відношенню до С3). При пароксизмальній холодовій гемоглобінурії пряма проба Кумбса негативна.
У гострому періоді захворювання, у зв'язку з руйнуванням еритроцитів, на яких фіксувалася велика кількість антитіл, при гемолітичному кризі, а також за недостатньої кількості антитіл при хронічному перебігу хвороби може відзначатися негативна пряма проба Кумбса.

• Важливою умовою забезпечення якості лабораторного дослідження крові є взяття матеріалу натщесерце, в ранковий час (до 12:00).
• За 12 годин до дослідження слід виключити прийом алкоголю, куріння, їжу, обмежити фізичну активність.
• Вранці на день взяття крові на дослідження можна випити воду.
• Виключити прийом ліків; якщо скасувати прийом ліків неможливо, необхідно проінформувати про це лабораторію.
• Взяття матеріалу бажано проводити до будь-яких медичних діагностичних маніпуляцій.
• При оцінці рівня гормонів у жінок важливо враховувати день менструального циклу, коли оптимально визначати деякі гормони. Цю інформацію Ви можете отримати у лікаря.

На поверхні еритроцитів є велика кількість антигенів. Залежно від виду цих антигенів виділяють групи крові, найбільш вивчені групи - АВО, Rh, Kell, Duffy та багато інших.

Середня ціна у вашому регіоні: 2645 від 2645 … до 2645

1 лабораторій роблять цей аналіз у вашому регіоні

Опис дослідження

Підготовка до дослідження:Кров беруть із вени, а потім одержують сироватку (плазма крові без фібриногену) шляхом природного згортання або шляхом осадження фібриногену. Досліджуваний матеріал:Взяття крові

На поверхні еритроцитів є велика кількість антигенів. Залежно від виду цих антигенів виділяють групи крові, найбільш вивчені групи - АВО, Rh, Kell, Duffy та багато інших систем. У нормі в крові існують антитіла до антигенів іншої групи, але при переливанні крові, вагітності, аутоімунних захворюваннях та ін. виявляються антитіла до своїх антигенів. Неповні антитіла до еритроцитів

Метод

Непряма реакція Кумбса ґрунтується на виявленні аглютинації (злипання) еритроцитів, у яких на поверхні є неповні антитіла, що з'являється при додаванні антиглобулінової сироватки.

На першому етапі одну пробірку вносять донорські еритроцити (O(I) група, Rh+) ​​і досліджувану сироватку. Якщо неповні антитіла до еритроцитів присутні в сироватці, що досліджується, то вони фіксуються на поверхні донорських еритроцитів.

На другому етапі на скло наносять донорські еритроцити з антитілами (якщо вони були) та стандартну антиглобулінову сироватку з антитілами до людських імуноглобулінів. Якщо на першому етапі антитіла до еритроцитів зафіксувалися на поверхні еритроцитів, при додаванні стандартної сироватки еритроцити склеюються через взаємодію антитіл.

Референсні значення – норма
(Реакція Кумбса непряма (антиглобуліновий тест, виявлення неповних антиеритроцитарних антитіл), кров)

Інформація, що стосується референсних значень показників, а також сам склад показників, що входять до аналізу, може дещо відрізнятися залежно від лабораторії!

Норма:

У нормі антитіл до власних еритроцитів повинно бути, при постановці реакції Кумбса агрегації еритроцитів немає.

Показання

Дослідження гуморального специфічного імунітету при підозрі на аутоімунні реакції в організмі, резус-конфлікт між матір'ю та плодом, визначення сумісності крові донора та реципієнта

Підвищення значень (позитивний результат)

Антитіла до еритроцитів виявляють при:

1. Аутоімунних гемолітичних анеміях

2. Гемолітична хвороба новонароджених

3. Системні захворювання сполучної тканини

4. Хронічному активному гепатиті та ін.

Принцип антиглобулінового. Антиеритроцитні антитіла неповного типу та молекули комплементу (С), що знаходяться на поверхні еритроцитів, виявляють - прямий тест - їх аглютинацією в контакті з тваринною сироваткою, що містить антитіла на людський антиглобулін (антиглобулінова сироватка). Вільні в сироватці неповні антитіла виявляються - опосередкований тест - їх закріпленням на суміші нормальних еритроцитів групи 0, всі антигени яких належать відомій резус-системі, далі аглютинова під впливом антиглобулінової сироватки.

Матеріали, реагенти антиглобулінового тесту Кумбса: пробірки на 10/100 мл; градуйовані піпетки на 1, 2 мл; пастерівські піпетки; штативи; предметне нешліфоване скло; 8,5‰ розчин NaCl; еритроцити. Еритроцити хворого, так само як і ті, що належать до групи 0, отримаємо зі свіжовідібраної крові на протизгортальній речовині (розчин ЕДТА).

Еритроцити групи 0 відібрати з таким розрахунком, щоб вони виходили від осіб у нормі та утримували всі антигени резус-системи. Їх можна зберігати до 7 днів в аутологічній плазмі при температурі +4°С. У разі відсутності еритроцитів групи 0, відомої антигенної мозаїки, можна використовувати суміш еритроцитів групи 0, резус-позитивних та резус-негативних еритроцитів.

Сироваткахворого має бути свіжовідібраною.

Антиглобулінова сироваткапровадиться інститутом ім. д-ра І. Кантакузіно, випускається в ліофілізованому вигляді в ампулах, що містять 1 мл. Після розчинення зберігати сироватку при температурі -20°С.

Техніка антиглобулінового тесту Кумбса:
а) Прямий тест Кумбса: еритроцити хворого промити 3 рази 8,5‰ розчином NaCl.
На кілька предметного скла нанести по великій краплі з розведень антиглобулінової сироватки, а поруч - по маленькій краплі з осаду еритроцитів хворого; перемішати краплі кутом скла. Приготовлений матеріал залишити на столі 5 хв, потім дослідити наявність агглютинатів. У разі позитивного результату визначити максимальний титан.

б) Непрямий тест Кумбса: еритроцити групи 0, резуспозитивні і резус-негативні промити 3 рази 8,5‰ розчином NaCl і піддати впливу сироватки хворого з розрахунку 2 краплі еритроцитів на 8-10 крапель сироватки, потім, протягом 60 хв., провести інкубацію при температурі З. Після цього тричі промити еритроцити і впливати на них антиглобулінової сироваткою, за вказівками для прямого тесту Кумбса.

Коли йдеться про холодові активні антитіласенсибілізацію еритроцитів групи 0 провести 60 хв. при температурі +4°С.

Примітка: 1) Не проводити прямий тест Кумбса на еритроцитах, збережених один або кілька днів при температурі +4°С або кімнатній температурі, оскільки результати можуть виявитися хибнопозитивними за рахунок фіксації неповних, активних на холоді антитіл, що є в нормальній сироватці. 2) У випадках вираженої гіперпротеїнемії промивати еритроцити 4-5 разів та перевірити відсутність сироваткових білків в останній промивній рідині за допомогою сулфосаліцилової кислоти.

Можливий залишок 2 мкг IgG/мл в еритроцитному осаді може нейтралізувати антиглобулінову сироватку. Тест Кумбса можна проводити і за допомогою моноспецифічних анти-IgG, -IgM, -IgA -С3 і -С4 сироваток з метою уточнення виду, що знаходяться на поверхні еритроцитів глиболін, наприклад, у хворих на аутоімунну гемолітичну анемію.