Как в домашних условиях изготовить сильнодействующий яд. Как происходит изготовление ядов в домашних условиях. Что такое яд

В Великобритании арестована группа выходцев из Северной Африки в связи с тем, что в лондонской квартире одного из арестованных был обнаружен исключительно сильный растительный яд рицин.

Видный британский специалист по вопросам ядерного, химического и биологического оружия Эндрю Оппенхаймер консультирует компанию «Jane"s Information Group», которая публикует авторитетное оборонное издание «Jane"s Defence Weekly». На нашу просьбу рассказать о рицине он сказал в беседе по телефону из Лондона, что производство этого сильнейшего яда не представляет особых технических трудностей.

Эндрю Оппенхаймер : «Рицин получают из семян клещевины, принадлежащей к семейству бобовых. Заполучить сырье для его производства нетрудно. Существует промышленный способ переработки клещевины в касторовое масло, и один из побочных продуктов этого процесса - рицин. Технология настолько проста, что овладеть ею по силам даже студенту-химику, не говоря уже о дипломированном специалисте».

Ребекка Уорд : Получается, что это вещество совершенно доступно?

Э.О. : Да, клещевина выращивается во многих странах мира. Я никогда не пытался достать это растение, но думаю, что при желании это сделать нетрудно.

Р.У. : Насколько опасен рицин? Какова его токсическая доза? И каков механизм его действия?

Э.О. : Рицин исключительно сильный яд, в тысячи раз более токсичный, чем цианистый калий. Даже в чрезвычайно малой дозе - одна десятая грамма - он смертелен для человека, особенно при введении в организм путем инъекции. Его также можно применять в виде аэрозоли. И тем не менее рицин не считается оружием массового поражения, так как для масштабного эффекта необходимо весьма большое его количество. Если сравнить этот яд с сибирской язвой, например, то эквивалентом одного килограмма спор сибирской язвы является ни много ни мало - четыре тонны рицина.

Р.У. : Допустим, что лица, арестованные по подозрению в подготовке террористического акта, действительно планировали нечто подобное. Как бы они действовали?

Э.О. : В том случае, если они связаны с «Аль-Кайдой», они попытались бы изготовить большую партию этого вещества, достаточно крупную для применения, скажем, в метро. Если бы они планировали получить рицин в виде аэрозоли или собирались применить его для одиночных убийств, то тогда большого количества яда не нужно.

Р.У. : Вы, вероятно, знаете, что США держат наготове противооспенную вакцину, чтобы использовать ее для защиты в первую очередь военных и работников спасательных служб. Не принимает ли Великобритания аналогичных мер вакцинации?

Э.О. : Давайте рассмотрим каждое вещество по отдельности. Во-первых, от рицина нет противоядия. Во-вторых, что касается оспы, то правительство заказало вакцину у подрядчика. И, насколько я знаю, существуют еще другие фирмы, которые должны поставить дополнительные партии. Мы тоже, как и вы в США, рассматриваем необходимость вакцинации в первую очередь тех, кто находится на переднем крае. Однако пока что возможность вакцинирования кого-либо, кроме работников аварийных служб, не обсуждается.

Горячие споры по поводу массовой вакцинации продолжаются, поскольку, если будет применена оспа, являющаяся идеальным биологическим оружием, то уровень инфицированности будет настолько высок, что для прививки только первых зараженных наличных запасов вакцины не хватит.

По инфекционности оспа опаснее всех других болезней, кроме гриппа. В силу этого, если генетически модифицировать вирус гриппа, это будет биологическое оружие воистину массового поражения. Но оспа уже является таким оружием, без всяких модификаций. В случае реальной опасности ее применения придется прививать поголовно всех, иначе не избежать гибели миллионов людей, так как от оспы погибает треть зараженных.

Одним из символов Таиланда является мифический сюжет, изображающий победу птицы Гаруды над змеей Нагом. И это не случайно: на протяжении многих столетий жители Сиама — так до 1949 года назывался Таиланд — ежегодно буквально тысячами погибали от укусов ядовитых змей. А их в этой стране немало: из более чем 175 видов всех обитающих 85 — ядовитые.

