Игх исследование. ИГХ-исследование - что это такое? Где проводят исследование ИГХ? ИГХ-исследование: расшифровка. Гены, рецепторы и факторы роста

Важнейшим пунктом при диагностике раковых заболеваний является иммуногистохимическое исследование. Ежедневно в организм человека проникают микроорганизмы, способные запустить развитие патологического процесса. Защитные силы противостоят этому, образуя антитела. Эта реакция и легла в основу создания ИГХ-исследования.

Суть метода

Данный способ диагностики раковых заболеваний является наиболее современным и достоверным. В процессе развития опухолевого процесса образуются чужеродные организму белки - антигены. В это же время иммунная система вырабатывает антитела, главная цель которых - предотвращение размножения патогенных микроорганизмов.

Задачей иммуногистохимического исследования является своевременное выявление раковых клеток. Для этого биологический материал пациента обрабатывается множеством антител, после чего тщательно изучается под микроскопом. Если данные белковые соединения свяжутся с опухолевыми клетками, будет визуализироваться их свечение. Возникновение эффекта флюоресценции и свидетельствует о наличии в организме раковых клеток.

На сегодняшний день в распоряжении специалистов, осуществляющих ИГХ-исследование, имеются практически все антитела к различным видам опухолей, что служит залогом получения достоверных результатов.

Возможности

Современный вид диагностики позволяет определить:

распространение опухолевого процесса;
скорость роста злокачественных новообразований;
вид опухоли;
источник метастазов;
уровень злокачественности.

Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования может оцениваться степень эффективности лечения раковых заболеваний.

Показания и противопоказания

С помощью данного способа существует возможность изучения любых тканей человеческого организма. Главным основанием для назначения иммуногистохимического исследования является подозрение о наличии злокачественного образования.

В этом случае метод используется для:

определения вида опухоли и области её локализации;
обнаружения метастазов;
оценки активности ;
выявления патологических микроорганизмов.

Также анализ эффективен при проблемах с зачатием.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия показано при:

бесплодии;
заболеваниях матки;
наличии патологий в органах репродуктивной системы;
невынашивании беременности;
хронических заболеваниях эндометрия.

Кроме того, ИГХ-исследование назначается пациенткам, у которых не наступает беременность даже после нескольких попыток экстракорпорального оплодотворения. Метод позволяет определить, имеются ли в организме клетки, снижающие вероятность зачатия.

Противопоказаний к ИГХ-исследованию не существует. Единственным фактором, из-за которого невозможно провести анализ, является непреодолимая сложность при заборе биоматериала пациента.

Как проводится

В первую очередь методом биопсии получают образец ткани больного. Реже забор материала осуществляется в процессе эндоскопического обследования или хирургического вмешательства. Способ получения образца зависит от вида опухоли и её локализации.

Важным нюансом является то, что забор материала при первичном обследовании должен осуществляться до начала лечения. В противном случае результаты исследования могут быть искажены.

После забора биоматериала его помещают в формалин и отправляют в лабораторию, где он подвергается следующей обработке:

Образец ткани обезжиривается и заливается парафином. В данном виде биологический материал может храниться очень долго, за счёт чего ИГХ-исследование может быть проведено повторно.
С образца собирают несколько тонких срезов и перемещают их на специальные стёкла.
На них биоматериал окрашивается растворами различных антител. На данном этапе может применяться как малая панель, так и большая. В первом случае изучаются реакции после использования 5 видов антител, во втором - до нескольких десятков.
В процессе иммуногистохимического исследования при раке любого органа появляется эффект флюоресценции, что даёт возможность специалисту определить вид злокачественных клеток.

Интерпретация результатов

Как правило, заключение готово через 7-15 дней. Срок зависит от вида используемой панели (малой или большой). Расширенный способ занимает больше времени.

Изучением срезов биоматериала занимается патологоанатом, имеющий знания и навыки (подтверждённые официальным документом), необходимые для проведения анализа.

При интерпретации результатов особое внимание обращается на показатель Ki-67. Именно он предоставляет информацию о степени злокачественности процесса. Например, если результат показателя после проведения иммуногистохимического исследования при раке молочной железы составляет не более 15%, считается, что прогноз более чем благоприятный. Уровень в 30% свидетельствует об активности опухолевого процесса, т.е. о быстрой скорости его развития. Как правило, она останавливается после курса химиотерапии.

По некоторым статистическим данным, если Ki-67 составляет менее 10%, итог заболевания будет благоприятным (в 95% случаев). Отметка в 90% и выше означает почти 100%-ный летальный исход.

Кроме показателя злокачественности, в заключении указываются:

антитела, к которым выявлено сходство (тропность);
вид раковых клеток, их количественное значение.

Важно понимать, что точный диагноз ставится после получения и изучения информации, собранной посредством всех проведённых диагностических процедур. Несмотря на то, что ИГХ-анализ считается наиболее информативным методом по сравнению с гистологией, иногда необходимо использовать оба способа. Расшифровкой иммуногистохимического исследования занимается исключительно онколог.

В заключение

В современной медицине особое внимание уделяется диагностике раковых заболеваний. Наиболее современным и информативным методом считается С его помощью выявляется не только наличие но и определяется их вид и скорость развития злокачественного процесса. Кроме того, на основании результатов производится оценка эффективности назначенного лечения.

Иногда результатов гистологии бывает недостаточно. Если не удается получить окончательный ответ и поставить диагноз или необходимо уточнение молекулярных параметров опухолевого образования назначается иммуногистохимическое исследование.

