Цитологические методы исследования. Методы цитологии Основные методы цитологических исследований

Женское здоровье требует постоянного вмешательства узких специалистов-медиков. Когда женщина беременна, она обращается за консультацией к гинекологу; когда она рожает - на помощь приходят акушеры. При профосмотрах представительниц прекрасного пола обязательно осматривают маммологи и те же самые гинекологи. Здоровье бесценно, поэтому мы так о нем заботимся. В последнее время такое заболевание, как рак, разрушает все больше радужных надежд на прекрасное будущее. Онкология матки или молочных желез опасна тем, что на первых стадиях ее невозможно определить, если периодически не приходить на осмотры.

Наука цитология в помощь диагностике

Цитология не полностью относится к медицинским наукам. Она, скорее, больше биологическая, но имеет важное значение для диагностики различных болезней. Эта наука занимается тем, что изучает строение и основные функции живых клеток. Под микроскопом определяется весь цикл существования клетки. С самого ее возникновения до старения и смерти. Особое значение уделяется размножению живых клеток, наличию органелл, возникновению каких-либо патологических процессов в их функционировании.

Медицина активно использует наработки этой науки в своих диагностических целях. На сегодняшний день широко применяются цитологические исследования соскоба с шейки матки. Знание о структуре и строении клеток дает возможность разрабатывать инновационные технологии в лечении опасных заболеваний. Цитология стала разделом лабораторных исследований. Она не дает никаких прогнозов, а носит только описательный характер. Новым разделом стала онкоцитология - наука, которая помогает диагностировать новообразования, как только они появились.

Цитологическое исследование в гинекологии

При патологиях шейки матки или подозрениях на них проводится цитологическое исследование мазка. Перед началом и окончанием лечения гинекологических заболеваний, а также при обычном плановом медицинском осмотре мазок на цитологию является обязательным. При этом исследовании оценивается, в каком состоянии находятся клетки шейки матки и другие женские органы.

Впервые такой анализ был произведен в тридцатых годах прошлого века. А первая классификация клеток, взятых на цитологическое исследование, была опубликована в 1954 г. Она несколько раз изменялась, а настоящий ее вариант был разработан в 1988 году. Согласно этой версии, клетки шейки матки разделяются на разные классы, характеризующие степень атипичности, начиная от нормы и заканчивая инвазивным раком. Эти данные имеют большое диагностическое значение и позволяют подобрать наиболее эффективную терапию.

Исследование клеток шейки матки с помощью мазка

Мазок на цитологическое исследование берут при кольпоскопии или вагинальном осмотре. Сама процедура проводится под микроскопом. Клетки эпителия имеют свойство постоянно обновляться, то есть слущиваться. Они появляются в просвете шейки матки и во влагалище. Структура этих клеток такова, что при микроскопии можно определить как здоровые, так и атипичные элементы.

Одним из самых простых и малоинвазивных методов исследования, который не сопровождается неприятными ощущениями, является пап-тест. Эта процедура позволяет обнаружить возможность перерождения клеток шейки матки в рак.

Также при помощи этого теста можно диагностировать опухолевый процесс в других женских органах, например, в матке или яичниках. К сожалению, пап-тест не всегда бывает точным. Бывали ситуации, когда после нескольких отрицательных результатов у женщины все же обнаруживали рак шейки матки. Но, возможно, такие казусы случались из-за неправильного взятия материала. Злокачественное перерождение начинается с нижних слоев и постепенно прорастает вверх. Если же взять только поверхностный слой, то заметить можно только злокачественные изменения на заключительной стадии.

Соскоб для цитологического исследования

Материал на цитологическое исследование мазка берут при помощи щеточки и специального шпателя, которым с нажимом соскабливают клетки, расположенные слоями. Во время этой процедуры на стекло попадает много материала с шейки матки, структура которого при этом не изменяется.

Этот процесс совершенно безболезненный. Соскабливают клетки в нескольких местах и наносят их на предметное стекло. После этого препарат фиксируется специальным раствором и окрашивается красителями. Затем мазок отправляют на исследование.

Результат цитологического исследования может свидетельствовать о наличии атипичных клеток, которые бывают при сильном воспалении или раке.

Как осуществляется исследование клеток шейки матки?

Криокаутеризация - это абсолютно не опасная и безболезненная процедура. Заключается она в том, что специальным зондом замораживаются пораженные участки тканей шейки матки. Затем они отслаиваются.