Проблемами медицинских исследований в области токсикологии в Сиаме занимались очень давно. Местное общество Красного Креста было основано в этой стране еще в 1893 году и находилось под патронатом королевской семьи. В настоящее время в Мемориальном институте королевы Саовабхи разводят и изучают 10 видов змей этого региона. Причем яд каждого из видов используется для производства специфического противоядия (антидота). Так, например, антидот, изготовленный на основе яда сиамской кобры, эффективен только против укусов этого вида змей и совершенно бесполезен при укусе гадюки или королевской кобры.

Для производства антидотов в Таиланде применяют лошадей. Именно они служат своеобразной живой биологической фабрикой по производству антидотов. Процесс получения противоядий выглядит так: здоровым лошадям делают небольшие инъекции змеиного яда, в течение нескольких месяцев в их крови вырабатывается иммунитет, и только потом у лошади забирают кровь, которая служит исходным материалом для изготовления противоядий. Ампулы рассылаются отсюда по всей стране в специальные центры. А их в Таиланде сотни. Каждый взрослый человек точно знает, куда надо обращаться в случае опасности.

По данным ВОЗ, в середине XX века число пострадавших от змеиных укусов людей составляло 500 000. До применения современных антидотов погибало 20 — 40%, а в некоторых странах и до 70% укушенных людей. Благодаря применению сыворотки число летальных исходов сократилось до 2 — 3%, приходящихся в основном на Индию, страны Юго-Восточной Азии и Южной Америки. В Европе случаи смерти от укусов змей единичны.

Сейчас в Таиланде в год погибает в среднем не больше 20 человек, в то время как в начале XX века эта цифра составляла 10 тысяч. Причем умирают только те, кто не успел вовремя обратиться за медицинской помощью. Для сравнения: в Индии число умерших по той же причине составляет 20 тысяч человек в год. Эти цифры красноречиво свидетельствуют о том, насколько необходима работа подобных учреждений.

Разведение змей — более позднее добавление в деятельности института. В 1993 году, с тех пор как некоторые виды змей стало трудно отлавливать в природе, было принято решение начать их разведение. Сейчас ради получения яда разводят несколько видов кобр и гадюк. Кормят змей в питомнике один раз в неделю. Их рацион составляет 1 — 2 мыши. Некоторые виды питаются только живыми водяными змеями. Хотя в результате дрессировки даже эти привередливые пресмыкающиеся научились есть мышей и даже рыбные сосиски.

Труднее всего в неволе разводится ленточный крайт. А максимально комфортно в этих условиях чувствуют себя малайские гадюки и сиамские кобры. Эти змеи откладывают до 30 небольших яиц, в результате чего на змееферме ежегодно получают от 200 до 500 особей этих двух видов. Всех прибывающих на ферму змей женского пола проверяют на беременность. Если она есть, самок помещают в самые благоприятные условия для высиживания яиц.

Деятельность по разведению ядовитых змей привела также к исследованиям заболеваний, которыми они страдают, поскольку для производства яда необходимы только здоровые пресмыкающиеся. Поэтому за их состоянием тщательно следят ветврачи, а в случае необходимости лечат.

Хотя надо сказать, что змеи — существа вовсе не агрессивные, они нападают на человека только в том случае, если их на это вольно или невольно спровоцировать. Так что первое правило при случайной встрече со змеей — никогда не делать резких движений и по возможности медленно удалиться.

К началу XX века стало очевидно, что большинство импортируемых противоядий, существующих на тот момент времени, было не в состоянии обеспечить необходимого лечения. А потому возникла острая необходимость в создании местного производства по выработке препаратов, способных на основе яда змей из этого региона создавать эффективные противоядия.

Тогдашний правитель Сиама — король Ваджиравудха не менее своих подданных был озабочен проблемой высокой смертности от змеиных укусов. В 1920 году после смерти его матери — королевы Саовабхи — в память этого печального события король передал значительные средства в местную организацию Красного Креста на строительство новых зданий, необходимых для расширения исследовательских работ в области токсикологии. А в декабре 1922 года при непосредственном участии и помощи со стороны специалистов из парижского Пастеровского института в столице государства городе Бангкоке был открыт научно-исследовательский центр по изучению вакцин и сывороток, получивший название Мемориальный институт королевы Саовабхи.

Основными направлениями биомедицинских и клинических исследований института стали: изучение жизненного цикла и физиологии змей, классификация ядов и их воздействие на человека, создание и усовершенствование вакцин против ядов, бешенства и других инфекционных
заболеваний.