Что это такое

Метод иммуногистохимии используют как дополнительный. Он помогает выявить в биологическом материале специфичные белки, которые характерны для определенного вида клеток и, как следствие, отличить одну разновидность опухолевого образования от другой. Также исследование помогает выявить:

Маркеры иммуногистохимии, которые отвечают за чувствительность опухоли к воздействию лекарственных средств, лучевой терапии.
Метастатический характер происхождения образования и определить первичный источник поражения.
Гормоны и рецепторы к ним.
Малигнизацию клеток.

ИГХ как метод диагностики широко применяется в онкологии. Этот вид изучения тканей предполагает применение определенных реактивов. Они содержат в себе антитела или белковые соединения, которые помечены определенными веществами.

ВАЖНО! Антитела (иммуноглобулины, специфические белки) вырабатываются различными клетками организма и обеспечивают иммунитет, при внедрении антигена. Часто вырабатываются при попадании вирусов, бактерий, при онкологии, вакцинации, пересадке тканей, а иногда и против собственных клеток, что приводит к аутоиммунным патологиям. Получают их от различных животных. [>

При контакте с антигенами, которые могут содержаться в исследуемом биоптате, происходит специфическая реакция (антигенами являются межклеточные вещества ткани, компоненты клеточных структур). В результате нее можно судить о наличии или отсутствии того или иного вещества в тканях.

ВАЖНО! Антигены - генетически чужеродное тело, которое при попадании в организм вызывает иммунную реакцию, а именно выработку антител для подавления этого чужеродного агента. В случае с ИГХ-анализом антигенами выступают молекулы, которые вырабатываются патологически измененными опухолевыми клетками.

Структурная специфичность исследования - принципиально отличает ИГХ от других способов иммунологической диагностики, которые используют реакцию антиген-антитело. Т. е. специалисты оценивают помимо присутствия тех или иных веществ в тканях (при наличии или отсутствии окрашивания) и их количественный состав (по интенсивности окрашивания), еще пространственное распределение различных структурных элементов (цитоплазма, ядро, мембрана клетки и пр.) в тонком окрашенном срезе.

Способы проведения исследования

Реакцию можно получить несколькими способами. Часто применяется прямой, при котором используется один вид маркированных антител. Последние должны связаться с выявляемым веществом или молекулой-мишенью. Если последняя присутствует в биоптате, то исследуемая ткань окрашивается.

Непрямой метод считается более информативным и чувствительным. Его суть заключается в поэтапном введении 2 разных антител. Немаркированные первичные антитела вступают в реакцию с опухолевым антигеном в биоптате, образуют комплекс антитело-антиген. Затем вводят вторичные уже маркированные антитела (реагент), которые связываются с определенной частью молекулы первичного антитела. Т. е. первичные антитела являются антигенами для вторичных.

Когда назначается исследование?

ИГХ назначается в том случае, когда обычного гистологического исследования недостаточно. Например, когда опухоль молочной железы имеет неспецифичное микроскопическое строение, не позволяющее поставить точный окончательный диагноз.

Что показывает

Биопсия с иммуногистохимией являются важной частью верификации диагноза при раке молочной железы, предстательной железы, мягких тканей и пр. Особенно актуально исследование для выявления лимфом, поскольку зачастую диагностировать эту болезнь без ИГХ невозможно. Большую роль ИГХ исследование играет в определении гистологического типа недифференцированных опухолевых образований, а также метастазов, которые имеют невыясненный первичный очаг.

Иммуногистохимия рака молочной железы полезна в прогнозировании течения опухолевого процесса и возможности таргентной терапии. Она помогает оценить:

функциональное состояние клеток образования;
злокачественный потенциал и темп роста опухоли;
тенденцию к метастазированию.

Как делается анализ?

Чтобы провести исследование, необходимы образцы самой опухоли и близлежащих тканей. Их можно получить при биопсии или после хирургического вмешательства. Материалу необходимо пройти несколько этапов подготовки перед исследованием: фиксация, промывание, обезвоживание, погружение в парафин или заливка другим веществом.

Исследуемый биологический объект должен получиться плотным, но не хрупким. Сначала материал промывают, обезвоживают и уплотняют в спиртах возрастающей крепости. Затем его просветляют путем погружения в смесь абсолютного спирта и О-ксилола в пропорции 1:1. После этого помещают в несколько порций чистого О-ксилола. И только потом биологический объект пропитывают в парафине. Последний этап помогает законсервировать ткань и на долгое время сохранить ее структурные особенности в парафиновом блоке.

Затем лаборант производит с этих блоков срезы, при помощи специального прибора - микротома, толщиной до 1 мкм. Полученные срезы наклеивают на предметное стекло, которое смазано глицерином и смесью белка. Подсушивают.

Чтобы исследуемый материал вступил в реакцию с антителом, необходимо его обезжирить и удалить парафин. Процедура называется депарафинизация. Для ее проведения используют 3 порции О-ксилола, а также спирты нисходящей крепости.

Последний этап - окрашивание. Оно проводится для того, чтобы четко видеть структуру тканей под микроскопом. Лаборанты могут использовать огромное количество красителей. Условно их можно классифицировать по:

происхождению, например, животные - кармин, растительные - гематоксилин, синтетические - эозин;
химическим свойствам, например, нейтральные, основные, кислые.

Чаще всего для этой процедур используют эозин, гематоксилин. Биологический материал помещают в раствор гематоксилина на несколько минут, затем промывают и дифференцируют результаты окрашивания. После этого провидится окрашивание в эозине, промывание и обезвоживание в спиртах восходящей крепости. Последовательная многоэтапная окраска позволяет на каждом этапе все больше определить нозологию и фенотип опухолевого образования. Патоморфолог изучает материл под микроскопом после каждого окрашивания. И только после оценки изменений и интерпретации полученной информации, назначает панель антител.