Также после цитологического исследования шейки матки с помощью соскоба гинеколог может назначить такие дополнительные процедуры, как лазерная терапия и эксцизия патологического участка петлей.

Объектом цитологического исследования могут служить практически все органы и ткани. Цитологический анализ включает получение и обработку материала, его микроскопию и морфологическую оценку, определение природы процесса, формулирование заключения с установлением нозологической формы заболевания в соответствии с принятыми морфологическими классификациями. Цитологический метод позволяет проводить дифференциальную диагностику злокачественного новообразования с неопухолевыми (предопухолевыми) поражениями и доброкачественными опухолями различной локализации, уточнить стадию процесса, выявить ранние и поздние рецидивы, персистенцию опухоли после лечения.

Цитологическую диагностику используют при решении различных задач профилактики и диагностики, которые были сформулированы Кардозо.
Скрининг (профилактический осмотр).
Установление (уточнение) диагноза заболевания.
Ранняя диагностика рака:
- ориентировочный диагноз для выработки дальнейшей тактики обследования;
- помощь в определении тактики лечения или обоснование показаний к предоперационной лучевой терапии;
- метод установления диагноза, позволяющий экономить время и избежать госпитализации;
- предотвращение неприятных, сложных или даже рискованных диагностических процедур;
- установление (уточнение) диагноза во время операции;
- в некоторых ситуациях - единственно возможный метод диагностики.

Цитологическое исследование в сопоставлении с патогистологическими данными: более безопасный морфологический метод, имеющий психологическое преимущество перед патогистологическим;
- при получении материала не оставляет шрама, дает меньше осложнений.

Динамическое наблюдение (для раннего определения рецидива опухоли).
Контроль в ходе лечения и после него, в том числе после операций, лучевой и химиотерапии, а также при воспалительном процессе.
Для научных исследований.
Для определения в мазке некоторых разновидностей бактерий, грибов, простейших.

ЦИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРИ ПРОФИЛАКТИЧЕСКОМ ОСМОТРЕ
Успехи в обеспечении здоровья населения во многом зависят от проведения массовых профилактических осмотров, в первую очередь в группе повышенного риска определенного заболевания, особенно в случае злокачественных ново-образований.

Уникальное преимущество цитологического метода - возможность динамического наблюдения за изменениями клеток (определение фоновых и предопухолевых состояний).

Ранняя диагностика опухолей организационно состоит из двух этапов:
массового обследования населения для выявления опухоли или признаков, не позволяющих ее исключить, а также неопухолевых и предраковых состояний;
уточняющей диагностики в отобранных во время скрининга группах.

На первом этапе цитологическое исследование должно быть с высокой степенью чувствительности. Исследование мазков из шейки матки - высокоэффективный скрининг-тест, который примерно в 10 раз повышает диагностику опухолей по сравнению с визуальным обследованием. При этом происходит значительное увеличение частоты обнаружения рака в ранней и доклинической стадии процесса. Цитологическое исследование мазков из шейки матки входит в перечень исследований при диспансеризации населения.

На втором этапе диагностики опухолей наряду с высокой чувствительностью к цитологическому методу предъявляют требование высокой специфичности.

ЦИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРИ УСТАНОВЛЕНИИ (УТОЧНЕНИИ)
ДИАГНОЗА ЗАБОЛЕВАНИЯ
Задача цитологического анализа - подтверждение или опровержение наличия злокачественной опухоли (онкоцитология), а также определение ее типа. В процессе дифференциальной диагностики при отсутствии данных, указывающих на злокачественную опухоль, врач-цитолог старается определить природу патологического процесса, диагностируя воспалительные, реактивные, пролиферативные, предопухолевые поражения или доброкачественные опухоли. Диагноз, содержащий только описание цитологической картины или заключение о наличии атипических клеток, не содержит информации, необходимой для определения лечебной тактики. Отрицательный результат цитологического исследования не исключает наличие рака.

Детальная цитологическая характеристика новообразования позволяет специалисту обоснованно выбрать метод лечения (хирургическое, лучевое, химиотерапевтическое, их комбинация), поскольку опухоли различного происхождения и строения по-разному реагируют на терапию.

Цитологический анализ позволяет оценить характер и степень выраженности гиперплазии эпителия, диагностировать предраковое состояние (дисплазию эпителия) и на этой основе формировать группы повышенного риска. Нередко это исследование - единственный метод, обосновывающий начало лечения.

ЦИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПРИ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКЕ РАКА
Цитологическое исследование имеет несравненные преимущества перед другими методами обнаружения начальных стадий развития опухоли. Свидетельство тому - цитологическая диагностика рака желудка, легкого, мочевого пузыря и других органов еще до появления клинических, рентгенологических, эндоскопических симптомов заболевания. Развитие эндоскопической техники, ультразвуковых и лучевых исследований в большой степени способствовало широкому внедрению цитологического исследования в диагностику опухолей практически всех органов и тканей организма, в том числе внутренних органов и мозга, ранее недоступных внеоперационному морфологическому анализу.

ЦИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ В СОПОСТАВЛЕНИИ С ПАТОГИСТОЛОГИЧЕСКИМИ ДАННЫМИ
Эталон достоверности цитологического диагноза - патогистологическое исследование, поэтому принципиально важно проводить их сопоставление. Однако при установлении диагноза даже опытным патологоанатомом возможны ошибки, достигающие 18% наблюдений. Пространственные взаимоотношения компонентов ткани в цитологическом препарате в значительной мере нарушены (в гистологическом препарате, как правило, сохранены), что ограничивает диагностическую информативность мазка структурных характеристик патологически измененной и нормальной ткани.

Особенности цитологического метода в сравнении с патогистологическим:
значительно меньшее количество исследуемого материала;
малая травматичность и даже атравматичность его получения;
быстрое приготовление и окрашивание мазка, не требующее сложной длительной обработки и специальной аппаратуры. 

Цитологическому исследованию отдают предпочтение, когда операционная биопсия кусочка ткани нежелательна или противопоказана (например, исследование отпечатков опухоли кожи при предположительном диагнозе меланомы), для экстренного уточнения природы поражения во время инструментального исследования (эндоскопического, ультразвукового, компьютерной и магнитно- резонансной томографии), в некоторых ситуациях, возникающих во время операции. Цитологическое исследование пунктатов лимфатических узлов позволяет определить стадию распространения злокачественного процесса без биопсии. При несовпадении результатов цитологического и патогистологического исследований целесообразно выполнить повторный анализ всех данных больного, затем провести консилиум цитопатологов лаборатории совместно с ее заведующим или (при отсутствии такового) с внешним консультантом, наконец, обсудить результат исследования с патологоанатомом и лечащим врачом. Убежденность цитопатолога в диагнозе диктует необходимость обращения в консультативный центр Ассоциации клинических цитологов России (по существу, экспертную комиссию с привлечением высококвалифицированных специалистов). При неудачах патогистологической диагностики уверенный цитологический диагноз может служить основанием для проведения лечения.

Установление (уточнение) диагноза во время операции
Достижения в цитологической диагностике позволяют широко использовать метод в качестве интраоперационного исследования в целях:
установления природы патологического процесса, если ее не удалось определить до операции, а также если операционные находки противоречат установленному до операции диагнозу;
оценки степени распространения, в частности прорастания и метастазировния опухоли в соседние или отдаленные органы и ткани;
определения эффективности радикального хирургического удаления опухоли.

Цитологическое исследование - метод выбора при изучении материала, непригодного для срочного гистологического исследования (плотных и рыхлых крошащихся масс, кусочков ткани очень мелких размеров, непригодных для приготовления замороженных срезов, обызвествленных тканей, жидкости и др.).

Контроль в ходе лечения и после него
Цитологическое исследование - метод выбора динамического наблюдения за результатами лучевого, химиотерапевтического и гормонального лечения. Цитологические данные по существу незаменимы для объективной морфологической оценки ранних и поздних изменений, возникающих в опухоли в процессе лучевого и химиотерапевтического лечения больного (лечебный патоморфоз). Они позволяют судить о чувствительности клеток опухоли к этим воздействиям и об эффективности проводимого лечения.

Динамическое наблюдение, обнаружение рецидивов
Цитологическое исследование позволяет наблюдать за клеточными изменениями в динамике у представителей группы повышенного риска и больных, которым проведено лечение по поводу злокачественной опухоли, что фактически невозможно с помощью других морфологических методов.