Для того чтобы получить яд, змею необходимо поместить на гладкую поверхность стола — где у нее нет опоры, и, следовательно, броситься на человека она не может. Затем палкой с крючком на конце змею подхватывают и кладут на стол, а потом несколько раз вращают, вызывая у нее «головокружение». После этого голову змеи прижимают к столу и берут в руки. Для гарантии безопасности оператор зажимает змее скуловые кости, а затем подносит к ядоприемнику и дает укусить.

Если змея не хочет добровольно отдавать яд, ее стимулируют с помощью массажа ядовитых желез. Операцию по взятию яда прекращают тогда, когда он перестает вытекать из желез. Яд берется у змей каждые две недели.

Змеиный яд

Змеиный яд вырабатывается височными слюнными железами и имеет вид желтоватой прозрачной жидкости. В высушенном состоянии он сохраняет отравляющие свойства десятки лет.

Яд змей представляет собой сложную смесь белков, обладающих свойствами ферментов и ферментных ядов. В их состав входят протеолитические ферменты, разрушающие белки, ферменты протеазы и эстаразы, свертывающие кровь, и целый ряд других.

По характеру отравления яд тайских змей можно отнести к двум группам: нейротоксический и гемовазотоксический. К первой группе относятся кобры, крайты и морские змеи, ко второй — гадюки. Нейротоксические яды, обладая курареподобным действием, останавливают нейромышечную передачу, в результате чего наступает смерть от паралича. Гемовазотоксические яды вызывают сосудистый спазм, за ним — сосудистую проницаемость, а потом отек тканей и внутренних органов. К смерти приводит геморрагия и отек паренхиматозных органов — печени и почек, причем в пораженной части тела внутренняя потеря крови и плазмы может составить несколько литров.

После укуса некоторых видов змей человек, не получивший вовремя медицинской помощи, может прожить не более 30 минут.

Лошадиные силы

Лошадиная ферма тайского Красного Креста находится в местечке Хуа Хин (недалеко от Бангкока). Средняя продолжительность жизни лошади составляет 25 лет,
а в качестве донора ее используют только начиная с 4-летнего и кончая 10-летним возрастом. Кровь у лошадей для производства противоядий берут не более одного раза в месяц, а ее количество составляет

5 — 6 литров. Несмотря на столь внушительный забор крови, организм лошади способен быстро восстановить количество красных кровяных телец.

После этого кровяная плазма транспортируется в Бангкок, где подвергается высокой очистке и проходит испытание на безопасность и эффективность в соответствии с требованиями Всемирной организации здравоохранения.

Надо сказать, что тайцы с большим уважением относятся к этому благородному животному. После того, как лошадь уже не может быть донором, ее «отправляют на пенсию» на специальные фермы, где она доживает свой век на полном государственном обеспечении.

Дмитрий Воздвиженский | Фото Андрея Семашко

Противоядие от укусов ядовитого животного на основе антисыворотки, включает смесь по крайней мере двух антисывороток, выработанных по отношению к различным ядам. Набор для введения противоядия включает противоядие и средство для инъекции. Противоядие обладает более высокой иммуногенностью. 4 с. и 7 з.п. ф-лы, 3 табл., 2 ил.

