Головна · Дисбактеріоз · Цитологічний метод: особливості проведення, матеріал на дослідження. Методи цитологічних досліджень Цитологічний метод дослідження у біології

Цитологічний метод: особливості проведення, матеріал на дослідження. Методи цитологічних досліджень Цитологічний метод дослідження у біології

Цитологічні дослідження - це вивчення за допомогою мікроскопа особливостей будови клітин, клітинного складу органів, тканин, рідин організму людини та тварин у нормі та при різних захворюваннях.

Цитологічні методи дослідження, що застосовуються в медицині, багато в чому збігаються з гістологічними дослідженнями (дослідження тканини, взятої з хворого органу), але відрізняються тим, що для цитологічного дослідження потрібна незначна кількість біологічного матеріалу і він досліджується без попередньої підготовки та спеціальної апаратури лише під мікроскопом . Цитологічні дослідження проводять у тому випадку, коли неможлива чи небажана біопсія (наприклад, під час обстеження хворого за умов поліклініки).

За допомогою цитологічних досліджень оцінюють стан покривних тканин організму (шкіри та слизових оболонок – з цих тканин може формуватися рак), гормональну активність жінок, ступінь ураження пухлинних клітин при лікуванні злоякісних захворювань, процес загоєння ран та інші процеси.

Характер та спосіб отримання матеріалу для досліджень залежить від того, який орган або тканина уражені:

  • · При захворюваннях шкіри - це зіскрібки та відбитки з тканин;
  • · при захворюваннях щитовидної та молочної залоз, органів кровотворення – пунктати з ділянок ураження;
  • · При захворюваннях центральної нервової системи – спинномозкова рідина;
  • · При захворюваннях легень - мокротиння і таке інше.

Цитологічний метод полягає у визначенні структури клітин та особливостей хімічних процесів у них. Подібні дослідження найбільше широко використовують для виявлення злоякісного переродження клітин, у тому числі на передраковій стадії, для діагностики захворювань крові, виявлення захворювань сечостатевих органів.

Матеріал для цитологічного дослідження одержують різним шляхом. Так, ексфоліативний спосіб полягає у відстоюванні біологічних рідин від пацієнта (крові, мокротиння), які в результаті розшаровуються: плазма відокремлюється від формених елементів крові, а в мокротинні випадає в осад слиз, епітелій та бактерії. Можна отримати матеріал для дослідження за допомогою зіскрібка або змивів, мазків, що відокремлюється з нориці, сосків молочних залоз та ін. Частіше таким чином отримують матеріал для діагностики шкірних (у тому числі онкологічних захворювань.

Для цитологічного дослідження щитовидної залози, кісткового мозку, ліквору, кіст, пухлин та внутрішніх органів матеріал беруть у хворого на пункцію. Для цього роблять прокол голкою (ін'єкційною або спеціальною) та забирають рідкий вміст порожнинних утворень за допомогою звичайного шприца. Забір тканин внутрішніх органів дослідження називається біопсією, яку виконують спеціальними інструментами. Можна аналізувати і частинки твердих тканин, що залишилися в порожнині голки або інструменту для біопсії після проколу.

Зразки тканин внутрішніх органів для дослідження можна взяти за допомогою ендоскопічної біопсії: в шлунково-кишковий тракт, бронхи або черевну порожнину вводять гнучкий прилад з оптичною волоконною системою і різальним інструментом. Потім вибирають найбільш підозріле патологію місце і виконують кілька зрізів тканин. При цьому дотримуються наступного правила: перший зріз роблять на найбільш зміненій ділянці органу, а потім беруть ще кілька проб із прилеглих зон та інших вогнищ ураження. У цьому випадку кровотеча із травмованих тканин не призведе до помилкового забору матеріалу.

Пункція та біопсія - складні способи забору матеріалу для дослідження, часто вони досить болючі, а тому їх проводять зі знеболюванням, зате саме вони дозволяють звести помилку в діагнозі до мінімуму.

Досліджують як забарвлені та фіксовані зразки тканин, так і живі. Аналіз проводять за допомогою мікроскопії та хімічних реакцій. Цитологічні дослідження отриманого матеріалу досить швидкі у виконанні та відносяться до прижиттєвої діагностики. Найбільш широко їх використовують для виявлення ракових та передракових захворювань при масових профілактичних оглядах. У ході дослідження визначають тип епітеліальних клітин, стадію їх розвитку та патологічні зміни у них. Виявлення та спостереження динаміки передракових захворювань або раку на ранніх стадіях можливе лише цим методом. Залежно від способу отримання матеріалу від хворого на дослідження можна визначити розміри злоякісної пухлини, поширеність процесу (часткове, повне ураження органу, перехід на навколишні орган тканини та сусідні органи). За допомогою цитологічного дослідження можна відрізнити первинну пухлину від вторинної, спричиненої поширенням ракових клітин по організму. Велике значення для цитологічного дослідження мають точні дані про походження матеріалу, особливо якщо його взято з кількох місць. Тому всі мазки та зіскрібки після забору необхідно правильно маркувати (позначки роблять і на предметному склі та в супровідній документації). Для отримання достовірних результатів цитологічного дослідження важливі відомості про лікування, оскільки багато лікарських препаратів (гормони, цитостатики) безпосередньо впливають на клітини і змінюють їх стан. Крім того, при неправильному виборі місця для забору матеріалу від хворого захворювання може бути не виявлено. Якщо результат аналізу викликає сумніви, то призначають повторне цитологічне дослідження.

Ознаки озлоякісності клітин, що виявляються при дослідженні:

  • 1) зміна розташування клітин щодо один одного в певних тканинах (нашарування, угруповання);
  • 2) нечіткі межі;
  • 3) одночасна присутність живих змінених та мертвих клітин;
  • 4) зміна розмірів клітин (зменшення, збільшення);
  • 5) зміна форми клітин;
  • 6) різноманітність клітин структурою (у досліджуваному матеріалі присутні клітини різних стадій розвитку, багато незрілих клітин);
  • 7) фарбування цитоплазми у синій колір хімічними барвниками;
  • 8) наявність у цитоплазмі безлічі вакуолей, твердих включень;
  • 9) різноманітність ядер за структурою;
  • 10) збільшення розмірів ядер;
  • 11) зміна об'ємного співвідношення між ядром та цитоплазмою;
  • 12) нерівномірний розподіл хроматину;
  • 13) зміна структури хроматину;
  • 14) посилене фарбування ядер;
  • 15) наявність ядер з різним ступенем фарбування;
  • 16) збільшення розмірів ядерців та їх числа;
  • 17) збільшення числа клітин, які перебувають у стані мітозу (розподілу);
  • 18) наявність клітин із неправильним розподілом.

Цитологічні методи дослідження в медицині, цитологічна діагностика, методи розпізнавання захворювань та дослідження фізіологічного стану організму людини на підставі вивчення морфології клітин та цитохімічних реакцій. Застосовуються: 1) в онкології для розпізнавання злоякісних та доброякісних пухлин; при масових профілактичних оглядах з метою виявлення ранніх стадій пухлинного процесу та передракових захворювань; при спостереженні за перебігом протипухлинного лікування; 2) у гематології для діагностики захворювань та оцінки ефективності їх лікування; 3) у гінекології - як з метою діагностики онкологічних захворювань, так і для визначення вагітності, гормональних порушень тощо; 4) для розпізнавання багатьох захворювань органів дихання, травлення, сечовиділення, нервової системи та ін. та оцінки результатів їх лікування.

Цитологічні методи дозволяють розпізнавати злоякісні пухлини різного характеру і судити про поширення процесу, тканинної приналежності пухлини (у 70-85% випадків раку визначається гістологічна форма пухлини і ступінь злоякісності. Розроблені критерії цитологічної діагностики захворювань крові, ретику туберкульозу легень, шкірних хвороб і т.д. При необхідності проводять термінову цитологічну діагностику.

Методи отримання клітин на дослідження різні. При ексфоліативному методі вивчають клітини, отримані в результаті природного відшаровування в нормальних рідинах організму (наприклад, кров) або в патологічно відокремлюваному (наприклад. мокротиння) або штучного відділення шляхом змивання, механічного злущування. У інших випадках матеріал отримують при пункції через тонку голку (пункційний метод). Впровадження в клінічну практику ендоскопії зумовило поширення цитологічної біопсійної. діагностики, за якої матеріал для дослідження беруть шляхом біопсії. Для цитологічного дослідження препарати готують на предметному склі. Залежно від цілей дослідження застосовують мікроскопію нативних або фіксованих та забарвлених за допомогою стандартних методів фарбування препаратів, фазово-контрастну, ультрафіолетову та флуоресцентну (з використанням флуорохромів для фарбування препаратів) мікроскопію. Практичне застосування набули специфічні цитохімічні методи. У наукових дослідженнях використовують також спеціальні методи – авторадіографію, імуноцитохімію, цитоспектрофото- та цитофлуориметрію, електронну мікроскопію, метод тканинної культури.

