HLA: всех ли спасет генетический тест? Понятие об HLA-типировании и что оно дает при бесплодии Hla типирование супругов расшифровка результатов

В статье рассмотрим, что представляет собой HLA-типирование супругов.

Часто муж и жена не могут найти причину того, почему у них не получается зачать или выносить ребенка. Первичные лабораторные исследования зачастую не дают ответов на подобный вопрос, и для выявления основных факторов, провоцирующих подобную проблему, специалисты в дополнительном порядке назначают HLA-типирование супругов. Иммунологическая идентичность пары становится существенным препятствием на пути к деторождению.

Актуальность генетического анализа

Генетические исследования - наиболее современная методика выявления патологий и наследственных отклонений у человека. Вся информация о его особенностях, склонности к развитию некоторых заболеваний зашифрована в ДНК. В настоящее момент существуют десятки генетических тестирований, позволяющих выявить причину нарушений здоровья и спрогнозировать их возникновение в будущем. В области пренатальной диагностики анализ на HLA-типирование применяется для раннего определения наследственных заболеваний будущего ребенка и совместимости родителей.

Свойства и типы HLA

HLA в переводе означает "лейкоцитарный человеческий антиген", который отвечает за реакции гистологической совместимости. У каждого человека имеется свой уникальный набор HLA-генов и HLA-молекул. Потомство получает половину HLA-генов от родителей.

Что такое HLA-типирование 2 класса? Наиболее распространенными являются «неклассические» и «классические» гены HLA. Интерес представляют первые HLA 2-го класса, основной функцией которых является антигенное распознавание и межклеточное взаимодействие, обеспечение устойчивости организма к инфекциям. Однако у них есть некоторые минусы – такие гены зачастую становятся причиной возникновения аутоиммунных патологий и проблем в период беременности.

Роль HLA-типирования при беременности

Для полноценного процесса вынашивания антигены матери и отца должны различаться. Эмбрион, сформированный вследствие соединения родительских клеток, обладает особыми антигенами, чужеродными для материнского иммунитета. Организм женщины при этом реагирует на новые клетки включением специальных механизмов, которые защищают плод: вырабатываются антитела-протекторы, которые подавляют специализированные NK – киллерные клетки. Если этот процесс по каким-либо причинам нарушается, последние начинают уничтожать эмбрион, что приводит к самопроизвольному прерыванию беременности. В случаях когда родительские антигены совпадают, ребенок будет являться носителем антигенов, аналогичных материнским. В этой ситуации женский организм считает эмбриональные клетки своими, а значит, в организме не запускаются защитные процессы для сохранности плода. Иммунитет женщины воспринимает плод как опухолевое заболевание и начинает процессы его уничтожения или приостанавливает деление клеток. В повседневной жизни это свойство антигенов спасает человека от развития многих заболеваний, однако в этом случае становится фактором возникновения некроза тканей зародыша и провоцирует выкидыш.

Комплекс гистосовместимости влияет на сами процессы оплодотворения, имплантацию зародыша в матке и вынашиваемость плода. Наблюдается прямая зависимость: чем больше HLA-генов оказалось у супругов схожими, тем больше риск наступления выкидыша. Около 30 % пар с повторяющимися выкидышами имеют по нескольку совпадений. Если обнаружено четыре и более сходных генов, то безуспешные попытки ЭКО и невынашиваемость будут отмечаться практически во всех случаях.

Для полноценного процесса беременности крайне важно не только количественное совпадение у супругов, но и сами аллели HLA-генов у них. Так, в семьях с тремя выкидышами при расшифровке HLA-типирования выявлено повышение числа некоторых антигенов: у женщин – DQB1 0501, 0301, 0602; у мужчин – DRB1 12,10; DQA1 0102, DQA1 0102, 0301; DQB1 0602, 0501.

Показания к проведению

HLA-типирование 2 класса не является стандартной манипуляцией при беременности. Данный тест назначается только в случаях постоянного невынашивания плода и при часто повторяющихся неудачных попытках экстракорпорального оплодотворения.

Его осуществление иногда рекомендовано только отцам, поскольку некоторые вариации антигенов приводят к развитию отклонений во время сперматогенеза и негативно сказываются на качестве и свойствах половых клеток, что оказывает значительное влияние на развитие плода.

Как осуществляется HLA-типирование?

Методика проведения

Полимеразная цепная реакция является высокоточной методикой молекулярно-генетического диагностирования не только бесплодия, но и многих других патологий.

Для проведения данного генетического исследования супруги должны сдать венозную кровь. Из собранного материала выделяются лейкоциты. Анализ проводится методом ПЦР. Специалист-генетик на основе полученной информации будет устанавливать уровень иммунологической совместимости семейной пары.

Расшифровка HLA-типирования

Что означают результаты данного исследования?