Изобретение касается антитоксинов и способа их получения. Более конкретно, изобретение касается змеиных противоядий и способа их получения. Ряд животных, включая змей gilamonsters, пауков и пчел, вырабатывают яды, которые опасны для человека, например, во всем мире ежегодно около миллиона человек страдают от укусов ядовитых змей, причем установлено, что умирает из них 100000, а 300000 других страдают в течение всей своей остальной жизни теми или другими формами нетрудоспособности. Вероятно, что это большая недооценка из-за недостатка подробных сообщений из некоторых частей мира. Яды, выделяемые змеями в основном для умерщвления жертвы или в целях защиты, являются комплексными биологическими смесями, состоящими более чем из 50 компонентов. Смерть жертвы от укуса змеи наступает в результате дыхательной недостаточности или недостаточности кровообращения, вызываемых разными нейротоксинами, кардиотоксинами (называющимися также цитотоксинами), факторами коагуляции и другими веществами, действующими в чистом виде или синергически. Змеиные яды содержат также ряд ферментов, которые при попадании внутрь жертвы начинают расщеплять ткань. Таким образом, яды содержат вещества, предназначенные поражать жизненные процессы, такие как нервная и мускульная функции, работа сердца, циркуляция крови и проницаемость оболочек. Главными составными частями змеиных ядов являются белки, но присутствуют также соединения с низким молекулярным весом, такие как пептиды, нуклеотиды и ионы металлов. Ядовитые змеи могут быть подразделены на 4 основные семейства: Colu bridae, Viperidae, Hydrophidae и Erapictac. Систематика этих змей описана в табл. 1 и 2. Гремучие змеи, которые водятся исключительно на Американском континенте, входят в подсемейство ядовитых змей семейства, известного как Crotalinae, вид Crotalus или Sistrusus (гремучие змеи) Bothrops, Aqka strodon и Trimerisurus. Оба вида гремучих змей могут быть разбиты также на виды и подвиды. Эти змеи называются также "pit-гадюки" за счет наличия лицевых теплочувствительных ямок, однако их самым известным признаком является кольцо, которое, когда оно есть, отличает их от всех остальных змей. Каждый вид или подвид распространен в отдельном географическом регионе в Северной или Южной Америке. Яд каждого вида гремучей змеи содержит компоненты, которые могут быть общими для всех гремучих змей, общими только для некоторых небольших групп или он может быть специфическим только для одного вида или подвида. Противоядием является сыворотка или частично очищенная фракция антитела сыворотки от животных, которые были сделаны невосприимчивыми (иммунными) к токсичности яда в результате схемы инъекции возрастающих доз змеиного яда. Научное исследование противоядия началось с разработки Генри Сивелла в 1887 г. и продолжалось в течение настоящего столетия. В настоящее время большое число и разнообразие моноспецифических и полиспецифических противоядий производится во всем мире. Классификация ядовитых змей. Класс Reptilla (рептилии)

Отряд Sqamata (змеи и ящерицы)

Подотряд Serpentes (змеи)

Подподотряд Alethinophidia (очковые змеи)

Сверхсемейство Colu broidea (ползучие змеи)