Цитогенетичним методом у генетиці людини зазвичай називають цитологічний аналіз каріотипу людини в нормі та патології. Правильніше цей метод називати цитологічним, а не цитогенетичним, оскільки генетичний аналіз шляхом схрещування у людини виключено, і носії хромосомних порушень якщо виживають, то виявляються, як правило, безплідними. Проте зрідка щодо деяких хромосомних порушень вдається поєднувати цитологічний метод із генеалогічним і встановлювати зв'язок фенотипічного ефекту з певним типом хромосомних змін. З цих обставин можна зберегти прийнятий у літературі термін «цитогенетичний метод» щодо генетики людини. У тих випадках, де такого паралелізму дослідженні не ведеться, застосування даного терміна неправомочно. Цитогенетичним методом досліджують різноманітні гетероплоїдії та хромосомні перебудови в соматичних тканинах людини, що викликають різні фенотипічні відхилення від норми. Найчастіше цей метод застосовують на культурі тканини. Він дозволяє враховувати великі аномалії хромосом, що виникають як у статевих, так і в соматичних клітинах. Виявилося, що у людини, так само як і у тварин, часто виникають трисоміки і моносоміки по різних парах хромосом внаслідок нерозбіжності аутосом і статевих хромосом в мейозі. Трисомія та моносомія за статевими хромосомами у людини виявляються на основі аналізу статевого хроматину. У ході відносно тривалого індивідуального розвитку людини у клітинах різних тканин накопичуються аномалії хромосом (хромосомні перебудови, а також зміна числа хромосом). Тканини організму являють собою різноманітні популяції клітин, що генетично розрізняються, в яких з віком концентрація клітин з патологічними ядрами зростає. У цьому випадку цитогенетичний метод дозволяє вивчати старіння тканин на основі дослідження структур клітин у віковій динаміці «популяції» соматичних та генеративних тканин. Оскільки частота виникнення хромосомних аномалій залежить від впливу на організм різноманітних мутагенів (іонізації, хімічних агентів - фармакологічних препаратів, газового складу середовища та ін), то цитогенетичний метод дозволяє встановлювати мутагенну дію факторів зовнішнього середовища на людину. Застосування цитогенетичного методу особливо розширилося через відкриття причин низки фізичних і психічних захворювань - про хромосомних хвороб. Існує кілька захворювань людини, наприклад хвороба Клайнфельтера, Шерешевського-Тернера, Дауна та ін. причини яких довго залишалися невідомими, поки цитологічними методами у таких хворих не були виявлені хромосомні аномалії. Хворі чоловіки з синдромом Клайнфельтера характеризуються недорозвиненням гонад, дегенерацією насіннєвих канальців, розумовою відсталістю, непропорційним зростанням кінцівок і т. д. У жінок зустрічається синдром Шерешевського-Тернера. Він проявляється у уповільненні статевого дозрівання, недорозвиненні гонад, відсутності менструацій, безплідності, малому зростанні та інших Патологічних ознаках. Виявилося, що обидва ці синдроми у нащадків є наслідком нерозбіжності статевих хромосом при утворенні гамет батьків. Внаслідок нерозбіжності Х-хромосом у жіночої гомогаметної статі в процесі мейозу можуть виникати гамети двома Х-хромосомами, тобто XX + 22 аутосоми, і без Х-хромосом, тобто 0 + 22; у чоловічої (гетерогаметної) статі відповідно гамети XY + 22 і 0 + 22. У разі запліднення таких яйцеклітин нормальними сперматозоїдами (X + 22 або Y + 22) можливе утворення наступних класів зигот: XXX+ 44, 0Х+ 44, XXY + 4 + 44. З цього випливає, що число хромосом у зигот різного походження може коливатися від 47 до 45, причому особини 0Y + 44, очевидно, не виживають, оскільки жодного разу не знайшли. Хромосомний набір XXY + 44 притаманний чоловікові із синдромом Клайнфельтера (чоловіча інтерсексуальність), хромосомні набори Х0 + 44 і XXX + 44 мають жінки із синдромом Шерешевського-Тернера. При подальшому аналізі хворих на різні синдроми з'ясувалося, що внаслідок нерозходження статевих хромосом можуть виникати різного типу хромосомні аномалії, зокрема полісомія. Зустрічаються, наприклад, чоловіки з такими наборами хромосом: XX Y, XX Y, XX Y, а жінки - XXX, XX. Особливість ролі статевих хромосом у детермінації статі в людини у разі їх нерозбіжності, на відміну дрозофіли, виявилася у цьому, що набір хромосом XX Y завжди визначає чоловіча стать, а набір Х0 -- жіночий. При цьому збільшення числа Х-хромосом у поєднанні з однією Y-хромосомою не змінює визначення чоловічої статі, лише посилює синдром Клайнфельтера. Трисомія, або полісомія по Х-хромосомі, у жінок також часто викликає захворювання, подібні до синдрому Шерешевського-Тернера. Захворювання, спричинені порушенням нормальної кількості статевих хромосом, діагностуються цитологічним методом - аналізом статевого хроматину. У тих випадках, коли в тканинах чоловіків є нормальний набір статевих хромосом - XY, статевий хроматин у клітинах не виявляється. У нормальних жінок - XX - він виявляється у вигляді одного тільця. При полісомії за Х-хромосомами у жінок і чоловіків кількість тілець статевого хроматину завжди на одиницю менша від числа Х-хромосом, тобто nx = n*Х - 1. Так, у клітинах чоловіків із синдромом Клайнфельтера при наборі XX Y є одне тільце статевого хроматину, при наборі XXXY - два, при наборі XXXXY - три; у жінок із синдромом Шерешевського-Тернера відповідно: Х0 - немає тільця, XXX - два тільця, ХХХХ - три тільця статевого хроматину, і т. д. Передбачається, що в кожній такій зиготі генетично активна лише одна з Х-хромосом . Інші хромосоми переходять у гетеропікнотичний стан у вигляді статевого хроматину. Причини цієї закономірності не з'ясовані, проте передбачається, що вона пов'язана з нівелюванням дії генів статевих хромосом у гетеро- і гомогаметної статі. Як ми знаємо, нерозбіжність хромосом може відбуватися у мейозі, а й у соматичних клітинах протягом усього ембріогенезу тварини починаючи з перших дроблень яйця. Внаслідок останнього серед людей при порушенні розбіжності статевих хромосом можуть з'явитися хворі мозаїки-жінки та мозаїки-чоловіки. Так, наприклад, описані мозаїки наступних типів: подвійні: Х0/XX, Х0/XXX та X0/XY, X0/XYY, потрійні: Х0/ХХ/ХХХ, XX/X0/XY, а також четверні мозаїки, коли соматичні клітини одного людини містять чотири різні набори хромосом. Крім розглянутого типу хвороб, спричинених зміною числа статевих хромосом у зиготі, хромосомні хвороби можуть бути викликані нерозбіжністю аутосом та різного роду хромосомними перебудовами (транслокаціями, делеціями). Так, наприклад, у дітей з вродженою ідіотією - хворобою Дауна, що супроводжується малим ростом, широким круглим обличчям, близько розташованим вузькими очними щілинами та напіввідкритим ротом, була виявлена ​​трисомія по 21 хромосомі. Встановлено, що частота народження Дауна у новонароджених залежить від віку матерів. З вродженими хромосомними аномаліями пов'язують різноманітні хвороби. Тому цитогенетичний метод набуває важливого значення в етіології хвороб людини.

  • 1. абсолютна нешкідливість;
  • 2. швидкість (за умов устаткування робочого місця цитолога не більше операційного блоку термінове цитологічне дослідження то, можливо виконано протягом 10 хв). Сучасна методика Diff-Quic дозволяє пофарбувати мазки протягом 15 с, але після термінового мікроскопічного дослідження препарати необхідно дофарбувати за Паппенгеймом, тільки тоді вони придатні для зберігання в архіві, тобто мають документальне значення;
  • 3. відносна простота та доступність методу (цитологічне дослідження не вимагає дуже великих матеріальних витрат, дорогих реактивів, інструментарію та обладнання);
  • 4. можливість застосування багаторазових цитологічних досліджень, що особливо важливо як оцінки динаміки морфологічних змін протягом захворювання, так визначення терапевтичного ефекту проведеного лікування;
  • 5. небагато адекватного матеріалу для мікроскопічного вивчення.
  • 1. загальною метою (прижиттєве розпізнавання патологічного процесу);
  • 2. об'єктом дослідження (клітинний та неклітинний компонент патологічного процесу);
  • 3. принципами фарбування.

Отже, при відповідних способах забору матеріалу цитологічний метод дозволяє:

  • 1. встановити справжній характер процесу;
  • 2. оцінити поширеність злоякісного процесу;
  • 3. констатувати проростання первинної пухлини до сусідніх органів та тканин;
  • 4. вказати на джерело метастазування за наявності адекватного матеріалу (метастази в кістки диференціювати від первинних пухлин кістки, метастази в легені - від первинного раку легені).

Цитологічний метод заснований на мікроскопічному вивченні та оцінці клітинного матеріалу, отриманого різним способом із патологічного вогнища.

Цитологічний метод - це галузь онкоморфології. Він ні в якому разі не повинен протиставлятися гістологічному.

Переваги та переваги цитологічного методу:

  • - Абсолютна нешкідливість;
  • - Швидкість (в умовах обладнання робочого місця цитолога в межах операційного блоку термінове цитологічне дослідження може бути виконано протягом 10 хв). Сучасна методика Diff-Quic дозволяє пофарбувати мазки протягом 15 с, але після термінового мікроскопічного дослідження препарати необхідно дофарбувати за Паппенгеймом, тільки тоді вони придатні для зберігання в архіві, тобто мають документальне значення;

відносна простота та доступність методу (цитологічне дослідження не вимагає дуже великих матеріальних витрат, дорогих реактивів, інструментарію та обладнання);

можливість застосування багаторазових цитологічних досліджень, що особливо важливо як для оцінки динаміки морфологічних змін протягом захворювання, так і для визначення терапевтичного ефекту лікування, що проводиться;

небагато адекватного матеріалу для мікроскопічного вивчення.