Абсолютная иммунологическая несовместимость определяется, если у супругов получен высокий уровень совпадений (пять из шести возможных) среди генов DQA1, DRB1, DQB1. При неполной несовместимости результат исследования не может считаться основной причиной самопроизвольных выкидышей. Абсолютное несовпадение супругов - положительный результат, который идеален для беспроблемного течения беременности.

Расшифровку HLA-типирования 2 класса должен проводить только высококвалифицированный специалист.

Иммунотерапия при совпадении антигенов

Методики сохранения беременности при иммунной идентичности родителей были разработаны несколько десятков лет назад. Один из способов - вшивание беременной женщине тканей отца. Иммунитет начинал после этого атаковать не плод, а инородную ткань. В качестве дополнения проводилась очистка крови и подавление иммунной системы матери.

Перед беременностью необходимо вылечить воспалительные процессы, потому что присутствие инфекции активизирует иммунную систему.

В первой фазе цикла проводится лимфоцитоиммунотерапия лимфоцитами мужа (подкожно вводятся лейкоциты отца). Если супруг болен гепатитом или иными вирусными патологиями, используются донорские лимфоциты. Лимфоцитоиммунотерапия эффективна при наличии 4 и больше совпадений и повышает шанс беременности в 3 раза. Во второй фазе цикла проводится лечение дидрогестероном.

Иммунизация беременной женщины

Иммунизация – наиболее распространенная методика борьбы с HLA-идентичностью. Но на сегодняшний день возможны иные варианты поддержания беременности. После получения результатов исследования врач может рекомендовать применение иммунизации, которая бывает пассивной и активной.

При активной будущей матери вводят концентрированные лимфоциты мужа. Таким образом, ее организм учится узнавать клетки супруга. Некоторые научные исследования приводят данные о 55 процентах положительных результатов после проведенной процедуры.

Пассивную иммунизацию проводят при помощи специальных препаратов - иммуноглобулинов («Интраглобин», «Октагам», «Иммуновенин» и др.). Начинается такая процедура до зачатия, продолжается около трех месяцев. После этого прописываются курсы, поддерживающие беременность. Подобная методика применяется при осуществлении экстракорпорального оплодотворения.

Генетический анализ на антигенную совместимость пары поможет выяснить, является ли невынашивание или бесплодие следствием генетической несовместимости людей. В случае подтверждения этого не следует терять надежду на деторождение: современная медицина, благодаря многочисленным научным испытаниями и разработкам ученых-генетиков, способна решить такую проблему и помочь супругам выносить и родить здорового малыша. При этом родителям необходимо учесть, что им предстоит очень долгий процесс прохождения обследований и в случае наступления беременности постоянное наблюдение у специалиста.

В последние годы проблема бесплодия супружеских пар, невынашивания беременности становится все более актуальной и требует пристального внимания специалистов. Невынашивание, как и бесплодие, - не какая-то отдельная болезнь. Это следствие неполадок и в репродуктивной системе, и вообще в организме будущих матери и отца. Это симптом: нормальное развитие плода под угрозой, а потому жизнь его невозможна. Причин тут несколько: анатомические врожденные и приобретенные факторы, эндокринная патология, инфекции, иммунологические и генетические причины.

Быстро развивающиеся технологии экстракорпорального оплодотворения помогают решать данную проблему, однако, некоторые генетические аспекты остаются за рамками внимания врачей, что иногда не позволяет достигать желаемого результата.

Проблема раннего невынашивания беременности при отсутствии аномалий кариотипа чаще всего имеет иммунологическую природу. В настоящее время все больше исследователей приходят к выводу о тесной взаимосвязи и взаиморегуляции между эндокринной и иммунной системами, реализующейся в эндометрии на ранних этапах имплантации. Сенсибилизация беременных к отцовским HLA-антигенам плода, сходство супругов по HLA, присутствие в HLA-фенотипе родителей определенных антигенов приводит к спонтанным выкидышам, тяжелым гестозам беременности, врожденным порокам развития плода, снижению сопротивляемости потомства к неблагоприятным факторам окружающей среды.

Что такое HLA?

HLA - human leucocyte antigens - антигены тканевой совместимости (cиноним: MHC - major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости).

На поверхности практически всех клеток организма представлены молекулы (белки), которые носят название антигенов главного комплекса гистосовместимости (HLA - антигены). Название HLA - антигены было дано в связи с тем, что эти молекулы наиболее полно представлены именно на поверхности лейкоцитов. Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA - антигенов.

Молекулы HLA выполняют роль своеобразных "антенн" на поверхности клеток, позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки (бактерии, вирусы, раковые клетки и т.д.) и при необходимости запускать иммунный ответ, обеспечивающий выработку специфических антител и удаление чужеродного агента из организма.