Применяемый здесь термин "Моноспецифическое противоядие" относится к противоядию, выработанному против яда одного вида или подвида ядовитых животных. Термин "полиспецифическое противоядие" относится к противоядию, выработанному против смеси двух или более ядов разных видов или подвидов ядовитых животных. Термины моноспецифическая и полиспецифическая антисыворотка используется здесь для того, чтобы избежать путаницы, которая может быть названа использованием общих альтернативных выражений "моновалентная" и "поливалентная" антисыворотка. Эта терминология используется потому, что термин "валентность" применяется иммунологами для выражения числа мест связи (сайтов связывания), имеющегося у антитела или продукта расщепления антитела, так, например, Ig G молекула является двухвалентной в то время, как F (ав) фрагмент, который имеет только один участок связи, является одновалентным. Использование термина "специфическая" в описании антисыворотки исключает всякую путаницу. В первой исследовательской работе Г.Сивелла голубям были инокулированы сублетальные дозы для яда гремучей змеи с последующими инъекциями возрастающих доз до уровней выше тех, которые должны были при введении в самом начале вызывать смерть. Таким образом, выявлено, что птицы выработали резистентность к яду. В 1889 г. Кауфман получил подобные результаты, используя европейскую змею Viperk beras, а в 1892 г. Калметт, работая в Сайгоне с ядом кобры, сообщал, что можно придавать резистентность постепенными инъекциями яда. Однако именно Кантхак первым привил резистентность другому животному, после того как смешиванием яда с кровью от иммунизированного животного он выявил резистентность к летательным дозам змеиного яда. Основной целью Калметта было приучить животное к частым, повторным, постепенно возрастающим дозам яда (обычно яда кобры). Он нашел, что спустя 16 месяцев иммунизированные лошади становятся толерантными к 80-кратной летальной дозе яда. Он показала также, что антисыворотка, полученная из крови, взятой у этих лошадей, обладает нейтрализующим эффектом в 20000 единиц при введении кроликам, т.е. 1 мл сыворотки мог нейтрализовать минимальную летальную дозу яда для 20000 г кроликов. Основные известные противоядия представляют собой рафинированные концентраты конских сывороточных глобулинов, приготовленных в жидком или сухом виде. Противоядия получают от лошадей, которые были иммунизированы по отношению к только одному яду для получения моноспецифического противоядия или смеси ядов для получения полиспецифического противоядия. Противоядия были приготовлены для лечения основных типов отравлений змеиным ядом. С тех пор за последнее столетие способы получения изменились мало. Иммунная лошадиная сыворотка может подвергаться этапу грубой очистки обычно с применением сульфата аммония для выделения глобулиновой фракции, и в некоторых случаях это и является формой конечного продукта. Так как противоядия в этой форме могут вызывать тяжелые сывороточные реакции, известно применение пепсинового дигарирования для удаления Fc части иммуноглобулина, которая главным образом ответственная за такие иммуногенные реакции. Эффективность известных противоядий при нейтрализации как вредных, так и, по-видимому, невредных эффектов специфического яда может изменяться очень значительно и зависит от ряда факторов. Наиболее важными среди таких факторов являются специфичность противоядия, титр полученных антител и степень концентрации или очистки конечного продукта. Вообще самым специфическим противоядием с большим будущим является то, которое будет нейтрализовать провоцирующий яд. Моноспецифические противоядия, выработанные против одного яда, являются поэтому более эффективными по отношению к соответствующему им яду. Тем не менее подобные противоядия применяются только для лечения змеиного укуса только в том случае, если установлен вид или подвид напавшей змеи. Если напавшая змея не установлена, как бывает обычно, в "полевой" ситуации, предпочтительным является полиспецифическое противоядие, выработанное против целого спектра разных ядов с целью повышения вероятности противоядия, которое эффективно по отношению к яду неопознанной змеи. Известные полиспецифические противоядия, однако, страдают отсутствием специфичности моноспецифических противоядий и поэтому являются менее эффективными при нейтрализации фармакологической активности яда. Было сделано неожиданное открытие, что противоядие (называемое здесь "смешанным моноспецифическим противоядием"), содержащее смесь разных антисывороток, разработанных отдельно для разных ядов, является более эффективным для нейтрализации фармакологической активности яда, чем известное полиспецифическое противоядие, полученное выработкой одной антисыворотки для целого спектра ядов, но сохраняет широкую специфичность полиспецифических противоядий. Согласно первому аспекту изобретения предлагается противоядие, включающее смесь по меньшей мере двух разных антисывороток, выработанных против разных ядов. Полагают, что противоядия, содержащие смесь разных антисывороток, являются более эффективными, чем известные полиспецифические противоядия, поскольку первые могут содержать большую пропорцию антетел, направленных против компонентов ядов с низким молекулярным весом и/или недостаточно иммунногенных. Змеиные яды представляют собой сложные многокомпонентные смеси белка, нуклеотидов и ионов металла. Эти компоненты различаются по молекулярному весу, по степени их антигенности и по их концентрации в яде. Когда яд вводят животному для выработки антисыворотки, может возникнуть целый ряд популяций антитела. Концентрация и средство выработанных антител будет меняться согласно различным критериям, например по числу эпитопов на поверхности компонента, иммуногенности каждого эпитопа, концентрации каждого компонента. Летальные, нейротоксичные компоненты ядов (включая, например, яды гремуччих змей) часто включают компоненты с низким молекулярным весом, слабо иммуногенные, присутствующие лишь в низких концентрациях. Маловероятно, что такие компоненты вызовут высокие титры антител. Полагают, что данная проблема усугубляется при производстве полиспецифического противоядия с помощью использования иммунизирующей смеси, включающей смесь ядов, в которой компоненты с низким молекулярным весом и слабо иммуногенные далее разбавляются высокоиммуногенными компонентами. Производство полиспецифического противоядия дает в результате противоядие, в котором антитела к некоторым компонентам не существуют или присутствуют в такой малой концентрации, что их эффективность ничтожна. В противоположность этому смешанные моноспецифические противоядия изобретения содержат смесь антисывороток, выработанных против разных ядов на отдельных группах животных. При выработке антисывороток отдельное число возможных популяций антител, которое доступно для каждой сыворотки, является одним и тем же, но число эпитопов в иммуногене значительно меньше. Таким образом, полагается, что антисывороточные компоненты содержат более высокую пропорцию защитных антител против низкомолекулярных, слабоиммуногенных компонентов, чем полиспецифические противоядия. Сочетание моноспецифических антисывороток для получения смешанной моноспецифической антисыворотки приводит к противоядию, которое имеет все популяции моноспецифической сыворотки и поэтому обеспечивает лучшую защиту, и обладает также преимуществами полиспецифического противоядия в том смысле, что перекрестная реакционноспособность противоядия