Мета аналізованого дослідження - встановити правильний діагноз, заощадити час, уникнути хірургічного втручання у виконанні біопсії і хвилювань хворого, не затримавши у своїй початку лікування.

Діагностичне цитологічне дослідження схоже на гістологічне дослідження біопсійного матеріалу:

загальною метою (прижиттєве розпізнавання патологічного процесу);

об'єктом дослідження (клітинний та неклітинний компонент патологічного процесу);

принципами фарбування.

Водночас при приготуванні мазка неминуче порушуються просторові взаємини структурних елементів тканини, що суттєво обмежує діагностичні можливості цитологічного методу та робить гістологічний метод більш інформативним у визначенні нозології пухлини та абсолютним у встановленні її інвазивності.

Цитологічне дослідження переважно у тих випадках, коли біопсія шматочка тканини та гістологічне дослідження неможливі або вкрай небажані (при підозрі на меланому), при необхідності отримання швидкого результату шляхом мікроскопії доступного матеріалу в умовах поліклініки та, нарешті, при масових профілактичних оглядах населення.

Цитологічний метод дає можливість оцінити характер та ступінь виразності проліферації епітелію, виділити групу дисплазії, що дозволяє більш обґрунтовано формувати групи підвищеного ризику раку різних локалізацій. Динамічне спостереження за цією категорією осіб та виконання у них морфологічного контролю фактично неможливе за допомогою інших (тим більш інвазивних) методів дослідження.

Застосування цитологічного дослідження забезпечує діагностику злоякісних пухлин будь-якої локалізації та у будь-якій стадії процесу. Цьому значною мірою сприяє розвиток ендоскопічної техніки, що дозволяє цілеспрямовано отримувати матеріал для дослідження з внутрішніх органів, раніше недоступних для морфологічного аналізу без оперативного втручання.

При розпізнаванні раку в початкових стадіях цитологічний метод іноді має переваги в порівнянні з іншими діагностичними тестами. Добре відомі випадки цитологічної діагностики клінічно, рентгенологічно та ендоскопічно «німого» раку шлунка, легені, сечового міхура та ін.

Інтерпретація цитологічних препаратів – складний процес.

В результаті багаторічної дискусії про специфічність злоякісних клітин було прийнято, що патогномонічних ознак, властивих лише клітині злоякісної пухлини, немає і морфолог, зокрема цитоморфолог, повинен використовувати у своїй роботі сукупність ознак атипії клітини, критично оцінюючи їх наявність та ступінь виразності. Кожна з ознак не має самостійного значення.

Загальноприйняті ознаки злоякісності клітин:

  • 1. неправильне розташування клітин у групуванні, нашарування їх один на одного;
  • 2. відсутність чітких клітинних кордонів;
  • 3. поєднання всередині одного комплексу або групи клітин молодих та дегенеративно змінених клітинних елементів. Через порушення кровопостачання пухлини виникають некрози та у цитограмі з'являються клітини з ознаками дистрофії. У той самий час пухлина характеризується некерованим і дуже інтенсивним розмноженням пухлинних елементів. Поєднання дистрофічно-некротичних та проліферативно-гіперпластичних процесів обумовлює появу такого роду утворень;
  • 4. збільшення або зменшення розмірів клітин (наприклад, наявність дрібноклітинних і великоклітинних форм раку легені, гігантоклітинних та дрібноклітинних сарком);
  • 5. зміна форми клітин (пойкілоцитоз);
  • 6. поліморфізм клітин;
  • 7. явище хімічної анаплазії - базофілія цитоплазми;
  • 8. зміни цитоплазми: наявність у ній включень, поява ознак зроговіння, вакуолізації різного ступеня виразності;
  • 9. поліморфізм ядер;
  • 10. збільшення розмірів ядра;
  • 11. порушення ядерно-цитоплазматичного співвідношення;
  • 12. нерівномірний розподіл хроматину;
  • 13. груба структура хроматину;
  • 14. гіперхромія ядер;
  • 15. поєднання гіпо-, нормо-і гіперхромних ядер усередині одного угруповання клітин;
  • 16. наявність «голих» ядер, голоядерних структур, поліморфних «голих» ядер;
  • 17. збільшення розмірів та кількості ядерців;
  • 18. поліморфізм ядерців;
  • 19. збільшення кількості мітозів;
  • 20. наявність патологічних мітозів, значну їх кількість.

До встановлення правильного діагнозу клініцист і морфолог повинні йти у співпраці. Якщо цитолог у кожному окремому випадку повинен мати клінічні дані, то клініцисту, у свою чергу, потрібно засвоїти мову морфолога, його підхід і вимоги до матеріалу, спрямованого на дослідження.

При направленні матеріалу на цитологічне дослідження клініцист повинен правильно та докладно заповнити супровідний бланк, вказати вік, стать, номер амбулаторної карти чи історію хвороби. Дуже важливі для цитолога відомості про об'єкт дослідження: локалізація патологічного вогнища (або кількох вогнищ). У разі взяття матеріалу з кількох ділянок однієї освіти або різних утворень клініцист зобов'язаний маркувати мазки та надати відповідну інформацію у бланку-направленні. Наприкінці цитолога також має бути відбито маркування мазків.

Результати цитологічного дослідження значною мірою залежать від того, наскільки прицільно взято матеріал, якими є його кількість і безпека. Цитологічний матеріал переноситься на спеціально підготовлене та оброблене предметне скло (чисте, знежирене, сухе) і розподіляється тонким шаром. Для рівномірного розміщення всього отриманого матеріалу не слід обмежувати кількість предметного скла. Головне - зробити мазки максимально тонкими, а згустки, що містяться, і щільні ділянки обережно розпушити за допомогою голки або перенести і розподілити їх на декількох предметних стеклах. Товсті мазки та мазки з великим вмістом крові дуже погано фіксуються, що негативно відбивається на якості забарвлення клітинного матеріалу та різко обмежує можливості його мікроскопічної інтерпретації.

Якщо потрібно в консультативних цілях переглянути цитологічні препарати, клініцист у бланку напряму коротко викладає мету перегляду, дані клінічного обстеження хворого та вказує номери всіх цитологічних та гістологічних досліджень, виконаних у цього хворого. Щоб уникнути помилкового трактування змін клітин, цитологу необхідна вичерпна інформація про всі види проведеного лікування (хірургічне, хіміо-, гормоно-, фізіо- та лікарська терапія) з обов'язковим зазначенням дози та дати закінчення лікування. За відсутності таких даних виявлені у цитограмі клітини із змінами, властивими терапевтичному патоморфозу або проліферативним та репаративно-регенеративним процесам, можуть бути неправильно розцінені цитологом як пухлинні елементи.

Формулювання цитологічного висновку - складний і копіткий процес. Перш ніж приступити до мікроскопічного вивчення цитологічних препаратів кожного хворого, клінічний цитолог повинен ознайомитися з його клінічними даними, уявити нормальну будову органу або тканини, з якої взято матеріал, знати межі мінливості цієї тканини при різних фізіологічних станах, доброякісних і злоякісних пухлинах. Висновок цитолога полягає в результатах дослідження клітинного складу цитограми з урахуванням даних клінічного обстеження.

У клінічній цитології виділяють 3 розділи: ексфоліативна, пункційна, ендоскопічна.

Ексфоліативна цитологія заснована на фізіологічному «злущуванні» клітин зі слизової оболонки (folium – лист, ех – відпадати). Приклад ексфоліативної цитології - це мікроскопічне дослідження мокротиння, сечі, простатичного соку, змивів різних органів, мазків із шийки матки, виділень із соска молочної залози, відбитків із ерозованих поверхонь, ран, нориць; рідин із суглобових та серозних порожнин, спинномозкової рідини тощо.

В останні два десятиліття широкого поширення набув метод пункційної цитології, він теж має давню історію, але не такою мірою, як ексфоліативна цитологія.

Прикладом пункційної цитології є матеріал лімфатичних вузлів, кісткового мозку, кісткових новоутворень, щитовидної, молочної залоз. Проведення пункції будь-якого органу потребує спеціальної підготовки та досвіду. Велике значення для успішного дослідження має вибір місця проколу, кількість та якість отриманого клітинного матеріалу. Нині часто здійснюють прицільні пункції утворень під контролем УЗД, комп'ютерного томографа.

Отримання матеріалу для цитологічного дослідження з допомогою пункцій певною мірою травматично. Щодо пункційних та аспіраційних біопсій донедавна висловлювалися припущення про можливу дисемінацію пухлини при цих процедурах. Зараз загальновизнано, що наявний мінімальний ризик перекривається величезною користю для хворих у зв'язку з реальною можливістю точної морфологічної діагностики захворювання (особливо на доопераційному етапі та у разі дуже поширеного злоякісного процесу, для призначення консервативних методів лікування – променевого, хіміотерапевтичного, хіміопроменевого).

Третій розділ клінічної цитології – ендоскопічна цитологія має відносно недавню історію. Результативність цитоморфологічного методу у встановленні характеру процесу багато в чому залежить від уміння ендоскопіста взяти матеріал для цитологічного та гістологічного дослідження. Слід дотримуватись правил, що першу біопсію ендоскопіст бере з найбільш зміненої ділянки слизової оболонки. Якщо він помилився у виборі місця біопсії, то наступні біопсії можуть бути виконані не зовсім точно через кровоточивість слизової оболонки, що з'являється. Вважається, що застосування щіточки (браш-цитологія) переважно при езофагеальному раку та плоскому типі раннього раку шлунка.