Состав каждого антигена HLA кодируется соответствующим HLA-геном 6-й хромосомы. Иначе говоря, индивидуальное сочетание HLA-антигенов у конкретного человека определяется индивидуальным сочетанием HLA-генов. Сочетание HLA генов, получаемое от родителей, столь же индивидуально, как и отпечатки пальцев.

Гены, кодирующие HLA расположены в 7-ми областях (локусах) 6-ой хромосомы:
HLA-A,
HLA-B,
HLA-C,
HLA-D - фактически, состоит из 4 локусов: собственно HLA-D и
HLA-DP,
HLA-DQ,
HLA-DR

Каждый из генов может иметь многие десятки вариантов (аллелей, как их называют генетики) - их разнообразные сочетания и формируют множество комбинаций генов. Именно аллели, выявленные при исследовании, указываются в бланке результатов HLA-типирования.

Выделяют 2 класса антигенов HLA. К классу I относятся антигены локусов A, B и C, а к классу II - антигены локусов DR, DP и DQ. Антигены класса I присутствуют на поверхности всех клеток (а также - тромбоцитов), антигены класса II - на поверхности клеток, участвующих в иммунологических реакциях (B-лимфоцитов, активированных T-лимфоцитов, моноцитов, макрофагов и дендритных клеток).

Гены HLA обозначаются теми же буквами, что и кодируемые ими антигены HLA. Названия генов и антигенов HLA состоят из одной или нескольких букв и цифр, например A3, B45, DR15, DQ4. Буква обозначает ген (область и локус), а цифры - аллель этого гена, при этом цифровые обозначения присваиваются по мере открытия новых аллелей.

Значение HLA при беременности.
При наследовании антигенов тканевой совместимости ребенок получает по одному гену каждого локуса от обоих родителей, т.е. половина антигенов тканевой совместимости наследуется от матери и половина от отца. Таким образом, ребенок является наполовину чужеродным для организма матери. Эта "чужеродность" является нормальным физиологическим явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Формируется клон иммунных клеток, вырабатывающий специальные "защитные" (блокирующие) антитела.

Вне беременности иммунные клетки, циркулирующие в организме как разведчики, выслеживают на поверхности всех без исключения клеток белковый код - белки тканевой совместимости. И если обнаруживаются клетки с измененной структурой (это занесенные микробы или измененные клетки самого организма), организм немедленно выдает иммунный ответ - атипические клетки уничтожаются.

При беременности, если бы процесс был таким однозначным, плод неизбежно погибал бы - внутри "чужие" клетки! Но во время беременности плод и его клеточные структуры неразличимы для иммунной системы материнского организма.

В-клетки отвечают за гуморальное звено иммунного ответа, продуцируя антитела. При наступлении беременности, лимфоциты эндометрия вырабатывают "защитные" антитела против отцовских HLA-антигенов. Эти антитела блокируют HLA-антигены отца от эффекторных клеток иммунной системы матери, они защищают плод от материнских естественных киллеров, способствующих отторжению эмбриона.

Несоответствие супругов по HLA-антигенам и отличие зародыша от материнского организма является важным моментом, необходимым для сохранения и вынашивания беременности. При нормальном развитии беременности "блокирующие" антитела к отцовским антигенам появляются с самых ранних сроков беременности.

Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к "похожести" зародыша на организм матери, что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются.

Большое число совпадающих антигенов главного комплекса гисто-совместимости (HLA) у супругов приводит к тому, что зародыш не распознается организмом матери как плод, а воспринимается как измененная клетка собственного организма, против которой начинает работать система уничтожения.

Важное значение для диагностики иммунных форм невынашивания беременности имеет определение генотипа супругов по HLA-антигенам II класса. Желательно проведение фенотипирования по HLA-DR и HLA-DQ антигенам, особенно по HLA-DR, т.к. эти антигены представлены на клетке в несравненно большем количестве и являются ниаболее иммуногенно активными. Для проведения анализа берется кровь из вены, и из полученного образца выделяют лейкоциты (клетки крови, на поверхности которых наиболее широко представлены антигены тканевой совместимости). HLA-фенотип определяется методом полимеразной цепной реакции.

Для преодоления проблемы сходства супругов по HLA-антигенам существует несколько видов терапии: иммунизации матери концентрированной культурой лимфоцитов мужа, таким образом, что антигенная нагрузка увеличивается в 10000 раз по сравнению с нормой; иммунотерапия препаратами иммуноглобулинов человека, фармакологическое действие при этом: иммуномодулирующее, иммуностимулирующее.

Обзор подготовлен Изместьевой М.В. по материалам сайтов: www.cironline.ru, www.cps.org.ru, www.laborutoria.ru.