Чтобы получить точные данные о патологическом процессе и верифицировать заболевание лаборант приступает к обработке подготовленного образца специальными реактивами, содержащими меченые антитела. В результате происходит реакция между антителом и антигеном. Это сопровождается характерной визуализацией, которая зависит от веществ, используемых для маркировки.

Что означают результаты?

Иммуногистохимия молочной железы - это сложный многоступенчатый анализ, на результат которого влияет множество факторов, например, низкое качество реагентов, недостаточная фиксация исследуемого биологического объекта или неправильно подобранная панель антител. Количество искомых клеток-мишеней исчисляется сотнями, поэтому специалист должен понимать, что он ищет и использовать для этого необходимые антитела.

Гистологи оценивают интенсивность окрашивания опухолевых клеток после взаимодействия с реактивами по специальной шкале:

0-1+ - онкологии нет;
2+ - онкологическое образование отрицательное;
3+ - онкологическое образование положительное.

Длительность ИГХ при раке молочной железы во многом зависит от способа его проведения. Бывает ручной и автоматический. Последний считается более совершенным, поскольку вероятность технической ошибки сведена к минимуму, да и проводится он гораздо быстрее.

Перед определением тактики лечения онколог задается различными вопросами: какова вероятность рецидива заболевания у больного или его смерти, какой результат лечения можно ожидать. Для этого специалист изучает особенности и характеристики опухоли и в зависимости от различных предсказывающих и прогностических факторов назначает тактику лечения.

Прогностические факторы

К этим факторам относятся основополагающие признаки, которые определяют особенность протекания болезни и ее исход. При операбельных формах онкологии груди к таким факторам относятся: морфологическое строение и его размер, состояние лимфоузлов. Т. е. подобные характеристики определяют хронологию болезни.

Особенности прогностических факторов:

Базируются на биологических характеристиках опухолевого образования.
Взаимосвязаны с продолжительностью жизни пациента в независимости от тактики терапии.
Делят пациентов по степени риска смерти, рецидива.
Примеры: индекс митотической активности, протеолитические ферменты, антиогенез и др.

Индекс митотической активности (MAI) является независимым прогностическим фактором, который характеризует продолжительность жизни больных. У пациентов с индексом меньше 10 в процессе наблюдения летальный исход составлял 6 %, у пациентов с индексом больше 10 - 28 %.

Протеолитические ферменты имеют значение в процессе метастазирования. В трансформированных злокачественных клетках таких ферментов вырабатывается больше, чем в здоровых, поэтому при злокачественных образованиях наблюдается выход этих веществ в межклеточное пространство и увеличение активности. Т. е. ферменты вовлечены в процесс онкогенеза. Т. о. пациенты с низким уровнем этих ферментов имеют более благоприятный прогноз по безрецидивной выживаемости.

Способность новообразования расти и метастазировать во многом зависит от ангиогенеза - образования новых кровеносных сосудов. В процессе наблюдения пациентов в течение 10 лет, было выявлено, что у женщин с высоким значением плотности микрососудов в опухоли прогноз хуже.

Предсказывающие факторы

Эти факторы предсказывают эффективность лечения. Они помогают выделить группу пациентов с более-менее значимым ответом на проводимую терапию. К примеру, опреелить эффективность гормональных препаратов, уровень рецепторов стероидных гормонов.

К клиническим факторам, которые помогают интерпретировать ответ на терапию при метастатической форме рака относятся:

Локализация и количественный показатель метастазов. Например, при поражении кости - прогноз относительно благоприятный; поражение кости, 2 органов, легких - менее благоприятный; при поражении больше 2 органов, наличии метастаз в печени, мозгу и пр. - неблагоприятный.
Временной интервал между лечением первичного новообразования и появления метастазов. Чем он продолжительнее, тем благоприятнее прогноз.
Общее состояние здоровья пациента.
Возрастная категория. Женщины в постменопаузе имеют больше шансов на благоприятный ответ на терапию.
Рецепторы стероидных гормонов в опухоли (гормононезависимые новообразования не реагируют на гормональное лечение).

Метастатический рак молочных желез считается хронической патологией. После полного регресса, полученного в результате химиотерапии, продолжительность жизни 5-10 лет встречается достаточно редко, примерно в 5-20 % случаев. Поэтому для лечения считается оптимальным вариантом - последовательное применение лечебных воздействий с как можно меньшей токсичностью, чтобы получить максимальный паллиативный эффект и отсрочить прогрессирование патологии, смерти.

Достоверность результатов ИГХ молочной железы достигает 99 %. Методика чувствительна и высокоспецифичная. Она помогает верифицировать патологический процесс и установить стадию заболевания. Для ее проведения необходимо минимум биоптата и реактивов, при этом она будет информативна даже спустя длительное время после взятия биопсии.

[12-027 ] Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 1 антитела)

3300 руб.

Заказать

Исследование клеток ткани, которое проводится с помощью специальных реактивов.

Синонимы русские

ИГХ, иммуногистохимия, иммуногистохимический анализ.

Синонимы английские

Immunohistochemistry, IHС, immunohistochemical analysis.

Метод исследования

Иммуногистохимический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани / образец ткани в парафиновом блоке.

Как правильно подготовиться к исследованию?

Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Иммуногистохимическое исследование клинического материала проводится в целях выявления в нем искомых веществ. Готовые гистологические препараты обрабатываются специальными реактивами, содержащими меченые специфические антитела к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Если искомое вещество находится в исследуемом материале, то антитело связывается с его определенными участками. В результате этого между ними образуется комплекс и происходит окрашивание ткани.