Приготування мазків-відбитків із біопсії ендоскопічного матеріалу також має свої особливості. Цитологічні препарати готують шляхом кількох легких дотиків до предметного скла ділянок тканини, обережно витягнутих з бранш-щипців за допомогою голки, та «прокатування» шматочка предметного скла. Необхідно стежити за тим, щоб голка та предметні шибки були сухими, щипці не мали слідів формаліну, оскільки потрапляння води та формаліну різко погіршує якість забарвлення мазка, а значить і його інтерпретації.

Характер патології, виявленої ендоскопістом, визначає кількість матеріалу, яку потрібно взяти для морфологічного дослідження. При візуальній картині виразки шлунка достатньо приготувати 3-5 мазків, а при підозрі на малігнізовану виразку матеріал беруть зі слизової оболонки всіх країв виразки і розподіляють на 10-12 предметних шибок. Найкращим забарвленням мазків зі слизової оболонки шлунка є гематоксилін-еозин, для ідентифікації ділянок кишкової метаплазії – муцикармін або альціановий синій.

У клінічній картині виразкової хвороби шлунка виділяють стадії загострення, загоєння та ремісії. При загостренні виразкового процесу у цитограмі превалюють елементи запалення, а в епітелії слизової оболонки шлунка різко виражені дистрофічні зміни та явища фагоцитозу. У період загоєння виразки перше місце виступають зміни епітелію регенераторного порядку. У міру згасання запального процесу та очищення дна виразки від некротичних мас починається регенерація слизової оболонки шлунка. З практичної погляду важливо враховувати осрбенности регенераторних розростань недиференційованого епітелію, щоб унеможливити помилкового діагнозу раку при мікроскопічному дослідженні як цитологічного, і гістологічного матеріалу, особливо у випадках розвитку дисплазії епітелію III ступеня. Згідно з даними літератури, при вивченні гастробіопсій відсоток хибнопозитивного діагнозу раку коливається від 1,5 до 10,0, а при дослідженні мазків-відбитків він дещо нижчий - 1,0-6,0. Вивчення ендоскопічного матеріалу за допомогою цитологічного та гістологічного методів широко використовується для диференціальної діагностики захворювань шлунка, виявлення гіперпластичних, метапластичних та диспластичних процесів, а також для визначення ступеня обсіменіння слизової оболонки шлунка Helicobacter pylori. Уточнення форми гастриту - прерогатива гістологічного методу, що вигідно відрізняє його від інших компонентів комплексного гастрологічного обстеження осіб із шлунковою симптоматикою.

Ранній рак шлунка розпізнається цитологічно у 92-96,5% випадків. У хворих на розвинену форму раку шлунка інформативність цитологічного методу коливається в широких межах: максимальне її значення (95,0%) відзначено при екзофітному раку, мінімальне (71,0%) - при стенозуючому. У випадках малігнізації хронічної виразки та виразкового раку вивчення цитологічного матеріалу дозволяє достовірно частіше виявити злоякісний характер процесу (у 82,0% спостережень проти 45,0, 59,0 та 68% при використанні відповідно рентгенологічного, ендоскопічного та гістологічного методів дослідження).

Доцільно застосування цитологічного методу при обстеженні хворих з підозрою на рак легені. У спеціалізованих лікувальних закладах обстеження хворих з локальними рентгенологічними змінами має включати бронхоскопію з обов'язковим взяттям матеріалу для цитологічного та гістологічного досліджень, які забезпечують діагностику раку у 82,0-85,0 % спостережень. Простішим, але менш результативним є мікроскопічне дослідження спонтанно відокремлюваного мокротиння (чутливість методики - 20-40,0%). Краще зарекомендував себе отримання індукованої мокротиння, тобто. зібраної після десятихвилинної інгаляції розчином ферменту (чутливість методики – 60-80,0%). Для верифікації природи периферичних утворень легень показано трансторакальну пункцію. Вивчення мазків пункційного матеріалу дозволяє цитологічно розпізнати рак та визначити його гістологічну форму (відповідно у 89,0% та 93% спостережень).

Цитологічні ознаки різних форм раку легені досить добре вивчені та представлені у цитологічній класифікації пухлин (ВООЗ, 1982). За наявності в мазках адекватного клітинного матеріалу цитолог може ідентифікувати всі різновиди раку легені. Труднощі об'єктивного та суб'єктивного характеру можуть мати місце при нечисленності та поганій схоронності пухлинних клітин, при мозаїчній будові пухлини, диференційній діагностиці низькодиференційованого епідермоїдного та аденогенного раку, розпізнаванні бронхоальвеолярної аденокарциноми та проміжного ратипу.

Дослідження цитологічного матеріалу, отриманого при пункції новоутворень молочної залози, часто зводиться до з'ясування питання наявності чи відсутності раку, хоча діагностичні можливості цитологічного методу набагато ширше. Аналіз цитограм дозволяє у 80-87,0% хворих на рак молочної залози встановити злоякісний характер процесу, визначити ступінь диференціювання клітин пухлини, у частині випадків ідентифікувати особливі форми раку (медулярний, апокринний, слизовий, Педжета). При доброякісних процесах молочної залози клітинний склад пунктату дає можливість виявити гіперпластичні зміни епітелію, оцінити ступінь їхньої вираженості, іноді здійснити нозологічну діагностику (кіста, папілома, фіброаденома, пухлина листоподібна).

Цитологічний скринінг раку шийки матки визнаний та широко проводиться у всьому світі. У завдання цитолога входить діагностика запальних процесів, вірусних інфекцій, диспластичних змін епітелію шийки матки та раннього раку шийки матки. З цією метою співробітники цитологічних лабораторій забезпечують кваліфіковане мікроскопічне дослідження первинно взятих мазків, а також матеріалу, отриманого при поглибленому обстеженні та динамічному спостереженні за жінками з виявленою геніталійною патологією. Світовий досвід застосування цитологічного методу довів його реальну можливість розпізнавати початкові форми раку шийки матки (cr. in situ та I стадію).

Зі зростанням захворюваності на рак тіла матки, зареєстрованим у багатьох країнах світу, а також у Білорусі, виникла потреба використовувати цитологічний метод для діагностики передраку та раку цієї локалізації. До передракового стану ендометрію відноситься атипова гіперплазія ендометрію. Цитограма клітинної атипічної гіперплазії ендометрію своєрідна: у мазках виявляють групи та невеликі пласти клітин ендометрію, що мають укрупнені, помірно поліморфні досить світлі ядра з гомогенним тонкодисперсним хроматином та неконтурованою цитоплазмою. Для розпізнавання цього варіанта атипової гіперплазії ендометрію цитологу необхідно цілеспрямоване ретельне вивчення клітинного складу цитограми поєднувати з умінням виявити менш виразні ознаки атипії клітин ендометрію.

Надзвичайно важлива онконозологічна діагностика дрібноклітинних злоякісних пухлин, що зустрічаються переважно у дітей та включають неходжкінську лімфому, нейробластому, рабдоміосаркому, саркому Юінга. Їхня точна доопераційна цитологічна діагностика сприяє проведенню гістогенетично обґрунтованого лікування, що позитивно впливає на прогноз захворювання. Для всіх видів дрібноклітинних сарком властивий відносно однорідний клітинний склад із округлих недиференційованих бластних клітин, розташованих розрізнено, розсипами, осередковими скупченнями, рядами та ланцюжками, що дозволяє лікарю-цитологу діагностувати злоякісну природу процесу. Розпізнавання гістогенезу новоутворення можливе при виявленні серед недиференційованих клітин більш диференційованих пухлинних елементів, що мають світлооптично визначені ознаки неврального, міобластного або лімфоїдного диференціювання. Обов'язково враховуються дані клінічного обстеження хворого. Слід пам'ятати, що при неходжкінських лімфомах клітинний склад однорідний, розрізнені клітини пухлини лежать в одній площині препарату, мають високу мітотичну активність. У мазках присутні лімфогландулярні тільця та функціонально активні макрофаги.

Цитологічна картина рабдоміосаркоми характеризується міксоїдним фоном препарату та вираженим поліморфізмом пухлинних елементів з наявністю двох- та багатоядерних клітин.

Для цитограм нейробластомних пухлин властивий клітинний склад з дрібних недиференційованих і диференційованих нейробластів, розташованих ізольовано та в тісних скупченнях з формуванням псевдорозеток, осередковою присутністю нейропіля та поодиноких гангліозних клітин.

Висока клітинність мазків, поєднання дрібних «темних» і більш диференційованих клітин, що лежать муфтообразно навколо судин та/або у вигляді розеток, ланцюжків, а також різко позитивна реакція PAS в клітинах пухлини дозволяють цитологічно діагностувати саркому Юінга.

Висновок: В останні роки суттєво зріс інтерес онкоморфологів до кількісних та імуноморфологічних методів дослідження. Застосування сучасної апаратури (аналізатори зображення високого класу), комп'ютерних методик та спеціалізованих математичних програм дає можливість перейти від суб'єктивних та лише якісних методів діагностики до об'єктивних та кількісних методів цитоморфологічного аналізу. Використання методів імуноморфології поряд зі стандартними методами цитологічного та гістологічного дослідження дозволяє суттєво підвищити якість уточнюючої діагностики, що важливо для вирішення задач нозологічної діагностики пухлин та оцінки прогнозу захворювання. У клінічній цитології недалекого майбутнього гідне місце займе телепатологія, за допомогою якої відкриваються перспективи проведення точної діагностики та кваліфікованої консультації препаратів на відстані.

У світі видається понад 40 цитологічних журналів. Періодично виходять книги багатотомних міжнародних видань: протоплазматологія ("Protoplasmatologia") (Відень) та міжнародний огляд з цитології ("International Review of Cytology") (Нью-Йорк).