Скорее всего, многим приходилось слышать про анализы под названием HLA-типирование. Этот анализ может быть назначен разными специалистами людям разного возраста. Например, такое исследование мог назначить врач ребенку с подозрением на целиакию, а такое подозрение может вызвать любой ребенок (а иногда и взрослый) с проблемами пищеварения. Людям, страдающим аутоиммунными заболеваниями, тоже могут назначить типирование. А еще среди знающих об этом исследовании оказываются супружеские пары, столкнувшиеся с какой-то репродуктивной проблемой.

То есть едва ли не каждый может получить рекомендацию сделать HLA-типирование. Потенциальная целевая аудитория для анализа огромна и исследование можно отнести к категории «модных». Но должно ли так быть? Нужен ли этот анализ всем, кого на него направляют? И что делать с результатом?

Немного теории

Главный комплекс гистосовместимости (MHC – major histocompatibility complex) человека назван HLA (human leucocyte antigens). Открыт этот комплекс антигенов был при изучении свойств лейкоцитов, именно этим объясняется происхождение термина HLA – антигены лейкоцитов человека. Открытие сделал Ж. Доссе в 1952 году, и уже очень скоро стало понятно, что HLA определяет не только иммунологические свойства лейкоцитов, но и других клеток.

Антигены HLA-комплекса представлены тремя классами, в основном исследованию подлежат первый (I класс: HLA-A, HLA-B, HLA-C) и второй (II класс: DR, DP, DQ). Класс III относится к некоторым компонентам системы комплемента – это разновидность неспецифической иммунной защиты организма, находится в основном в плазме крови, а не на поверхности клеток. Антигены HLA-комплекса – это белки со сложной структурой, состоящие из нескольких «альфа» и «бета» доменов (то есть, отдельных частей), а каждый домен кодируется своим вариантом гена (то есть, аллелем).

Для любого белка человека существует больше двух вариантов (аллелей) одного и того же гена. Это свойство называется полиморфизм, который, собственно, обеспечивает индивидуальность каждого из нас. И вот что интересно: ни одна другая генетическая система человека не обладает таким уровнем полиморфности, то есть, разнообразия аллелей, как HLA-система. Так, I класс антигенов кодируется тремя генами (HLA-A, HLA-B, HLA-C), для которых известно от 27 для гена С до 71 для гена В аллельных форм. Для антигенов класса II вариаций еще больше, поскольку больше самих генов (DRα, DRβ, DPα, DPβ, DQα, DQβ) и практически для каждого существуют десятки аллельных вариаций.

Вспомним, что каждый человек получает один аллель от мамы, а второй от папы, что еще больше увеличивает вариативность сочетания аллелей. При попытке подсчитать общее возможное число комбинаций последовательностей HLA-комплекса получается число более триллиона! И это если учитывать только известные на сегодня аллели, хотя продолжают описывать новые. То есть, практически невозможно повстречать людей, которые были бы идентичны по генам HLA-комплекса, за исключением генетически идентичных монозиготных близнецов.

Такое генетическое разнообразие главного комплекса гистосовместимости – плохая новость для трансплантологов и людей, нуждающихся в трансплантации органов. Антигены HLA-комплекса призваны оберегать от чужеродных белков. Безусловно, для успеха переноса органа от одного человека другому HLA-типирование жизненно необходимо. Установили, что более важны для этой процедуры антигены I класса, поскольку именно они находятся на поверхности практически всех клеток. Чем больше совпадений между аллелями донора и реципиента, тем выше вероятность успешной трансплантации.

Открытие HLA-комплекса дало сильный толчок для успешного развития трансплантологии. И, как это часто бывает после удачных открытий, дало соблазнительную надежду на то, что найден ключик если не к решению всех проблем со здоровьем человечества, то к многим из них. Ведь комплекс антигенов большой и отвечает за все иммунологические реакции, а иммунологические реакции задействованы практически во всем.

Начался расцвет иммунологии, гипотезы, теории и исследования продуцировались в огромном количестве. Казалось, что вся медицина должна быть сведена к иммунологии. Скажу сразу, после многолетних исследований большинство этих грандиозных идей не оправдались, и от них пришлось отказаться. Но это там, где медицина основана на доказательствах, а иммунологи занимаются очень узким спектром вопросов. Подавляющее большинство людей не нуждаются во внимании иммунологов и иммунологических исследованиях. Но на наших просторах все еще процветают грандиозные гипотезы и доказанные факты игнорируются.

HLA и бесплодие

Особенно популярно HLA-типирование в контексте «иммунологического бесплодия». Это и не удивительно, вопрос репродуктивной функции, реализации себя как родителя – очень важный и всегда глубоко эмоциональный. А значит, можно легко сыграть (и заработать) на этом. Есть данные, что от 10 до 36% беременностей прерываются спонтанно на ранних сроках у здоровых женщин в возрасте до 35 лет и после 42 соответственно. Если же беременность после ЭКО, то вероятность неудач еще выше. То есть, если прервалась одна или даже две подряд беременности, вне зависимости от их происхождения, – это не повод искать проблему. Тем более, это не повод говорить о «несовместимости» супругов.