Данный метод используется в диагностике различных патологических состояний, особенно велика его роль в области онкологии. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование помогает не только диагностировать опухоль, определить ее нозологический вариант, выявить первичный опухолевый очаг и обнаружить раковое перерождение клеток, но также спрогнозировать варианты течения заболевания и успешность лечения. К факторам, влияющим на прогноз, относятся рецепторы к эстрогенам и к прогестерону, Ki-67 (маркер активности опухоли), her-2 neu (эпидермальный фактор роста, определяет чувствительность опухоли к химиопрепарату трастузумабу/герцептину), VEGF (сосудистый фактор роста), Bcl-2, р53 и др. В отличие от иммуногистохимического анализа, их невозможно определить при обычном гистологическом исследовании.

Также этот метод нашел применение в диагностике системных заболеваний соединительной ткани и болезней почек, позволяет выявлять бактерии и вирусы в изучаемых тканях, например вирус Эпштейна - Барр, папиллома-вирус, Helicobacter Pylori (у больных хроническим гастритом), микобактерии при диагностике туберкулеза и др.

На основе ИГХ-анализа врач получает заключение с положительными и отрицательными маркерами, и это помогает подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований.

Рак шейки матки относится к наиболее распространенным видам рака у женщин. Эпидемиологические и лабораторные данные подтверждают роль человеческого папиллома-вируса (ВПЧ, HPV) в качестве запускающего агента для подавляющего большинства предраковых и злокачественных поражений эпителия слизистой оболочки шейки матки. При этом ДНК ВПЧ могут быть обнаружены в 95-100% всех случаев.

Вирус папилломы человека представляет собой небольшие циркулярные двухцепочечные вирусы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), принадлежащие к семейству Papillomaviridae. Известно более 130 типов ВПЧ. Они классифицируются по степени риска, основанного на их связи с цервикальной карциномой. ВПЧ 16 и 18 являются наиболее часто встречающимися типами высокого риска. Внедряясь в эпителиальные клетки, вирус вызывает в них дефекты генов, тем самым способствуя развитию опухоли. При помощи ИХГ легко обнаружить в клетках, пораженных HPV, экспрессию белков p16 и p18, и их позитивность сильно коррелирует с позитивностью HPV. Это помогает различить неопухолевую дисплазию (как результат воспаления) и опухолевую (вызванную вирусом папилломы и способную переродиться в рак), а также позволяет провести дифференциальную диагностику дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II/III) и начальных форм рака шейки матки, выявление поражений, склонных к прогрессированию и развитию инвазивной карциномы. В дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80-100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки определяется усиленная экспрессия белка p16, и она усиливается по мере нарастания тяжести поражения.

У женщин с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями низкой степени тяжести очаговая и диффузная экспрессия свидетельствует о прогрессировании заболевания. Отсутствие или очаговая экспрессия p16 в поражениях высокой степени может служить дополнительным признаком благоприятного течения патологического процесса.

Применяется иммуногистохимическое исследование и при дифференциальной диагностике .

Целиакия – это системное заболевание, обусловленное генетической непереносимостью глютена или соответствующих проламинов, которые содержатся в семенах злаков. Характеризуется данная патология повреждением слизистой оболочки тонкой кишки (развитием атрофической энтеропатии), появлением в сыворотке крови специфических антител и широким спектром глютензависимых клинических проявлений. Заболевание встречается в два раза чаще среди женщин, чем среди мужчин, может впервые проявиться как в детстве, так и у взрослых. Целиакия может протекать с ярко выраженной или со стертой клинической картиной, а также без гастроэнтерологической симптоматики. Чаще всего встречается стертый вариант течения заболевания, поэтому диагностика глютеновой энтеропатии (ГЭ) затруднена.
На первичном лабораторном этапе проводится серологическое исследование, определяющее в крови специфические биомаркеры. Лицам с положительными результатами показана эндоскопия тонкой кишки с биопсией и последующим гистологическим и ИГХ анализом взятого материала.

Известно, что целиакия сопровождается повышением числа лимфоцитов внутри эпителиальных клеток тонкой кишки. При этом отличительной особенностью является то, что большинство интраэпитиальных лимфоцитов (ИЭЛ) несут на своей поверхности специфический Т-клеточный рецептор (CD3 γ и CD3δ-положительные клетки). Чем активнее протекает заболевание, тем больше ИЭЛ. Эта особенность используется при проведении иммуногистохимического исследования, позволяющего определить преобладающий тип лимфоцитов. Особенно важен этот анализ, когда существует расхождение между данными серологического исследования и гистологической оценкой на стандартных участках.

Для чего используется исследование?

Для определения вида и подвида опухоли, степени ее злокачественности и распространенности онкологического процесса;
для дифференциальной диагностики пролиферативных заболеваний;
для определения этиологического фактора, вызвавшего изменения в клетках;
для подбора эффективной терапии;
для оценки пролиферативной активности клеток опухоли;
для оценки эффективности лечения;
для диагностики рецепторного статуса при онкологическом заболевании (например, раке молочной железы, предстательной железы);
для определения первичного очага опухоли;
для выявления злокачественного потенциала пораженных клеток;
для первичного отбора пациентов для диспансерного учета и дальнейшего обследования;

Когда назначается исследование?

При дифференциальной диагностике дисплазии (высокой и умеренной степени) и начальной стадии рака шейки матки;
при раке молочной железы, желудка, предстательной железы в целях определения чувствительности к различным видам терапии;
при определении степени злокачественности и оценки прогноза заболевания;
при оценке эффективности терапии;
при поиске источника метастазов;
при диагностике гастроинтестинальных стромальных опухолей (GIST) с помощью расширенной панели антител, включающей DOG1;
при диагностике нейроэндокринных опухолей;
при дифференциальной диагностике целиакии, сопровождающейся неясной гистологической картиной;
при расхождении результатов серологического исследования и гистологической оценки.

Что означают результаты?

Референсные значения

Диапазон значений индивидуален для каждого заболевания, зависит от используемых антител.