Є Міжнародне суспільство біології клітини (International Society of Cell Biology), яке регулярно скликає цитологічні конгреси. Міжнародна організація з дослідження клітини (International Cell Research Organization) та Європейська організація з біології клітини (European Cell Biology Organization) створюють робочі групи з окремих проблем цитології, організують курси з вузлових питань цитології та вивчення методик, забезпечують обмін інформацією. В університетах на біологічних та біолого-ґрунтових факультетах викладається курс загальної цитології.

Від спадкових (генетичних) хвороб важко страждають як жертви цих хвороб, а й їхні сім'ї. Батьків іноді мучить почуття провини, що штовхає їх до алкоголю, наркотиків та доводить до розлучення. Догляд за хворою дитиною поглинає час, енергію та засоби, часом позбавляючи інших дітей нормальної домашньої обстановки.

Разом з тим, за допомогою генетичних методів можна визначити, наскільки великий ризик народження хворої дитини. Відомо кілька методів вивчення спадковості людини.

Генетичний метод

Основою даного методу є вивчення родоводу тієї чи іншої сім'ї. Цей метод допомагає встановити закономірності успадкування різноманітних ознак людини як нормальних, і тих, що пов'язані з спадковими хворобами.

Близнюковий метод

Відомо, що різницю між різнояйцевими близнюками зумовлені генотипом, а між однояйцевими - чинниками середовища. Тому завдяки дослідженням близнюків можна встановити вплив середовища та спадковості на розвиток різних ознак, у тому числі хвороб. Наприклад, на кір хворіють як однояйцеві, так і різнояйцеві близнюки, що підтверджує залежність хвороби від факторів середовища, від потрапляння в організм збудника хвороби.

Захворювання на дифтерію або туберкульоз викликається їх збудниками, але в ризик захворювання цими хворобами грає роль генотип. І, якщо захворів на цю хворобу один з однояйцевих близнюків, цілком імовірно, що захворіє й на інший.

Цитологічний метод

Цитологічний метод - заснований на мікроскопічному дослідженні структури хромосом у здорових та хворих людей. Аномальне число статевих хромосом (більше або менше 46) виникає в тих випадках, коли порушується розбіжність хромосом у мейозі та в гамети потрапляє на одну хромосому більше або менше (синдром Дауна, синдром Шерешевського-Тернера та ін).

Біохімічний метод

Біохімічний метод заснований на дослідженні біохімічних процесів, що протікають в організмі, які називаються метаболізмом (обмін речовин). Відомо багато спадкових хвороб, пов'язаних із порушенням метаболізму (вроджених порушень), серед яких – альбінізм.

Використання описаних методів у генетиці та медицині дозволяє вчасно визначити ті чи інші порушення, що відбуваються в організмі на клітинному рівні. Так, аналіз крові дозволяє визначити такі генетичні аномалії, як хвороба Тея-Сакса, серповидноклітинна анемія, гемофілія, кістозний фіброз, що викликаються тими чи іншими генними порушеннями (мутаціями).

Інші генетичні аномалії обумовлюються не наявністю мутаційних генів, а порушенням поведінки хромосом під час мейозу (синдром Дауна), а саме: нерозбіжність 21 або 22 пари хромосом при мейозі. Індивідуумів з такою хворобою відрізняє ряд характерних ознак: розумова відсталість, наявність шкірної складки біля кута очей, кремезна статура та життєрадісність.

В даний час генетика і медицина мають методику, що дозволяє виявляти аномальне число хромосом у плода на 16-му тижні вагітності. Для цього беруть пробу навколоплідної рідини шляхом пункції плодового міхура, досліджують її клітини та визначають, чи немає в них хромосомних аномалій.

Нещодавно ряду дослідників вдалося досягти зниження частоти деяких спадкових захворювань у лабораторних тварин. Це дозволяє сподіватися, що з часом можна буде виявляти та лікувати деякі генетичні хвороби людини ще на стадії плоду.

Велике значення має також широке застосування під час біопсій та цитологічних досліджень. До цього часу дебатується питання щодо можливостей цитологічного та методів. Проте з-поміж них немає принципової різниці. Ці методи покликані доповнювати одне одного. Цитологією повинен займатися кваліфікований морфолог, поєднуючи роботу у цьому напрямі із гістологічними дослідженнями. Тільки таким шляхом можна досягти підвищення кваліфікації морфолога в галузі цитології, оскільки початкові дані уточнюються шляхом повніших гістологічних даних. Слід зазначити, що кваліфікований морфолог одночасно є цитологом, особливо це стосується визначення ранніх форм злоякісних пухлин та передпухлинних процесів. Існує неправильне уявлення, що цитолог ставить діагноз щодо окремих клітин. Насправді ж цитологічне дослідження є по суті своєрідною біопсією, завдяки якій можуть бути досліджені окремі клітини та їх комплекси, що становлять «фон», на якому розвивається пухлина. Така біопсія має певні переваги, оскільки вона дуже доступна, безпечна. Крім цього, матеріал для дослідження вдається одержати з великої кількості місць. При дослідженні цитологічних мазків, так само як і при гістологічному дослідженні, необхідно застосовувати різні гістохімічні забарвлення в залежності від характеру досліджуваного матеріалу (забарвлення за методом Романовського-Гімза при дослідженні лімфовузлів та органів кровотворної системи, забарвлення за способом Папаніколау при дослідженні шийки матки, що відокремлюється). та інших органів, де є покривний багатошаровий плоский епітелій, забарвлення на слиз). Це дозволяє проводити гістохімічний аналіз порушень обміну речовин у клітинах.

Спеціально слід зупинитися на раку типу Бовен. Вогнища передінвазивної форми раку зустрічаються або у вигляді одиничного вогнища початкової малігнізації, або у вигляді множинних вогнищ, іноді на значній відстані один від одного. Вивчення мікропрепаратів та спостереження за хворими показали, що гііперпластичні, регенераторні процеси та хронічне запалення повинні бути предметом уваги як клініцистів, так і патологоанатомів.

Початкові форми раку можна визначати в шлунку, кишечнику, матці, придаткових порожнинах носа. Відомо, що гігантоклітинна пухлина кісток може бути джерелом розвитку саркоми; із змішаних пухлин привулої залози розвиваються ракові пухлини; при лімфогранулематозі можливий перехід у ретикулосаркому; тератоми можуть бути джерелом розвитку злоякісних пухлин різної будови та самі, маючи доброякісну гістологічну будову, можуть метастазувати.

У ряді органів ще ясно не окреслено чітку морфологічну картину таких початкових форм злоякісних пухлин, хоча, звичайно, передінвазивна форма має місце при будь-яких локалізаціях. Однак при цьому необхідно якнайретельніше досліджувати їх з метою виявлення ранніх форм та попередження запущених форм пухлин.

Діагностувати та злоякісні новоутворення нерідко надзвичайно важко, а іноді встановити природу та характер пухлини без гістологічного та цитологічного досліджень взагалі неможливо.

Лікарі-патогістологи повинні враховувати, що проводити гістологічний аналіз матеріалу, що надсилається на дослідження, потрібно якнайшвидше (природно, не на шкоду якості), оскільки всяке зволікання при уточненні характеру захворювання різко погіршує прогноз захворювання у разі наявності пухлинного процесу.

Останнім часом широке застосування з ранньої діагностики раку знайшов цитологічний метод дослідження. Цей метод заснований на вивченні груп клітинних елементів, які у виділеннях слизових оболонок органів, уражених пухлинами.

В даний час є вже значна кількість досліджень, які показують, що в початкових стадіях ракове ураження тривалий час залишається в межах епітеліального покриву. У процесі канцеризації клітини ще до деструктивного росту набувають властивостей злоякісних, за якими їх можна розпізнати (інтраепітеліальні, інтраканалікулярні форми раку). Деструктивне зростання проявляється на більш пізніх стадіях розвитку пухлини.

Цитологічний метод успішно застосовується при діагностиці захворювань стравоходу, легень, шлунка, прямої кишки, сечового міхура, шийки матки, ротової порожнини. У ряді випадків, особливо тоді, коли неможливо зробити біопсію, важко поставити діагноз без цитологічного методу дослідження.

Хвороба Бовена є класичним прикладом поверхнево протікає інтраепітеліального раку, при якому лише надалі можна спостерігати заглибне зростання і метастазування в лімфатичні вузли.

На ґрунті мастопатії розвиваються інтраканалікулярні форми, що починаються і розвиваються в каналах з подальшим деструктивним зростанням.

Аналогічні приклади спостерігаються і при ракових пухлинах шийки матки, при так званих інтраепітеліальних формах, коли поширення пухлини відбувається по площині, а клітини відрізняються поліморфізмом, але не поширюються за межі покривного епітелію і лише надалі виявляються ознаки інфільтративного зростання.

Як у нормі, і при патології постійно спостерігається відторгнення окремих клітин та його груп. Відторгнення елементів пухлини відбувається на різних стадіях злоякісного зростання, що допомагає ще до розпаду пухлини при дослідженні виділень розпізнати процес навіть у той період, коли клінічна картина ще не дає змоги поставити правильний діагноз. Таким чином, за допомогою вивчення морфологічних особливостей злоякісних клітин, що зустрічаються у виділеннях, можна здійснювати ранню діагностику злоякісних новоутворень.

Вперше цитологічний метод дослідження почав застосовуватися наприкінці минулого століття основоположником харківської школи патологів В. Б. Криловим та його учнями, які розробили метод дослідження нативних (незабарвлених) препаратів з метою діагностики злоякісних пухлин.