Каково же происхождение этой теории? Исследования на экспериментальных животных в 60-х годах показали, что при спаривании сперматозоиды чаще соединяются с яйцеклеткой при выраженных различиях аллелей генов тканевой совместимости (HLA). В 70-х было обнаружено наличие антигенов HLA на поверхности сперматозоидов человека. Возникло предположение, что часть прервавшихся беременностей у человека связана с близкой гистосовместимостью супругов и были предложены терапевтические методы иммуномодуляции. Наиболее популярным подходом было переливание отмытых лимфоцитов мужа или донора до предполагаемой беременности или же, как вариант пассивной иммунизации, – внутривенное введение иммунноглобулинов (IVIG) в течение беременности.

На протяжении нескольких десятилетий европейские и американские врачи не просто следовали этим теориям, но обобщали свои результаты согласно правилам клинических исследований. Крупнейший мета-анализ 90-х годов (Ober C, et al. 1999) расставил все точки над i: это исследование включало 183 пациентки, было рандомизированным, проспективным, двойным слепым и многоцентровым (все условия достоверности!). Результат оказался потрясающим – в группе контроля, т.е. там где женщинам вводилось плацебо, эффективность “лечения” составила 48%, а в группе, получавших иммунотерапию - всего 36%. То есть, теория однозначно не подтвердилась.

На сегодня ведущие мировые рекомендации, основанные на доказательствах, гласят: «HLA - типирование, выявление цитотоксических антител против антигенов мужа и иммунотерапия не могут быть рекомендованы для обследования супружеских пар с невынашиванием беременности» .

Это и понятно, учитывая то количество аллельных форм HLA-комплекса, о котором нам известно теперь. Реальное количество прервавшихся беременностей по иммунологической причине очень и очень мало. И даже если такой случай и был (хотя достоверно доказать его просто не возможно), это не является правилом для каждой беременности у данной пары. Поскольку вариантов комбинаций аллелей чрезвычайно много! И у следующего ребенка такая комбинация может быть даже очень благоприятной.

Так что, грустно наблюдать, как процветают не оправдавшиеся теории. И особенно если учесть, на основании каких анализов делают грандиозные выводы про HLA-совпадения. Практически невозможно провести полное HLA-генотипирование супругов, поскольку объем исследования был бы колоссален. Результаты, которые выдают в лабораториях, является очень приблизительным и очень усеченным вариантом типирования. Оценка совпадений генотипов супругов по таким результатам равноценна гаданию на кофейной гуще. И ладно бы ограничится громкой теорией про причину невынашивания, но главная опасность лишних анализов – лишнее псевдотерапевтическое вмешательство.

К началу 2000-х были детально проанализированы все иммунологические теории невынашивания и разные методы их коррекции. Вот окончательный вывод, основанный на многочисленных статистически достоверных исследованиях:

«Ни иммунизация лейкоцитами мужа, ни внутривенное введение иммуноглобулинов не увеличивает частоту родов у женщин с необъяснимыми повторными выкидышами. Такое лечение является дорогостоящими и имеет потенциально опасные побочные эффекты. Недопустимо подвергать женщин дополнительному чувству утраты, связанному с ложными ожиданиями от неэффективного лечения. Кроме того, лабораторные тесты, которые направлены на выявление показаний к иммунотерапии не имеют прогностического значения для исходов беременности и не должны применяться» .

Давайте же прислушаемся к выводам, полученным тяжелым опытом других. Не будем наступать на те же грабли.

HLA и аллегрия

Еще одна ранняя гипотеза состояла в предположении, что любая иммунологическая реакция организма контролируется исключительно генетически. Но после многолетних исследований и успешного проекта по секвенированию генома человека приходится признать, что генетический контроль - лишь полдела.

Хотя следует учитывать связь между развитием аутоиммунных заболеваний и отдельными аллелями HLA-комплекса. Достоверно известно про ассоциацию целиакии с аллелями генов DQ2 и DQ8. А антиген В27 ассоциируется с такими заболеваниями как ювенильнй ревматоидный артрит, синдромом Рейтера и др. Научные исследования этого направления продолжаются, важно собрать как можно больше данных для статистической достоверности и, возможно, будут сделаны еще какие-то ценные открытия.

Но это научные цели. Что же до диагностической ценности таких исследований, следует понимать, что ассоциация HLA-аллеля указывает на определенную связь между ним и заболеванием, но это не тот случай, когда аллель прямо определяет данное заболевание.

Так, аллели DQ2 и DQ8, ассоциированные с целиакией, встречаются у 10% людей, а сама целиакия только 1,5% населения. Или, например, 90% людей, страдающих анкилозирующим спондилитом, имеют антиген В27, однако у 10% людей с этим заболеванием нет антигена В27, а у 5% имеющих данный антиген заболевание никогда не разовьется.