Расшифровка результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом.

Проводится морфологическая оценка препарата (опухоли классифицируются согласно ВОЗ), дается описательный ответ с указанием оценки экспрессии антитела. ИХГ всегда следует использовать в качестве дополнения к морфологическому исследованию, результаты не следует интерпретировать изолированно.

Что может влиять на результат?

При некоторых заболеваниях есть факторы, которые могут влиять на результат. Так, при диагностике целиакии назначение безглютеновой диеты до исследования может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Иммуногистохимическое исследование в онкологии – это разновидность исследования ткани с помощью специальных реактивов по принципу антиген-антитело .

При используются реактивы, которые содержат антитела, отмеченные специальными веществами.

Антитело – это белок, который связывается в тканях с определенными молекулами - антигенами, после чего возникает реакция. Если же таких молекул нет, то и реакции не будет.

По этому признаку можно судить, присутствует в ткани интересная нам молекула или нет. Это похоже на то, если нанести на белый стол бесцветный клей. Невооруженным глазом на белом фоне он практически незаметен, но стоит насыпать на стол мелкого песка, как клей становится виден за счет прилипших песчинок.

По правилам иммуногистохимическое исследование при раке всегда проводится в специализированной лаборатории. Для его проведения необходима опухолевая ткань, полученная в результате или операции.

Иммуногистохимическое исследование проводится для определения наличия в опухолевых клетках различных точек приложения, например, наличие рецепторов эстрогенов (ER) и прогестеронов (PR). Также иммуногистохимия выполняется для определения показателя Ki-67 (индекс пролиферативной активности опухолевых клеток), гиперэкспрессии белка Her2neu, VEGF (сосудистый фактор роста), р53.

Иммуногистохимическое исследование при раке выполняется для того, чтобы понять, какими препаратами можно лечить злокачественную опухоль, и к каким видам препаратов она чувствительна.

Самый распространённый анализ, определяемый при иммуногистохимическом исследовании , это наличие рецепторной чувствительности к гормонам у опухоли.

1. ER / PR (Эстрогеновые и прогестероновые рецепторы, ER- еstrogen receptor, PR-progesterone receptor)

ER и PR - протеиновые рецепторы на поверхности опухолевых клеток.

В организме человека постоянно вырабатываются гормоны - эстроген и прогестерон. Эти гормоны воздействуют на ER и PR рецепторы, что приводит к стимуляции роста опухолевых клеток.

Определение Эстрогеновых и Прогетестероновых рецепторов является одним из важнейших моментов, определяющих чувствительность опухоли к терапии гормональными препаратами.

Чаще всего наличие рецепторов ER/PR определяют при . Их наличие дает возможность, помимо стандартных методов лечения, применить гормональную терапию .

При гормон позитивном раке молочной железы, назначаются препараты: Тамосксифен, Экземестан (Аромазин), Летрозол (Фемара), Анастразол (Аримидекс), Гексэстрол (Синестрол) и другие.Также, считается, что гормонально-зависимый рак молочной железы отличается спокойным течением и редким .

Чувствительность опухолевых клеток к гормональной терапии выражается в баллах от 0 до 10 . Опухоль считается гормонозависимой, начиная с 2-х баллов. и требует добавления к лечению гормональной терапии.

2. Her2Neu (от англ. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2)

Her2Neu - это рецептор эпидермального фактора роста раковой клетки. Это - ген, который воздействует на мембранные рецепторы клетки, и стимулирует её к усиленному делению.

В некоторых опухолях (чаще всего , ) присутствует гиперэкспрессия (повышенная активность) Her2Neu , что вызывает быстрое деление опухолевой клетки и её повышенную активность.

Также снижается эффективность , гормональной терапии . Из-за этого опухоли с Her2neu позитивным статусом отличаются агрессивным течением.

Существует две методики определения наличия у опухоли гена Her2neu:

Результаты иммуногистохимического исследования выражаются в баллах:

0-1 означает, что опухоль без гиперэкспрессии Her2neu.
3 означает, что опухоль с гиперэкспрессией Her2neu.

2. Метод FISH (Флуоресцентная гибридизация in situ)

В отличие от иммуногистохимического исследования, при котором определяются белки, при методе FISH определяется наличие генов, кодирующих протеины Her2neu. В зависимости от их наличия, определяется гиперэкспрессия Her2neu .

Определение гиперэкспрессии рецептора Her2neu в опухоли молочной железы является очень важным для дальнейшего назначения лечения.

В современной онкологии гиперэкспрессию Her2neu определяют, чтобы понять, необходимо ли добавление к лечению ингибиторов Her2neu. Для лечения опухолей с гиперэкспрессией рецептора Her2Neu активно и успешно используются Трастузумаб (Герцептин), Пертузумаб (Перьета), Трастузумаб-эмтанзин (Кадсила), Бейодайм (Трастузумаб+Пертузумаб) . Эти препараты прицельно блокируют рецепторы Her2neu, тем самым останавливая активный рост опухолевых клеток и повышая их чувствительность к химиопрепаратам. Добавление таргетной терапии к стандартной химиотерапии при лечении Her2neu позитивных опухолей, серьезно увеличивает общую выживаемость и результат противоопухолевого лечения.

3. Ki-67

Ki-67 - это маркер пролиферативной активности опухолевой клетки. Данный параметр оценивается в процентах и показывает, сколько процентов опухолевых клеток активно делятся.

Если Ki-67 меньше 15%, опухоль считается слабоагрессивной, при показателе Ki-67 от 30 до 50% опухоль считается агрессивной, а при показателе Ki-67 выше 50% опухоль является высокоагрессивной.