Цитологический метод заключается в определении структуры клеток и особенностей химических процессов в них. Подобные исследования наиболее широко используют для выявления злокачественного перерождения клеток, в том числе на предраковой стадии, для диагностики заболеваний крови, обнаружения заболеваний мочеполовых органов.
Материал для цитологического исследования получают разным путем. Так, эксфолиативный способ заключается в отстаивании биологических жидкостей от пациента (крови, мокроты), которые в результате расслаиваются: плазма отделяется от форменных элементов крови, а в мокроте выпадает в осадок слизь, эпителий и бактерии. Можно получить материал для исследования с помощью соскоба или смывов, мазков отделяемого из свища, сосков молочных желез и др. Чаще таким образом получают материал для диагностики кожных (в том числе онкологических заболеваний.
Для цитологического исследования щитовидной железы, костного мозга, ликвора, кист, опухолей и внутренних органов материал берут у больного пункцией. Для этого делают прокол иглой (инъекционной или специальной) и забирают жидкое содержимое полостных образований с помощью обычного шприца. Забор тканей внутренних органов для исследования называется биопсией, которую выполняют специальными инструментами. Можно подвергнуть анализу и частицы твердых тканей, оставшихся в полости иглы или инструмента для биопсии после прокола.
Образцы тканей внутренних органов для исследования можно взять с помощью эндоскопической биопсии: в желудочно-кишечный тракт, бронхи или брюшную полость вводят гибкий прибор с волоконной оптической системой и режущим инструментом. Затем выбирают наиболее подозрительное на патологию место и выполняют несколько срезов тканей. При этом соблюдают следующее правило: первый срез делают на наиболее измененном участке органа, а затем берут еще несколько проб из прилегающих зон и других очагов поражения. В этом случае кровотечение из травмированных тканей не приведет к ошибочному забору материала.
Пункция и биопсия - сложные способы забора материала для исследования, часто они достаточно болезненны, а потому их проводят с обезболиванием, зато именно они позволяют свести ошибку в диагнозе к минимуму.
Исследуют как окрашенные и фиксированные образцы тканей, так и живые. Анализ проводят с помощью микроскопии и химических реакций. Цитологические исследования полученного материала достаточно быстры в исполнении и относятся к прижизненной диагностике. Наиболее широко их используют для выявления раковых и предраковых заболеваний при массовых профилактических осмотрах. В ходе исследования определяют тип эпителиальных клеток, стадию их развития и патологические изменения в них. Выявление и наблюдение динамики предраковых заболеваний или рака на ранних стадиях возможно только этим методом.
В зависимости от способа получения материала от больного для исследования можно определить размеры злокачественной опухоли, распространенность процесса (частичное, полное поражение органа, переход на окружающие орган ткани и соседние органы). С помощью цитологического исследования можно отличить первичную опухоль от вторичной, вызванной распространением раковых клеток по организму.
Большое значение для цитологического исследования имеют точные данные о происхождении материала, особенно если он взят из нескольких мест. Поэтому все мазки и соскобы после забора необходимо правильно маркировать (пометки делают и на предметном стекле и в сопроводительной документации). Для получения достоверных результатов цитологического исследования важны сведения о проводимом лечении, так как многие лекарственные препараты (гормоны, цитостатики) оказывают непосредственное воздействие на клетки и изменяют их состояние. Кроме того, при неправильном выборе места для забора материала от больного заболевание может быть не выявлено. Если результат анализа вызывает сомнение, то назначают повторное цитологическое исследование.
Признаки озлокачествления клеток, выявляемые при исследовании:
1) изменение расположения клеток относительно друг друга в определенных тканях (наслоение, группировки);
2) нечеткие границы;
3) одновременное присутствие живых измененных и мертвых клеток;
4) изменение размеров клеток (уменьшение, увеличение);
5) изменение формы клеток;
6) разнообразие клеток по структуре (в исследуемом материале присутствуют клетки различных стадий развития, много незрелых клеток);
7) окрашивание цитоплазмы в синий цвет химическими красителями;
8) наличие в цитоплазме множества вакуолей, твердых включений;
9) разнообразие ядер по структуре;
10) увеличение размеров ядер;
11) изменение объемного соотношения между ядром и цитоплазмой;
12) неравномерное распределение хроматина;
13) изменение структуры хроматина;
14) усиленное окрашивание ядер;
15) наличие ядер с разной степенью окрашивания;
16) увеличение размеров ядрышек и их числа;
17) увеличение числа клеток находящихся в состоянии митоза (деления);
18) наличие клеток с неправильным делением.