То есть, генетический анализ не способен дать окончательный ответ в случае диагностики аутоиммунных заболеваний. Да, такое исследование может быть одним из маленьких аргументов, который поможет врачу, но только вместе с множеством других анализов, не генетических.

Поэтому, если вас просят принят участие в проекте исследования, включающем в себя HLA-типирование, на которое вам надо потратить лишь свое время, но не деньги – соглашайтесь, внесите посильный вклад в науку. Если же вас направят на такой анализ за ваш счет, поинтересуйтесь у врача (может быть, даже не у одного) – а настолько ли важен результат для установления окончательного диагноза и для выбора тактики лечения.

После безуспешных попыток стать родителями, многие пары проходят ряд обследований, чтобы выявить причину бесплодия, среди которых — анализ на генетическую несовместимость. Какие основания нужны для такого трудоемкого и дорогостоящего анализа и как он может помочь в решении проблемы?

Патологическая схожесть

В обычной жизни некоторая похожесть супругов воспринимается как положительный фактор. Но если у пары на генетическом уровне существуют совпадения, в большинстве случаев это отразится на способности зачать ребенка.

Дело в том, что защитный механизм женщины очень чутко реагирует на инородные клетки. В этом нет ничего плохого, но когда наступает беременность, у нее должен включиться дополнительный уровень защиты, который будет охранять оплодотворенную яйцеклетку от отторжения. Это возможно только в том случае, когда генотип эмбриона состоит из разных цепочек ДНК – отца и матери .

Если генетические показатели родителей похожи, иммунная система женщины воспринимает зародыш как часть своих, но видоизмененных клеток, которые нужно «уничтожить» и пытается подавить их. В результате беременность прерывается в самом начале либо совсем не наступает.

В каких случаях супругам нужно сдать анализ?

Заподозрить генетическую несхожесть супругов можно по таким критериям:

Невынашивание беременности.
Выкидыши на любом сроке без обоснованных причин.
Неудачные попытки искусственного оплодотворения.
Длительное бесплодие при регулярной половой жизни.
Возраст супругов — старше 35 лет.

По данным статистики среди причин бесплодия 15-20% занимают генетические и иммунологические факторы.

Основанием для проведения теста на совместимость служит брак между кровными родственниками. В этом случае кроме невозможности забеременеть, существует риск того, что ребенок родится с генетическими патологиями.

Перед началом исследования нужно убедиться, что причины, вызывающие бесплодие не связаны с другими факторами. Для этого муж и жена должны пройти все необходимые обследования у репродуктолога.

К слову, анализ на совместимость (HLA-типирование) могут назначить людям, страдающим аутоиммунными заболеваниями и детям с подозрениями на целиакию.

Механизм проведения

Для проведения анализа оба супруга должны сдать кровь из вены в специальной лаборатории.

За две недели до этого желательно исключить употребление:

Алкоголя.
Сигарет.
Антибиотиков.

Мужчина и женщина в этот момент не должны болеть, так как это может отразиться на результатах . После сдачи анализа полученный генетический материал изучают, а затем сравнивают характеристики обоих супругов. Для этого из крови выделяются лейкоциты, поскольку именно в них содержится небольшая концентрация антигенов.

Существует два метода исследования:

Кариотипирование – изучение хромосомного набора. Такой анализ проводится один раз и помогает выявить генетические патологии родителей. С помощью него диагностируется генетическая предрасположенность ко многим заболеваниям.
HLA-типирование , определяющее у супругов антигены тканевой совместимости.
Антигены HLA-комплекса представлены тремя классами. Как правило, анализ направлен на исследование первого и второго класса генов (I класс: HLA-A, HLA-B, HLA-C, II класс: DR, DP, DQ).

Пациенты, решающие сдать анализ на совместимость могут пройти два разных теста – первого и второго класса. Но для большей информативности медики советуют проходить оба теста.

Антигены HLA-комплекса – это сложные белки, состоящие из отдельных частей (доменов), для каждого из которых существует больше двух вариантов (аллелей) одного и того же гена.

Поскольку разобраться в этих кодировках простому человеку почти невозможно, расшифровка результатов проводится специалистом-генетиком.

Некоторые ученые пришли к выводу, что благодаря генетическому разнообразию, которое дети получают от родителей разной национальности, их собственный генотип получает массу преимуществ. По их мнению, такие дети рождаются выше, красивее и образованнее, чем остальные.

О чем свидетельствуют результаты?

Ждать результат придется от 7 до 23 дней, в зависимости от того, какой метод проводился:

Кариотипирование – 20-23 дня.
HLA-типирование − 5-7 дней.