Также Ki-67 является фактором прогноза течения опухолевого заболевания и ответа опухоли на химиотерапевтическое лечение. Определяется это простым способом: чем ниже показатель Ki-67 , тем хуже опухоль реагирует на химиотерапевтическое лечение . И наоборот - чем выше показатель Ki-67 , тем лучше опухоль будет отвечать на химиотерапию.

4. Белок p53

Белок p53 - это транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл. В быстро делящихся клетках обнаружено увеличение концентрации белка р53 по сравнению с клетками, делящимися медленно, что обусловлено высоким риском их онкогенности.

Белок p53 предотвращает образование злокачественных опухолей в нашем организме. В норме, антионкоген р53 находится в неактивном состоянии, а при появлении повреждений ДНК в здоровой клетке - активируется.

Функция белка р53 состоит в удалении тех клеток, которые являются потенциально онкогенными. Это называется - индуцированный апоптоз, уничтожение потенциально опасной клетки.

При иммуногистохимическом исследовании, повышенное содержание белка p53 обнаруживается в 50% злокачественных клеток, что позволяет им беспрепятственно делиться и избегать апоптоза (уничтожения).

Количество белка p53 , определяют в дополнение к показателю Кi67, для того, чтобы понять насколько агрессивна опухоль и определить дальнейшее течение болезни. Если уровень белка p53 высокий, значит опухоль не агрессивная и не склонна к метастазированию и быстрому росту. Если же, показатель белка p53 низкий, то значит опухоль агрессивна и склонна к быстрому росту в окружающие ткани и метастазированию .

5. VEGF (Фактор роста эндотелия сосудов)

VEGF – это сигнальный белок, вырабатываемый клетками для активного роста новых сосудов в уже существующей сосудистой системе.

Есть несколько видов белка VEGF, и каждый воздействует на определенный рецептор VEGFR (Vascular endothelial growth factor receptor). Для того чтобы активно делиться, опухоли нужно питание, а для этого нужны сосуды, по которым это питание будет поступать. Именно по этой причине в опухолевых клетках содержится повышенное содержание белка VEGF - для того, чтобы в короткие сроки строить сосудистые сети.

Наличие белка VEGF в опухоли говорит о возможности применения такими препаратами, как Бевацизумаб (Авастин), Рамуцирумаб (Цирамза), Афлиберцепт (Залтрап). Они перестраивают сосудистую сеть опухоли, тем самым лишая её питания.

6. Определение экспрессии белков PD-1, PDL-1 и PDL-2

Для того чтобы отобрать пациентов, которым показана иммунотерапия, проводится определение наличия экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, при помощи флюоресцентной гибридизации in situ (FISH) . При наличии экспрессии PD-1 и его лиганд PDL-1 и PDL-2, показано применение иммунотерапии препаратами Пембролизумаб (Кейтруда), Ниволумаб (Опдиво), Атезолизумаб (Тецентрик).

В современной онкологии иммуногистохимическое исследование играет очень важную роль, так как при помощи этого исследования онкологи определяют наличие тех или иных факторов в опухоли, которые позволяют грамотно и адекватно составить дальнейшее лечение пациента и говорить о прогнозах заболевания.

Давайте для начала мы разберем, что же такое иммуногистохимическое исследование. Под ним подразумевается микроскопическое исследование ткани, которое основано на выявлении антител на патологические вещества.

Разделяют два метода исследования:

прямой (прямая реакция антител непосредственно на патологическое вещество);
непрямой метод (патологические вещества, распознаются с помощью вторичных антител).

Способы маркировки:

ферменты - белковые молекулы, они же молекулы РНК. Так например: щелочная фосфатаза (фермент гидролаза);
флуоресцентные - тот же физический процесс, например - флуоресцеин - органическое соединение;
электроно-плотные частицы, к таким относится золото.

Используют для:

изучения и исследования секреторных процессов, в том числе синтетических;
распознавания гормонов рецепторов;
выявления различных типов, родов клеток по их свойствам.

Для чего используют иммуногистохимию при раке молочной железы

В области исследования грудной железы данное исследование используется в качестве предварительной диагностики для установления точного диагноза, в том числе при злокачественных образованиях. Данное исследование дает возможность определить следующее:

Точное образование (доброкачественное или злокачественное) и назначение правильного лечения.
Точное месторасположение (наличие метастаз в организме и их дислокацию).
Первоначальный очаг заболевания.
Стадию заболевания (например, степень рака).
Пролиферацию клеток (распознать скорость размножения и развития раковых клеток).
Ответ раковых клеток на медикаменты, их чувствительность, также можно отследить чувствительность к химиотерапии, к лучевой терапии.

Исследование способно детально изучить заболевание, что дает возможность полностью диагностировать заболевание и подобрать правильное лечение. Это играет не маловажную роль в диагностике, лечении, продолжительности жизни онкологических больных. Также можно сказать, что с помощью данного метода можно:

Показания к исследованию

В основном данная диагностика используется для изучения (исследования) любой ткани человеческого организма. Основа для проведения данного исследования - это любое новообразование, которое предполагает развитие рака. Также исследование проводится для изучения эндометрия:

при метастазах;
при бесплодии;
после неудачных попыток ЭКО;
при различных заболеваниях матки;
при различных видах патологий органов малого таза;
при постоянных невынашивания плода;
при заболевания эндометрия.

Исследование не имеет абсолютных противопоказаний. Препятствием для ИГХ может быть, только невозможность по каким либо причинам забора материла на исследование.

Как происходит исследование

Данный вид исследования может проводится только в специализированных лабораториях, при этом врач должен иметь специальную квалификацию, пройти специальное обучение.

Забор проходит непосредственно пораженного участка кожи с помощью биопсии. Также забор материала может происходить во время хирургического вмешательства на молочной железе.