становится максимальной. Очевидно, что каждый компонент противоядия смешанного моноспецифического противоядия по изобретению может сам быть моноспецифическим противоядием или полиспецифическим противоядием. Например, смешанное моноспецифическое противоядие может включать смесь полиспецифического противоядия, выработанного против ядов A + B, и моноспецифического противоядия, выработанного против яда C. Предпочтительно каждым компонентом противоядия является моноспецифическое противоядие. Например, смешанное моноспецифическое противоядие может включать смесь моноспецифических противоядий, выработанных против ядов A, B и C. Антисыворотки, которые включают смешанное моноспецифическое противоядие могут смешиваться в любой подходящей пропорции. Предпочтительно смешанное моноспецифическое противоядие содержит антисыворотку, смешанную в пропорции, соответствующей географической зоне, для применения в которой предназначается смешанное моноспецифическое противоядие. Факторами, которые могут учитываться при изготовлении такого "заказного" смешанного моноспецифического противоядия являются население, распределение, поведение и токсичность конкретного ядовитого животного в конкретной области. Состав смешанного моноспецифического противоядия может определяться статистическим анализом укусов людей в конкретной географической местности конкретными видами или подвидами ядовитых животных. Предпочтительно каждый компонент антисыворотки смешанного моноспецифического противоядия присутствует прямо пропорционально относительной частоте укусов людей в конкретном географическом районе конкретными видами или подвидами ядовитого животного, против яда которого вырабатывается антисыворотка. Например, гремучая змея Diamond-back подразделяется на два географических типа, известных как Восточная (C. ademauteus) и Западная (C. atrox/Diamoud-back). Поэтому может быть изготовлено смешанное моноспецифическое противоядие, которое подходило бы для змей конкретного географического района. Включение противосыворотки против змей, которые не встречаются в этом районе, которая могла бы разбавить эффективность любого продукта, следовательно, является ненужным. Данная способность производить заказные противоядия дает возможность смешанным моноспецифическим противоядиям изобретения приближаться к эффективности или даже улучшать эффективность гомологичного моноспецифического противоядия без проведения статистического исследования типов змеиных укусов в географической местности. Антисыворотки, включающие противоядие, могут вырабатываться на любом подходящем животном, например, мышах, крысах, овцах, козах, ослах или лошадях. Предпочтительно вырабатывать антисыворотку на овцах. Вырабатывание антисыворотки на овцах особенно предпочтительно по сравнению с традиционным способом выработки антисыворотки на лошадях, так как выбранная на овце антисыворотка не содержит ни одного из особенно иммуногенных Ig Gu Gg G(T) компонентов лошадиной антисыворотки, которые вызывают нежелательные иммунногенные сывороточные реакции у людей или животных, которым вводится такое противоядие. Антисыворотка, которая включает противоядие, может быть цельной антисывороткой. Предпочтительно антисыворотка может частично расщепляться (дигерироваться) на фрагменты F(ав 1) 2 или F(ав). Целесообразно удалять фрагменты Fc для снижения иммуногенной реакции пациента на противоядие. Получение фрагментов антитела может выполняться с помощью обычных приемов, например, расщеплением пепсина или папаина. Антисыворотка, которая включает противоядие, может вырабатываться против яда любого ядовитого животного, включая змей, gilа mousters, пауков и пчел. Противоядие может содержать антисыворотку, выработанную для яда только одного типа животного, например, антисыворотка, выработанная для яда различных видов или подвидов змей. Альтернативно противоядие может включать антисыворотку, выработанную для яда более чем одного типа животных. Предпочтительно ядом является змеиный яд. Еще предпочтительнее, когда ядом является яд гремучей змеи. Яд, против которого вырабатывается каждая антисыворотка, может состоять целиком из яда, частично очищенного яда или одного или более выбранных компонентов яда. Предпочтительно, когда ядом является цельный яд. Согласно еще одному аспекту изобретения предлагается способ получения противоядия по первому аспекту изобретения, предусматривающий смешение по меньшей мере двух различных антисывороток. Согласно третьему аспекту изобретения предлагается фармацевтическая композиция, содержащая эффективное количество противоядия по первому аспекту изобретения в сочетании с фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем. Предпочтительно фармацевтическая композиция является подходящей для парентерального приема пациентом. Еще предпочтительнее фармацевтическая композиция, пригодная для внутренней инъекции. Согласно четвертому аспекту изобретения предлагается способ нейтрализации яда, включающий введение субъекту, страдающему от воздействия яда, противоядия по первому аспекту изобретения в эффективном количестве. Согласно пятому аспекту изобретения предлагается набор для введения противоядия в организм человека или животного, включающий: a) противоядие, согласно первому аспекту изобретения, b) средство для инъекции противоядия в организм. На фиг. 1 показана активность A2 фосфата в 1 мкг четырех кроталидных ядов; на фиг. 2 - количество противоядия, необходимое для нейтрализации 50% активности A2 фосфолипазы в 1 мкг кроталидного яда. Понятно, что изобретение описывается с помощью примера только в качестве иллюстрации, и в объеме изобретения могут производиться модификации и другие изменения. Экспериментальные исследования. 1. Получение противоядий. Противоядие было получено иммунизацией группы из уэльских овец ядом по известной схеме иммунизации Сидки и др. (табл.3). Яд для иммунизации был предложен профессором Ф. Расселом из Аризонского университета. Яд был собран у большого числа змей того же вида. Были включены особи разного возраста и географического размещения, и яд собирали на протяжении года. Известно, что эти факторы влияют на состав яда и поэтому являются важными для эффективного производства противоядия. Собиралась кровь (300 мл) от группы и сливалась ежемесячно, и сыворотку отсасывали после достижения образования сгустка при 4 o C в течение 18 ч. Концентрат получают из антисывороточного фонда осаждением сульфата натрия. Фракцию иммуноглобулина затем частично очищают осаждением сульфата натрия из антисывороточного фонда. Объемы антисыворотки смешивают с разными объемами 6%-ного сульфата натрия, и полученную смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре для осаждения иммуноглобулина. После центрифугирования при 3500 об/мин в течение 60 мин сгусток промывают дважды 18%-ным сульфатом натрия, и конечный сгусток затем реконструируют буферным раствором фосфата (PBS) до объема, равного объему исходного антисывороточного депо. Затем раствор циализуют по отношению к 20 объемам ПВС, и продукт хранят при 4 o C до востребования. Продукт может подвергаться анализу способом микро-Кьельдаля для определения точной концентрации белка в пробе. Если требуется, может осуществляться расщепление данного Gg J для образования F(ав 1) 2 и F(ав) с применением пепсина или папаина, соответственно. Эти продукты могут быть также анализироваться по методу S S/PAGE, микро-Кьельдаля и ЕЛИЗА с целью обеспечения сохранения эффективности. 2. Сравнение противоядия "ин витро". Введение