Стоит отметить, что полная генетическая несовместимость встречается крайне редко. В случае, если анализ показал частичную несовместимость, по одной или двум аллелям, семейная пара может попытаться зачать ребенка без медицинского вмешательства, так как такая генетическая идентичность не является критичной.

Совпадение по 3 и более антигенам HLA второго класса говорит о том, что именно совпадения в цепочке ДНК стали причиной неудачного планирования беременности. В медицине это явление носит название иммунологическое бесплодие.

В настоящее время медицина способна корректировать генетическую несовместимость, после чего у пары есть все шансы родить здорового ребенка.

Для этого понадобится лекарственная терапия обоих супругов или только женщины, в зависимости от степени несовместимости. Часто в этих случаях женщине показана активная иммунизация клетками мужа, чтобы приучить ее организм их распознавать. После прохождения теста и удачного лечения, у 85-90% супружеских пар получается родить ребенка . Причем все последующие дети в этой семье рождаются без помощи специалистов.

Тест на генетическую несовместимость позволяет многим парам стать счастливыми родителями. Но прежде чем проводить анализ на совместимость по HLA-антигенам, супругам следует посетить репродуктолога, а затем специалиста-генетика. Также пара должна быть готова дополнительному лечению, только так можно предотвратить бесплодие и минимизировать риск генетических аномалий.

Иммунные нарушения в организме супругов способствуют многочисленным неудачам при экстракорпоральном оплодотворении. К одной из самых распространённых категорий иммунных нарушений относится идентичность мужа и жены по системе HLA-антигенов.
Анализы на HLA-совместимость супругов в последнее время всё чаще рекомендуют тем парам, у которых уже были неудачные попытки ЭКО. HLA-типирование мужчины и женщины, которые решили прибегнуть к ЭКО, как к последней возможности обзавестись потомством, даёт возможность определить степень «несовместимости». Как правило, HLA-типирование назначают с целью уточнения причины бесплодия, а также для определения методов дальнейшего лечения.

HLA- совместимость

HLA–антигены присутствуют на поверхности почти всех клеток организма, но максимально полно данные молекулы представлены на лейкоцитах, благодаря чему и получили своё название. У каждого человека имеется свой персональный набор HLA-антигенов. Благодаря их молекулам, организм обладает способностью различать свои клетки от чужеродных, вырабатывая при необходимости специфические антитела. Они способствуют уничтожению чужих агентов, в роли которых могут выступать вирусы, раковые клетки, бактерии.

Наличие HLA-антигенов у каждого человека определяется точно таким же персональным набором HLA-генов. Ребёнок получает от своих родителей абсолютно индивидуальное сочетание HLA-генов, сходное по своей уникальности с отпечатками пальцев. Существует 2 класса HLA-антигенов: антигены локусов A, B и C и антигены локусов DR, DP и DQ. HLA-антигены первого класса встречаются на поверхности любых клеток, HLA-антигены второго класса присутствуют только на поверхности тех клеток, которые принимают участие в иммунологических реакциях. К ним относятся активированные Т-лимфоциты, В-лимфоциты, моноциты, дендритные клетки и макрофаги.

HLA- совместимость и беременность

Наследуя антигены тканевой совместимости, плод получает от матери и отца по одному гену каждого локуса. Таким образом, половина антигенов наследуется от отца, из-за чего ребёнок, которого вынашивает женщина, является для неё наполовину чужеродным. При нормальном стечении обстоятельств, подобный фактор относится к разряду обычных физиологических явлений. Запуск иммунологических реакций, обусловленный этим процессом, обеспечивает сохранение беременности. Формирование клона иммунных клеток способствует выработке особых блокирующих антител.

В организме не беременной женщины иммунные клетки, выполняющие роль разведчиков, находят на поверхности любых клеток белки главного комплекса HLA-антигенов. Обнаруживая «чужаков», например, раковые клетки или занесённые извне вирусы, иммунная система отдаёт приказ на уничтожение. Если бы при возникновении беременности этот процесс происходил в таком же порядке, то у плода не было бы шанса выжить, поскольку для организма матери он является «чужаком».

Но подобного не происходит по той причине, что во время беременности иммунная система матери не различает клеточные структуры плода. В этот период В-лимфоциты эндометрия способствуют выработке защитных антител, которые направлены против HLA-антигенов, полученных ребёнком в наследство от отца. Данные антитела обеспечивают блокировку HLA-антигенов отца, защищая их от материнских иммунных клеток, которые выступают в роли разведчиков, благодаря чему последние не в состоянии осуществить передачу информации клеткам-киллерам. По этой причине иммунная реакция организма матери не активируется в ответ на появление изначально «чужих» клеток, и эмбрион благополучно приживается.