Потом полученный материал специально обрабатывается и консервируется. Для этого она заливается парафином. В таком виде, в парафине, материал может правильно храниться в течении многого времени.

Следующим этапом является микротомирование. Материал нарезают на тонкие пласты при помощи специального аппарата.

В дальнейшим нарезанные пласты окрашиваются с определенными антителами и все это изучается под микроскопом. В некоторых лабораториях изучается окрашенный материал на автоматическом приборе.

ИХГ Эндометрия

Показания:

две-три неуспешных процедур ЭКО;
не первое (постоянное) невынашивание плода на ранних сроках;
бесплодие.

Во время исследования могут выявить такие заболевания как:

эндометрит,
гиперплазия,
неполную трансформацию эндометрия,
нарушение фаз развития
и другие заболевания.

Как показывает практика, именно заболевания, связанные с эндометрием на 73% являются причиной бесплодия.

Подготовка к исследованию

Данное исследование проводится в определенный день менструального цикла, обычно на 5-7 день смотрят воспалительные процесса эндометрия, на 20-24 день цикла - оценивают секрецию, смотрят рецепторную функцию.

не принимать гормоны за неделю до анализа;
не принимать кровоостанавливающих препаратов;
правильная интимная гигиена.

Как проходит процедура

Процедура происходит на гинекологическом кресле. Женщину обезболивают специальными препаратами и вводят зеркало. Делается санация половых органов. Вводится специальный прибор - система гистероскопа и проводится забор. Далее убирают прибор, проводя санацию органов.

Потом женщина находится под наблюдением врача до полного восстановление, примерно 1-2 часа.

Результаты примерно готовятся 3-5 дней. Оценить результаты может только специалист.

Результаты ИХГ молочной железы

Что определяет анализ:

HER2neu или, по-другому говоря, человеческий рецептор эпидермального фактора роста. Несет ответственность за продукцию белка. При поражении раковых клеток усиливается беспорядочный рост.

Если результат пишется 1 (+), то это говорит о том, что избытка белка нет, следствие - нехорошее состоянии опухоли.

При 2 (++) обычно назначают повторное исследование.

При 3 (+++) рассматривают как положительную опухоль, которую обычно подвергают медикаментозному лечению.

ER uPR данный вид гормонов способствует стимуляции роста патологических тканий. Если данные показатели увеличены, то это говорит о правильном лечении, что опухоль реагирует на гормонотерапию. Следовательно, если данные показатели понижены, то можно говорить о неправильном подборе лекарств. Опухоль развивается дальше.

Ki - 67, по данному показателю оценивают стадию опухоли и её характеристики. Если результат дает повешенные цифры, то это говорит о быстром течении заболевания, наличии метастаз и, к сожалению, совсем не хороший прогноз. Данный результат отмечается в процентах. Так например:

11% - вполне хороший прогноз (выздоровление 93%);
21 % - говорят о нем как 50% на 50%, все зависит от организма человека;
все показатели за 30% - оценивают как тяжелая стадия - высокоагрессивная;
90% - неизлечимо, приводит к смерти.

Так же данный индекс способствует к определению выбора лечения.

Ген p53 - способствует предотвращению роста патологической ткани. Данный ген является барьером для заболевания. Для начала заболевания служит мутация гена, например, наследственность или нарушение белковой матрицы.

VEGF - обозначается белок, которой несет функцию контроля жизнедеятельности ткани при условии недостаточного кровообращения. Высокие показатели данного белка говорит о росте опухолевой ткани, в следствии «хорошего» питания ткани.

В основном выделяют 4 типа рака:

Люминальный А - при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-13% меньше.
Люминальный В - при этом: к женским гормонам рецепторы положительны, к HER2- отрицательные, показатель ki- 65-15% меньше.
Erb - B2 - при этом: реакция рецепторов к прогестерону (эстрогену) отрицательная, к HER2- положительная.
Базальноподобный - отрицательный показатель по всем категориям.

Определение экспрессии белков PD-1, PDL-1 и PDL-2

Принято считать, что отвечают за саму опухоль - PD-1, PDL-1 и PDL-2. Но они могут присутствовать не во всех патологических тканях. Для точного определения и назначения правильной терапии всем пациенткам, которым непосредственно показана иммунотерапия проводится такое исследование, как экспрессия белков PD-1, PDL-1 и PDL-2.

Данное исследование проводят с помощью флуоресцентной гибридизации FISH. В результате наличия экспрессии иммунотерапия назначается такими препаратами, как: Ниволумаб, Атезолизумаб, Пембролизумаб.

Цена иммуногистохимического исследования

Иммуногистохимическое исследование очень сложный анализ, в котором используются множественное количество онкомаркеров.

Стоимость исследования зависит от количества проверяемых факторов. Цена исследования начинается от 4 тысяч рублей и до 20 тысяч рублей.

Видео: Иммуногистохимические исследования

medik-24.ru

Иммуногистохимическое исследование: расшифровка и особенности проведения

Суть метода

Данный способ диагностики раковых заболеваний является наиболее современным и достоверным. В процессе развития опухолевого процесса образуются чужеродные организму белки – антигены. В это же время иммунная система вырабатывает антитела, главная цель которых – предотвращение размножения патогенных микроорганизмов.

Возможности

Современный вид диагностики позволяет определить:

распространение опухолевого процесса;
скорость роста злокачественных новообразований;
вид опухоли;
источник метастазов;
уровень злокачественности.

Показания и противопоказания

В этом случае метод используется для:

определения вида опухоли и области её локализации;
обнаружения метастазов;
оценки активности опухолевого процесса;
выявления патологических микроорганизмов.

Также анализ эффективен при проблемах с зачатием.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия показано при:

бесплодии;
заболеваниях матки;
наличии патологий в органах репродуктивной системы;
невынашивании беременности;
хронических заболеваниях эндометрия.