Дослідження у нативному вигляді нерідко буває утруднено, особливо у ранніх формах злоякісного зростання. Останнім часом більш достовірним методом цитологічного дослідження вважається попереднє вивчення матеріалу в нативному вигляді з подальшою фіксацією та забарвленням мазка різними фарбами, серед яких найпоширенішими є забарвлення за Романовським – Гімза, Папаніколау. Незважаючи на те, що при фіксації та фарбуванні клітинні елементи до певної міри змінюють свою форму, все ж таки є можливість більш тонкого вивчення клітинної структури.

Виділення, зібрані для цитологічних досліджень, наносять на предметне скло, після чого негайно (щоб уникнути висихання препарату) їх занурюють для фіксації суміш спирту з ефіром, взятих в однакових кількостях (суміш Нікіфорова), яка забезпечує збереження форми клітинних елементів.

Для цитологічної діагностики потрібна достатня кількість матеріалу. За його відсутності вдаються до повторних, іноді багаторазових досліджень.

Про злоякісне перетворення клітин можна будувати висновки на основі сукупності ознак, характеризуючих клітини новоутворення та його взаємовідносини коїться з іншими клітинами. До таких ознак, насамперед, відносяться різко виражений ступінь атипії, поліморфізм величини і форми клітин, ядер і ядерців, збільшення ядра порівняно з розмірами клітин, утворення гігантських ядер і надалі клітин зі зміною мережі хроматину, що відрізняється інтенсивним забарвленням, базофілією протоплазми.

Однак ціла низка перелічених ознак зустрічається при запальних та регенераторних процесах, а тому завжди необхідно проводити диференціальний діагноз.

Злоякісному перетворенню зазвичай передують передпухлинні зміни і при цитологічному дослідженні необхідно враховувати "патологічний фон", на ґрунті якого виникла ракова пухлина. Тільки на підставі комплексного цитологічного аналізу, тобто при врахуванні всіх клітинних елементів (атипового епітелію, лімфоцитів, лейкоцитів, мезотелію). характерних для попередніх раковому перетворенню патологічних змін можна поставити правильний діагноз.

Прагнення провести диференціальну діагностику доброякісних процесів від злоякісних призвело до того, що деякі дослідники намагаються при діагностиці, наприклад, хронічного запального процесу, стежити за динамікою подальшого перебігу захворювання для того, щоб вловити початкову стадію малігізації. Нині виникла потреба як з достовірністю встановлювати наявність злоякісної пухлини, а й виключати наявність малігнізації клітин.

Навіть при початкових процесах регенерації шляхом цитологічного дослідження відокремлюваного шийки матки і порожнини рота можна виявити гіпохромні та гіперхромні клітини, гіпертрофовані клітини, що відрізняються деяким поліморфізмом і вакуолізацією протоплазми. При подальшому розвитку процесу з'являються зернисті вакуолізовані глибчасті клітини. При виникненні раку в мазках є велика кількість голих ядер зі зміною ядерців, з появою гігантських клітин і ядер, з утворенням синтиційних форм і вакуолізацією протоплазми. Іноді спостерігаються мітози та явища цитофагії. При розвинених злоякісних пухлинах матки в мазку відзначаються характерні форми лейкоцитів - набряклі, лізовані або розмазані в препараті, у вигляді тяжів і ниток ядерної речовини. Фагоцитоз у своїй відсутня. У Київському науково-дослідному рентгено-радіологічному та онкологічному інститутах О. В. Руденко запропонувала класифікацію атипових епітеліальних клітин при передракових та початкових ракових ураженнях шийки матки. При цьому встановлено, що зміни співвідношень у розмірі протоплазми та ядра клітин епітелію вдається спостерігати у хворих із запальними змінами шийки матки. Використання цієї класифікації практично полегшує відбір хворих, потребують подальшого спостереження. За матеріалами нашої клініки, правильні цитологічні діагнози, підтверджені надалі гістологічними дослідженнями при , були отримані майже у 100% випадків. Цим методом діагностуються також ранні стадії раку шийки матки навіть у хворих, у яких неозброєним оком не вдається виявити будь-яких змін в органі і відсутні клінічні симптоми захворювання.

Методика цитологічного дослідження дає можливість вловити атипію епітеліального покриву шийки матки, що передує зростанню ракової пухлини, а при повторних спостереженнях за такими хворими - виявити ранні інтраепітеліальні стадії раку.

Про високу ефективність цитологічного методу дослідження свідчать дані Львівського онкологічного диспансеру, де під час обстеження 108 хворих збіг цитологічних та гістологічних діагнозів спостерігався у 88,3%. За даними Інституту акушерства та гінекології, ракові елементи виявляються у мазках у хворих на рак шийки матки у 96,7% (Б. І. Желсзнов). При спостереженнях за 136 хворими з підозрою на рак цервікального каналу цитологічний метод дозволив у 65 із них встановити ракове захворювання.

У клініці А. І. Савицького цитологічний метод успішно використовується для дослідження виділень з легкої, молочної залози та інших органів. H. Н. Шиллер-Волкова при вивченні виділень з шийки матки показала, що ознакою малігнізації є великі епітеліальні клітини в мазках з великим молодим ядром, з вираженим поліморфізмом і вакуолізацією протоплазми. Клітинні групи мають вигляд синтиційних утворень без чітких меж окремих клітин, з великою кількістю тісно прилеглих один до одного поліморфних ядер. Обстеження 158 жінок цитологічним методом дало змогу виявити у 14 хворих зміни, підозрілі у сенсі ракового захворювання, що було підтверджено гістологічним дослідженням. При цьому 11 хворих не мали жодних клінічних ознак, що свідчать про раковий процес.

Особливо важливого значення набуває цитологічний метод для діагностики новоутворень легень, наявність яких досі дуже важко розпізнати. Методи цитологічної діагностики при раку легень досягли високої досконалості.

У клініці онкологічного інституту імені А. П. Герцена при дослідженні 230 хворих на рак легенів позитивний діагноз поставлено в середньому в 89,6%. причому при центрально розташованих ракових новоутвореннях - 94,7%, а при периферично розташованих - 83%.

Також застосовується метод отримання відокремлюваного слизової оболонки бронхів і мікроскопічних шматочків пухлин за допомогою вакуумтяжіння тканин, що досягається шляхом введення спеціальної гумової трубки безпосередньо в бронх до вогнища ураження (метод бронхо-аспіраційної біопсії). Якщо при рентгенологічному дослідженні пухлина діагностувалася у 77% хворих, при бронхоскопії - у 846%, то за допомогою зазначеного методу дослідження бронхогенний рак розпізнається у 948% хворих.

При дослідженні хворих на різні захворювання стравоходу ми користувалися методом аспіраційної біопсії, застосовуючи підведення спеціального зонда до вогнища ураження в стравоході. При цьому достовірні діагнози встановлені 92%.

У клініці Київського науково-дослідного рентгенорадіологічного та онкологічного інституту Н. П. Буліч. досліджуючи промивні води шлунка, одержувані розробленим нею методом сифонування через подвійний дуоденальний зонд, проводила диференціальний діагноз між раковими та іншими захворюваннями шлунка. Достовірний діагноз при раку отримано автором 69%.

Цитологічний метод дослідження знайшов своє застосування при інших локалізаціях, зокрема при раку прямої кишки, носової порожнини, гортані, при дослідженні спинномозкової рідини.

Накопичений досвід показує, що цей метод дослідження в комплексі з клінічними, рентгенологічними, гістологічними та гістохімічними даними є ефективним діагностичним прийомом. Важлива перевага його полягає у швидкості дослідження, доступності, безпеки, що дає можливість широко застосовувати його в амбулаторній практиці та при групових профілактичних оглядах населення.

Статтю підготував та відредагував: лікар-хірург

Клінічна цитологія - визнаний повноцінний метод морфологічного аналізу, заснований на вивченні та оцінці клітинного матеріалу, отриманого у різний спосіб з патологічного вогнища.

У практичній та дослідницькій роботі приваблює простота, швидкість, легка повторюваність. Останнє дозволяє використовувати цитологічний аналіз для вивчення динаміки морфологічних змін протягом захворювання та процесі лікування. Крім того, цитологічне дослідження не потребує великих матеріальних витрат, недорогі реактиви та обладнання.

Все вищевикладене дозволяє широко використовувати метод як морфологічної верифікації за умов поліклініки, так. та для проведення масових профілактичних оглядів, вибору груп ризику з наступним систематичним наглядом за особами, що входять до груп ризику.

У нашій країні клінічна цитологія є розділом лабораторної діагностики і це знаходить своє пояснення в тому, що традиційно дослідження клітинного складу входить до комплексу клінічних лабораторних аналізів - кров, кістковий мозок, ексудати, що відокремлюються різних органів.

Разом про те, на відміну класичних лабораторних методів, які, зазвичай, є кількісними, клінічна цитологія носить описовий характер. Останнє зближує цитологію з іншим морфологічним методом – гістологією. У зв'язку з цим слід зазначити, що у США за останні

Відомо, що цитологічна картина відбиває гістологічну будову та багато в чому гістологічні критерії підходять для оцінки цитологічних препаратів. У цьому слід нагадати, що з описі результатів цитологічного дослідження використовуються діагностичні, а чи не кількісні терміни.

Таким чином, методологічно цитологічне дослідження суттєво відрізняється від решти лабораторних методів.

Потужним стимулом до розвитку клінічної цитології послужили розробка та вдосконалення установок, приладів та інструментів для діагностичного обстеження.

Необхідність морфологічної верифікації сприяла швидкому та значному зростанню числа біопсій, у тому числі, і переважно, пункційних.