При этом огромное значение имеет отсутствие идентичности HLA-антигенов супругов, поскольку лишь в этом случае механизм запуска блокирующих антител, способствующих сохранению беременности. Если же HLA-антигены родителей являются сходными, то антитела, главной задачей которых является блокировка отцовских HLA-антигенов, не вырабатываются. В результате клетки-разведчики воспринимают плод в качестве инородного тела, включая против него систему уничтожения. Итогом этого процесса становится выкидыш. Чем больше антигенов HLA совпадает у родителей, тем меньше шансов выносить беременность.

HLA-типирование

Наличие HLA-идентичности очень часто становится причиной женского бесплодия, либо привычного невынашивания. Именно поэтому пациенткам, избравшим в качестве метода лечения бесплодия экстракорпоральное оплодотворение, врачи часто рекомендуют пройти вместе с мужьями HLA-типирование. Показаниями к HLA-типированию являются не только бесплодие, но и наличие в анамнезе выкидышей или неудачных попыток ЭКО.

HLA-типирование подразумевает анализ полиморфизма HLA и осуществляется он, как правило, двумя способами. Первый из них, классический, базируется на микролимфоцитотоксическом тесте. Применение молекулярно-генетического метода подразумевает проведение полимеразной цепной реакции.

Классическое, или серологическое HLA-типирование, осуществляется на выделенных клеточных популяциях. Поскольку антигены основного комплекса гистосовместимости большей частью несут на себе лимфоциты, для определения антигенов l класса используется суспензия Т-лимфоцитов, для антигенов II класса - суспензия В-лимфоцитов. Для того, чтобы выделить из цельной крови требуемые клеточные популяции, применяются два способа – иммуномагнитная сепарация или центрифугирование. Как правило, в основном используется первый метод, поскольку второй чаще становится источником ложноположительных данных по причине гибели части клеток.

Для проведения лимфоцитотоксического теста HLA-типирования используется специальная сыворотка, в состав которой входят антитела к различным видам антигенов обоих классов. В процессе проведения серологического теста, изучая, какой вид сыворотки вступает в реакцию с лимфоцитами, удаётся выяснить HLA-тип. В случае возникновения реакции между сывороткой и клеткой, на поверхности последней формируется комплекс антиген-антитело. Если в сыворотку влить раствор, в состав которого входит комплемент, разрушение и гибель клетки неизбежны.

Для оценки серологического метода HLA-типирования используется флуоресцентная микроскопия, причём красная флуоресценция означает наличие позитивной реакции, а зелёная – негативной. При определении результата этого метода учитывается специфичность сывороток, проявивших реакцию, а также определённых групп антигенов, вступивших в перекрёстную реакцию. Кроме того, принимается во внимание также и интенсивность цитотоксической реакции.

У этого метода HLA-типирования существуют определённые недостатки:
- низкая экспрессия HLA-антигенов или слабое сродство антител;
- существование перекрестных реакций;
- отсутствие белковых продуктов у некоторых HLA-генов.

Применение молекулярно-генетических способов HLA-типирования подразумевает использование уже готовых синтетических образцов, вступающих в реакцию с ДНК, а не с антигенами, что позволяет с точностью определить присутствие в пробе конкретных типов антигенов. Этот способ, помимо прочего, не нуждается в наличии живых лейкоцитов, с его помощью можно изучить любую клетку организма, а для исследования необходимо ничтожно маленькое количество крови. В некоторых случаях достаточно лишь соскоба, взятого со слизистой оболочки рта.

При использовании молекулярного способа HLA-типирования применяется метод ПЦР. Первый этап – это получение из цельной крови чистой геномной ДНК, тканей или лейкоцитарной суспензии. После этого в пробирке, с помощью коротких одноцепочных ДНК, специфичных по отношению к конкретному HLA –локусу, получают копию имеющегося образца ДНК. Эту операцию повторяют много раз, с целью получения количества ДНК фрагментов, достаточного для визуальной оценки. С этой целью реакционные смеси подвергают гибридизации или электролизу, а затем устанавливают наличие специфической амплификации.

Молекулярно-генетическое HLA-типирование считается более точным, чем серологическое. Обусловлено это наличием стандартизированных образцов. Помимо этого, молекулярное HLA-типирование предоставляет большее количество важной информации, касающейся новых аллелей ДНК, а также обеспечивает более качественную детализацию за счёт идентификации и антигенов, и самих аллелей. Последние, в свою очередь, определяют наличие на клетке конкретного типа антигена.

Если совпадений было много, то зачатие не наступит без соответствующей иммунотерапии. Курс лечения проводят до начала протокола экстракорпорального оплодотворения, и занимает он обычно 2-3 месяца. Пациентке назначают препараты иммуноглобулинов, например, Интраглобин, Октагам и другие. Ещё один курс лечения проводят и в начале беременности, это помогает максимально снизить риск возникновения реакции отторжения эмбриона.