Змеиный яд является многокомпонентной смесью протеинов, ионов металла и нуклеотидов. Хотя точная природа каждого отдельного конкретного яда является особенной для генотипа змеи, существуют некоторые общие протеины. Одним из таких общих протеинов является фермент фосфолипаз A 2 (PLA 2). Этот фермент ответствен прежде всего за распад жиров организма, но может обладать и рядом других активностей, таких как разрыв клетки из-за продуктов жирового гидролиза и нейротоксичностью, обусловленной фармакологически активным сайтом у фермента. Активность PLA2 в ядах кроталидных или гремучих змей может определяться простым колорометрическим анализом. PLA2 гидролизует жиры, давая жирную кислоту и глицерин, приводящих в результате к падению pH системы. PLA2+жир ___ жирная кислота+глицерин

Такое падение pH может регулироваться введением окрашенного pH индикатора в систему. Оценка активности PLA2. Следующий анализ может применяться для регулирования активности A2 фосфолипазы (PL K2. EC 3.1.1.4.) конкретных ядов. Активность ядов оценивается измерением высвобождения свободной жирной кислоты из фосфолипидного субстрата (фосфатидилхолин) фирмы "Сигма-Кемикал", номер продукта P-9671 (с применением pH индикатора Крезол красный, фирма "Сигма-Кемикал", номер продукта C-9877). Буферная проба:

1. 100 мм NaCl

2. 100 мм KCl (Все сорта GPR реагента)