І якщо ранню клінічну цитологію було представлено переважно ексфоліативною цитологією: дослідження рідин- ексудати, промивні води; виділень- мокротиння, сеча; мазківз шийки матки, з поверхні пухлини, то зараз переважає пункційна цитологія. В основному матеріал для дослідження одержують за допомогою пункції пухлинних утворень тонкою голкою, під контролем пункції ультразвуку, рентгена, комп'ютерної томографії.

Значну частку досліджень у сучасній клінічній цитології складають дослідження мазків та шматочків, отриманих при трепанбіопсії, мазків-відбитків з операційного та біопсійного матеріалу, мазків щіточкою та зіскрібки при ендоскопічних дослідженнях.

Вибір способу взяття матеріалу визначається характером ураження, локалізацією, можливістю інструментальних досліджень. Бажано використання у комплексі всіх доступних методів взяття матеріалу. Зокрема, при ураженнях сечового міхура для цитологічного дослідження може бути використана нативна сеча (ефективність цитологічної діагностики 40-45%), спиртовий змив (ефективність цитологічної діагностики 60-65%), мазки відбитки зі шматочків пухлини, взятих при цистоскопії (ефективність діагностики близько 90%).

При комплексному обстеженні ефективність цитологічної діагностики становить близько 100%

Роль морфологічних досліджень при діагностиці пухлин невпинно зростає.

Лише детальна морфологічна характеристика новоутворення може повністю задовольнити клініцистів та дати можливість більш обґрунтовано вибрати метод лікування (хірургічне, променеве, хіміотерапевтичне та їх комбінації), оскільки пухлини різної будови, походження та ступеня атипії клітин по-різному реагують на терапію.

Як відомо, морфологічна діагностика захворювань відрізняється найбільшою достовірністю і багато старих та нових методів лабораторної діагностики, що мають дуже велике значення, особливо в сукупності, не можуть виключити морфологічні методи дослідження з клінічної практики.

Незрівнянні переваги над іншими методами має цитологічне дослідження у виявленні раку початкових стадій.

Розвиток ендоскопічної техніки, ультразвукових методів дослідження значною мірою сприяло широкому впровадженню цитологічного аналізу в діагностиці новоутворень практично з усіх тканин організму, у тому числі і з внутрішніх органів, раніше недоступних позаопераційному морфологічному аналізу.

При розпізнаванні про ранніх раків, цитологічний метод має нерідко переваги над іншими способами дослідження.

Свідченням цього є цитологічна діагностика випадків раку шлунка, легені, сечового міхура та інших органів за відсутності клінічних, рентгенологічних та ендоскопічних проявів, ще до появи виявлених цими методами ознак.

Весь досвід існування та постійного вдосконалення клінічної цитології показує, що цитологічне дослідження дозволяє з досить високою достовірністю не лише констатувати наявність злоякісного новоутворення, а й у більшості випадків визначити гістогенез (походження, тканинну приналежність) та ступінь диференціювання пухлини. Останнє дуже важливо для клініки, тому що відомо, що чутливість до різних хіміо-і променевих впливів багато в чому визначається ступенем диференціювання новоутворення. Крім того, рівень диференціювання пухлини може бути використаний як досить значний прогностичний показник.

Проведення ефективних масових профілактичних оглядів, як показує наш досвід та досвід багатьох країн, неможливе без використання цитологічного методу, що набуло повного визнання та широкого поширення в останні роки. На сучасному рівні цитологічне дослідження є одним із ефективних методів діагностики на будь-якому етапі прогресії пухлини і в цьому плані дає можливість: показати характер та ступінь виразності проліферації клітин;

діагностувати злоякісні пухлини при будь-якій локалізації у будь-якій стадії процесу.

Рання та своєчасна діагностика пухлин організаційно складається з двох етапів:

1. Масове обстеження населення (скринінг всієї популяції чи лише груп підвищеного ризику) виявлення пухлин чи ознак, які дозволяють виключити пухлину.

2. Уточнююча діагностика у відібраних під час скринінгу порівняно невеликих групах.

На обох етапах клінічної діагностичної цитології належить важлива роль, причому використання цього характеризується рядом особливостей.

На першому етапі до цитологічного дослідження як до скринінг-тесту пред'являються особливі вимоги і насамперед висока чутливість (тобто висока частота виявлення клітин пухлини у хворих зі злоякісними новоутвореннями та низька кількість так званих «хибно-негативних» результатів) при одноразовому дослідженні матеріалу.

Вже доведено, що цитологічне дослідження мазків з шийки матки є високоефективним скринінг-тестом раку цієї локалізації, бо приблизно в 10 разів підвищує виявлення пухлин, порівняно з візуальною виявлянням;

при цьому значно збільшується відносна частота виявлення раку в ранніх та доклінічних стадіях процесу.

На другому етапі ранньої діагностики пухлин поряд з необхідністю високої чутливості до цитологічного методу пред'являється вимога високої специфічності.

Цитологічне дослідження пунктатів, отриманих тонкою голкою (тонкоголкова біопсія) з пухлин, пухлиноподібних утворень ущільнень будь-якої локалізації: голови, шиї, молочної, щитовидної залози, лімфатичних вузлів, кісток, м'яких тканин кінцівок, шкіри, легень, середовищ ,

2. Цитологічне дослідження ексфоліативного матеріалу.

Цитологічне дослідження секретів, екскретів, відокремлюваних і зіскрібків з поверхні ерозій, виразок, ран, нориць, мокротиння, промивних вод, ексудатів, транссудатів.

3. Цитологічне дослідження ендоскопічного матеріалу.

Дослідження матеріалу, отриманого при бронхоскопії, катетеризації бронхів, езофаго-, гастро-, дуодено-, лаборо-, ректоромано-, колоно-, цистоскопії та інших видів ендоскопічного обстеження за будь-якої локалізації патологічного процесу.

4. Цитологічне дослідження біопсійного та операційного матеріалу

Цитологічне дослідження мазків - відбитків, зіскрібків із біопсійних шматочків та операційного матеріалу.

Цитохімічне дослідження матеріалу - у т. ч. на глікоген, ліпіди, ДНК, РHК, ферменти та ін.

Визначення статевого хроматину у клітинах пухлини.

Цитологічне дослідження матеріалу, одержаного при профілактичних оглядах населення.

Дослідження вагінального епітелію та уроцитограм з метою визначення естрогенної насиченості організму з підрахунком формули дозрівання, КПІ, ЕІ та ін.

Організація роботи цитологічної лабораторії (ЦЛ)

Функціональні обов'язки працівників ЦЛ.

Завідувач ЦЛ.

    Організовує та забезпечує роботу відділення, складає план роботи відділення з розподілом обов'язків між співробітниками.

    Організовує та контролює доставку до лабораторії цитологічного матеріалу та результатів дослідження із прикріплених лікувально-профілактичних закладів (за доставку цитологічного матеріалу несе відповідальність головний лікар установи, яка направляє матеріал), за наявності централізованої доставки – головний лікар базової установи.

    Організовує та контролює виїзди медичного персоналу до прикріплених лікувально-профілактичних закладів для термінових цитологічних досліджень, проведення пункцій, консультацій складних випадків, клініко-біопсійних конференцій, обстеження цитологічних лабораторій.

    Відбирає випадки, що підлягають розбору на клініко-біопсійних конференціях разом із заступником.

    головного лікаря з лікувальної роботи, складає повістку, бере участь у організації проведення клініко-біопсійних конференцій (консультує доповідачів, здійснює попереднє вивчення цитологічних препаратів, слайдів та ін.).

    Проводить щорічний аналіз роботи ЦЛ та подає керівництву ЛПЗ.

    Керує роботою зі складання до постійного поповнення колекції мікропрепаратів, створення фототеки музею.

    Консультує лікарів клінічних відділень із питань клінічної цитології.

    Організовує підвищення кваліфікації лікарів та лаборантів. З цією метою організує та проводить періодичні та тематичні конференції, у т. ч. з дослідження цитологічного матеріалу;

    освоєння нових цитологічних та цитохімічних методик;

    проводить аналіз складних випадків цитологічної діагностики.

Забезпечує готовність роботи відділення під час надходжень для цитологічного дослідження інфекційного матеріалу.

    Відповідає за своєчасне подання заявок на необхідні матеріали, реактиви, інструментарій, обладнання, контролює їхню витрату та використання.

    Несе відповідальність за дотримання співробітниками відділення правил безпеки, протипожарної безпеки, зберігання отруйних речовин.

    Лікар-цитолог

    проводить цитологічне дослідження профілактичного, діагностичного, гормонального, цитогенетичного матеріалу; за потреби проводить термінове цитологічне дослідження, бере участь у спільній роботі з ендоскопістом, хірургом, іншими фахівцями в отриманні матеріалу, за необхідності самостійно здійснює пункційні біопсії;

    залишає мікропрепарати для архіву, фотографування, демонстрації на клініко-біопсійній конференції;

    проводить мікроскопічне дослідження цитологічного матеріалу, описує мікроскопічну картину та встановлює цитологічний діагноз. При встановленні діагнозу злоякісної пухлини, тяжкої дисплазії епітелію, процесів, що вимагають гормональної терапії та хірургічного втручання, проведення променевої чи цитостатичної терапії, результат дослідження підписує зав.

    ЦЛ;

    повідомляє зав.

ЦЛ про всі недоліки у виробничій роботі;

    здійснює організаційно-методичну роботу;

    Старший лаборант

    організовує, забезпечує та контролює роботу середнього та молодшого персоналу лабораторії;

    веде графіки, нараховує зарплатню, виписує хімічний.