Как проводится

Образец ткани обезжиривается и заливается парафином. В данном виде биологический материал может храниться очень долго, за счёт чего ИГХ-исследование может быть проведено повторно.
С образца собирают несколько тонких срезов и перемещают их на специальные стёкла.
На них биоматериал окрашивается растворами различных антител. На данном этапе может применяться как малая панель, так и большая. В первом случае изучаются реакции после использования 5 видов антител, во втором – до нескольких десятков.
В процессе иммуногистохимического исследования при раке любого органа появляется эффект флюоресценции, что даёт возможность специалисту определить вид злокачественных клеток.

Интерпретация результатов

Как правило, заключение готово через 7–15 дней. Срок зависит от вида используемой панели (малой или большой). Расширенный способ занимает больше времени.

Кроме показателя злокачественности, в заключении указываются:

антитела, к которым выявлено сходство (тропность);
вид раковых клеток, их количественное значение.

В заключение

В современной медицине особое внимание уделяется диагностике раковых заболеваний. Наиболее современным и информативным методом считается иммуногистохимическое исследование. С его помощью выявляется не только наличие раковых клеток, но и определяется их вид и скорость развития злокачественного процесса. Кроме того, на основании результатов производится оценка эффективности назначенного лечения.

fb.ru

ИГХ исследование молочной железы - расшифровка

Иммуногистохимическое исследование (ИГХ) – метод исследования железистой ткани груди, при котором используется специальный реактив, позволяющий получить полную характеристику клеток:

установить происхождение клеток опухоли;
определить ее структуру;
диагностировать первичное образование по имеющимся метастазам;
точно вычислить продолжительность заболевания, возраст опухли;
определить правильную методику лечения.

Анализ ИГХ молочной железы назначается как при подозрении на онкологический процесс, так и при его течении, с целью диагностики результативности проводимого химиотерапевтического лечения.

Что позволяет определить ИГХ?

Для начала необходимо сказать, что расшифровкой результата ИГХ исследования молочной железы должен заниматься исключительно врач. Только он, зная полностью особенности течения заболевания, может интерпретировать полученный результат.

ИГХ, проводимое при раке молочной железы, определяет характер опухоли. Наиболее часто при ИГХ молочной железы используют определение рецепторов:

эстроген (ER);
прогестерон (PR).

Установлено, что опухоль, содержащая большое количество данных рецепторов ведет себя неагрессивно, малоактивна. При лечении такой формы, гормональная терапия значительно эффективна. Благоприятный прогноз в 75% случаев.

При расшифровке результатов анализа ИГХ молочной железы используют процентные единицы измерения. При этом определяется соотношение числа клеток с экспрессией (восприимчивости) к эстрогенам и прогестерону, общему количеству клеток опухоли. При этом результат выводится в виде соотношения числа ядер окрашенных клеток к неокрашенным, в совокупности к 100 клеткам.

В виду сложности подобных вычислений их интерпретации, оценка результата занимаются исключительно специалисты.

Статьи по теме:

Грудь увеличилась и болит

Гормональные колебания влияют на самочувствие женщины, изменение уровня гормонов сильно отражается и на груди. Далее обсудим, почему грудные железы могут внезапно увеличиваться и болеть.

Грудь чрезвычайно чувствительна к любым гормональным колебаниям в организме, и первой реагирует непривычными ощущениями. Нередко женщина чувствует покалывания или сильные колющие боли. С чем это может быть связано, - разберемся далее.

Почему на груди растут волосы?

Часто, особенно после рождения малыша, женщины и юные девушки обнаруживают на груди нежелательные волоски. В чем причина роста волос в этой интимной части тела, разберемся в нашей статье.

Дуктэктазия молочной железы - что это такое?

Некоторые сбои в работе репродуктивной системы могут приводить к патологическому расширению протоков грудных желез. Чтобы быть в курсе проблемы, стоит изучить подробнее, что же это такое – дуктэктазия.

womanadvice.ru

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы

При подозрении на наличие у пациентки злокачественной опухоли внутри молочной железы, врач обязан назначить комплексное исследование больного участка органа. Некоторые из видов обследования являются стандартными, и входят в основу медицинского протокола при выявлении онкологии в грудной клетке. Не каждое новообразование, обнаруженное в груди можно сразу же диагностировать, как злокачественное. Чтобы сделать такое заключение, онколог обязан отправить женщину на иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы.

Только после того, как в биологическом материале опухоли будут обнаружены раковые клетки, имеющие патогенные свойства, способные к активному делению и распространению за пределы молочной железы - новообразование получает статус злокачественного.

Как происходит иммуногистохимическое исследование груди

После обнаружения в молочной железе нового образования, одним из обязательных анализов для проведения является иммуногистохимия. Суть ее выполнения заключается в том, что врачи проводят небольшую хирургическую операцию.

На больной груди делается микророзрез, в который вводят специальное оборудование, отбирающее часть ткани опухоли. Пациентка при этом находится под действием наркоза. После получения биологического материала новообразования, его обрабатывают специфическими антителами. Злокачественная опухоль вырабатывает свои агрессивные агенты, которые имеют белковую структуру.

Также они наделены способностью взаимодействовать с другими биологическими веществами, связывать их, и формировать с ними единую ткань. По итогам обработки опухолевого материала антигенами, ткань помещают под микроскоп для детального визуального исследования.

Фрагмент доброкачественной опухоли после обработки антителами не меняет свой цвет, а клеточная структура биопата и антител остается неизменной, активного контакта между ними не происходит. Клетки злокачественного образования ведут себя совершенно по-другому, и это хорошо видно сквозь линзу микроскопа.