    реактиви, перев'язувальний матеріал та ін;

    готує основні розчини хім.

реактивів, здійснює облік та зберігання хім. реактивів;

    організовує навчання середнього, молодшого персоналу у лабораторії;

    допомагає зав.

    відділенням у складанні звітів та заявок на хім. реактиви та обладнання;

    стежить за санітарно-епідеміологічним станом лабораторії.

    Лаборант (фельдшер-лаборант)

    здійснює мікроскопічні дослідження профілактичного та гормонального матеріалу;

    оформляє документацію для реєстрації цитологічного матеріалу;

    обробляє цитологічний матеріал із застосуванням додаткових методик;

    здійснює термінове виготовлення цитологічних препаратів;

оформляє видачі мікропрепаратів із архіву;

здійснює догляд за приладами та апаратурою;

готує хім.

реактиви;

    бере участь в організаційно-методичній роботі щодо покращення якості матеріалу;

    щомісяця звітує про виконану роботу.

    Доставка, реєстрація та маркування матеріалу

    Матеріал для цитологічного дослідження повинен бути доставлений до лабораторії найближчим часом після отримання. (Рідина сеча, вміст кіст, проміни води ексудати, мокротиння). Мазки, висушені на повітрі, можуть зберігатися.

    дані інших методів дослідження (рентген, ендоскопія та ін.); при підозрі на системне захворювання (гемобластози) – аналіз крові;

    опис status localis;

    клінічний діагноз.

Способи отримання та характер матеріалу для цитологічного дослідження

Матеріал для цитологічного дослідження можна отримати різними способами. Насамперед це:

а) Ексфоліативна цитологія, де аналізу піддаються:

    що відокремлюється різних органів (молочну залозу бронхи та ін).

    Для приготування препарату крапля, що відокремлюється, наноситься на скло і готується мазок.

    Можна також робити відбитки з місця виділення (сосок молочної залози, вихідний отвір нориці).

Відокремлюване бронхів зазвичай у вигляді мокротиння збирається в посудину, приготування препаратів докладно описано в розділі дослідження органів дихання,

рідини та вміст кіст отримують шляхом пункції порожнин (черевної, плевральної та ін) і кіст. Якщо матеріалу мало, то він наноситься на скло та розподіляється у вигляді тонкого мазка.Значні кількості рідини попередньо центрифугуються і потім готують мазки з осаду. Таким же чином обробляється матеріал промивних вод,

відбитки зі слизових та шкірних покривів, якщо це доступно, можна робити безпосередньо на скло. В інших випадках мазки готують із зіскрібків шпателем, з тампонів.

Для дослідження ексфоліативного матеріалу у гінекології існують відпрацьовані методики, опис яких – у відповідному розділі. б)з біопсійного та операційного матеріалу значно підвищує ефективність цитологічної діагностики. Крім того, морфологічний висновок може бути отриманий значно раніше, ніж гістологічне. Слід зазначити виняткову цінність таких паралельних досліджень (цитологічних та гістологічних) у можливості проведення цитогістологічних зіставлень, що у свою чергу суттєво збагачує як один, так і інший метод. Для приготування препарату необхідно зіскрібок зі зрізу біоптату або операційного матеріалу розподілити тонким мазком на склі.

Відбитки зі зрізу біоптату або шматочка оперативно віддаленої тканини наносяться дотиком поверхні зрізу до скла. Якщо відбитки роблять з тканини багатою кров'ю (печінка, селезінка та ін.), З поверхні зрізу необхідно зняти кров на фільтрувальний папір і лише потім робити відбитки на скло. г) З розвиткомендоскопічної техніки

    обов'язкове цитологічне дослідження стало доступнішим. У сучасних ендоскопічних приладах є спеціальні пристрої для взяття матеріалу на морфологічне дослідження. При ендоскопії можуть бути одержані зокрема;

    мазки щіточкою,

    промивні води,

    мазки тампоном,

мазки – відбитки щипкових біопсій.

Вибір способу взяття матеріалу визначається характером ураження, локалізацією, можливістю інструментальних досліджень. Бажано використання у комплексі всіх доступних методів взяття матеріалу. Зокрема, при ураженнях сечового міхура для цитологічного дослідження може бути використана нативна сеча (ефективність цитологічної діагностики 40-50%), спиртовий змив (ефективність цитологічної діагностики 60-65%), мазки відбитки зі шматочків пухлини, взятих при цистоскопії (ефективність діагностики близько 90%).

При комплексному обстеженні ефективність цитологічної діагностики становить близько 100%

Цитологічне дослідження є обов'язковим компонентом різних клінічних методів обстеження та необхідно при гінекологічному огляді брати мазки з шийки матки та з цервікального каналу, при підозрі на патологію тіла матки-мазки аспірату.

Ендоскопічне дослідження:

в) колоноскопія, ректоскопія - мазки з ватного тампона, щіткові мазки, відбитки з біопсій,

г) цистоскопія - нативна сеча, спиртовий змив, відбитки з біопсійних шматочків.

д) ларингоскопія - мазки з ділянок ураження та відбитки зі шматочків,

е) шкіра та слизові оболонки – мазки зіскрібків з ділянок ураження, при пухлини – пункція тонкою голкою.

М'які тканини, молочна залоза, лімфатичні вузли, щитовидна залоза – пункція тонкою голкою.

Пункція під контролем ультразвуку (щитовидна залоза, пухлини шиї, печінка, селезінка, нирка, матки, яєчники, передміхурова залоза, заочеревинні пухлини).

Цитологічному дослідженню обов'язково повинні піддаватися пунктати серозних порожнин, кіст, що відокремлюється із зіскрібку молочної залози та ін.

Скло для препаратів має бути чисте, знежирене і сухе.

Приготування стекол

1. Скло ретельно промивають щіткою в теплій мильній (або з миючим засобом) воді.

2. Ретельно промивають у проточній теплій воді.

3. Потім кип'ятять 1-2 години у воді з додаванням соди (2-3%) або миючого засобу.

4. Після добре обполіскують у чистій гарячій воді та промивають у проточній (1-2 години).

Методи досліджень щодо використання світлового (оптичного) мікроскопа називають світловий мікроскопією . Базуються на тому, що через прозорий або напівпрозорий об'єкт досліджень проходять промені світла. Дає можливість вивчати загальний план будови клітини та окремих її органел, розміри яких не менше 200 нм. Сучасні світлові мікроскопи мають кратність збільшення об'єкта у 2-3 тис. разів. Існують різні види світлової мікроскопії: поляризаційна, флуоресцентна, ультрафіолетова, фазово-контрастна і т. п. Під світловим мікроскопом можна спостерігати загальну будову клітин або певні процеси їх життєдіяльності - рух клітини, розподіл, переміщення цитоплазми і т. п. .

Метод електронної мікроскопії

Дослідження клітини за допомогою електронного мікроскопа називається електронною мікроскопією . Здатна збільшувати зображення об'єктів до 500 000 разів та більше. Дозволяє вивчати дрібні об'єкти, органели невеликих розмірів (рибосоми тощо), будову плазматичних мембран. Для електронної мікроскопії препарати певним чином обробляють (переважно важкими металами). Після цього органели та інші клітинні структури набувають різного ступеня поглинання електронів і тому виділяються на екрані або фотоплівці.

Електронний мікроскоп подібний за принципом світлової конструкції. У магнітному полі замість потоку світла рухається потік електронів від катода до анода, який прискорюється високою різницею потенціалів між полюсами. Електромагніти виконують роль лінз. Вони можуть змінювати напрямок руху електронів, збирати (фокусувати) їх у пучок і спрямовувати його на об'єкт дослідження. Частина електронів може розсіюватися, відображатись, поглинатися, взаємодіяти з об'єктом або проходити через нього без змін. Електрони потрапляють на люмінесцентний екран (порушують його свічення) або на особливу фотоплівку (можна фотографувати зображення об'єкта).

Метод трансмісійної електронної мікроскопії

Метод трансмісійної електронної мікроскопії – при розсіюванні пучка електронів об'єктом створюється зображення флуоресцентному екрані мікроскопа. Чим більша здатність розсіювати потік електронів тим чи іншим ділянкою, тим темнішими вони виглядають на екрані.

Метод растрової (скануючої) електронної мікроскопії

Метод растрової (скануючої) електронної Мікроскопія дозволяє вивчити тривимірне зображення поверхні клітини внаслідок пробігання пучка електронів по поверхні об'єкта.

Метод мічених атомів

Метод мічених атомів: для вивчення місця перебігу тих чи інших біохімічних процесів у клітину вводять речовину, в якій один з атомів певного елемента заміщений його радіоактивним ізотопом (кисню, вуглецю, азоту, фосфору). За допомогою спеціальних приладів, здатних фіксувати ці ізотопи, визначають локалізацію та характер біохімічних процесів, можна простежити за міграцією ізотопів у клітині.

Метод фіксування живих об'єктів

Метод фіксування живих об'єктів використовують, застосовуючи певні речовини (формалін, спирти тощо), чи швидким заморожуванням, чи висушуванням.

Особливими барвниками забарвлюють окремі структури фіксованих клітин. Ці барвники фарбують лише певні структури клітини, що дозволяє отримати їхнє контрастне забарвлення.

Метод центрифугування

Метод центрифугування застосовують вивчення окремих клітинних структур. Подрібнені об'єкти розміщують у центрифузі. При дуже швидких оборотах ці об'єкти осідатимуть шарами, оскільки різні клітинні структури мають неоднакову щільність.

Більш щільні органели осідатимуть на дні. Шари поділяють та вивчають окремо.