3. 10 мм CaCl 2

Для обычного анализа берут 500 мл данного раствора и доводят pH до 6,8 с использованием разбавленного раствора гидроокиси натрия. Приготовление индикатора: 10 мг креозола красного (натриевая соль, Сигма, N C-9877) растворяют в буферной пробе (10 мл) и обертывают сосуд тонкой фольгой. Приготовление субстрата: фосфатидилхолин (1,2 г из яичного желтка, тип XY-E, 60% форма L-альфа, Сигма, N 9671) растворяют в метаноле (1 мл) и доводят раствор до 10 мл буфером (конечная концентрация 120 мг/мл). Это следует делать заново для каждой серии экспериментов. Метод: сырой высушенный замораживанием моновалентный яд растворяется в дистиллированной воде до конечной концентрации 10 мг/мл. Обычно 10 мл раствора яда берут для каждой серии экспериментов. Раствор субстрата затем подготавливают следующим образом. В 1 мл свежеприготовленной липидной суспензии добавляют 25 мл буфера для анализа и 0,3 мл тритон-X-100 (ВДН N 30632). Тщательно перемешивают раствор до тех пор, пока он не становится прозрачным. Доводят pH до 8,6 с использованием разбавленной гидроокиси натрия. Добавляют 1 мл полученного раствора индикатора и доводят конечный объем субстратного раствора до 30 мл буфером. Субстратный раствор должен быть красным по цвету, в противном случае следует проверить pH буфера. Данный раствор следует также обернуть серебряной фольгой. К 2,8 мл субстратного раствора в пластиковой 3-мл кювете добавляют 100 мкг буфера и измеряют CD 573нм. Добавляют 100 мм раствора яда и включают секундомер. Во вторую кювету, содержащую 2,8 мл субстратного раствора и 100 мкл буфера, добавляют еще 100 мкл буфера для регулирования любого случайного падения pH. Это проводится параллельно с кюветой для анализа. Считывания производились каждую минуту в течение 30 мин. Затем строят график OD в зависимости от времени с учетом предпосылок падения pH контрольной пробы, и вычитают данное значение из значения, полученного при добавлении яда. После этого все показания выражают в процентах систематизированного контрольного показания. Исследования нейтрализации. Эксперименты по нейтрализации проводились с применением Ig G отрезков соответствующей антисыворотки. Эти препараты получают осаждением соли из всей антисыворотки, (18% сульфата натрия, 25 o C в течение 1,5 ч). Аналитический и субстратный буферы, применяемые для этих исследований, были идентичными применяемым в вышеописанных экспериментах. 1 л противоядия в 10-кратном разбавлении в буфере (исходный раствор) разбавляют еще два раза и добавляют 100 мкл количества к 100 мкл раствора конкретного яда (10 мкг). Подготавливают два дополнительных комплекта проб для регулирования падения pH (200 мкл аналитического буфера) и общего гидролиза (100 мкл буфера и 100 мкл раствора яда). Затем пробы выдерживают 30 мин при комнатной температуре. В течение данного периода подготавливают субстратный раствор и проверяют pH. После этого измеряют нулевое время OD 2,8 мл количеств субстратного раствора. Это проделывается непосредственно перед добавлением 200 мкл раствора яд/противоядие (после 30-мин инкубационного периода). Проводят дополнительные 15-мин инкубирование при комнатной температуре, и затем считывают OD. Результаты затем обрабатывают, как описано выше, и выражают в виде процента нейтрализации яда в результате гидролиза. Результаты. Вышеназванные испытания проводились с использованием ядов четырех гремучих змей, которыми были Apiscivorous, C. adamanteus, C. atrox и C. scutulatus. На фиг. 1 показано, что каждый из этих ядов содержит сильнодействующие PLA2 ферменты, и показан порядок активности: A. piscivorous > C. adamanteus = C. scutulatus > C. atrox. Затем устанавливают способность нейтрализации PLA2 описанных выше противоядий. Исследование нейтрализации проводилось с использованием смешанного моноспецифического противоядия, приготовленного смешенным равных объемов одинаковой концентрации моноспецифических Ig G, полученных иммунизацией четырех групп овец против яда A pisivorous, C. adamanteus, C. atrox и C. scutulatus. Концентрации определяли с помощью метода азотного анализа Кьельдаля и уравнивали добавлением соответствующих количеств ПВС. Контрольные исследования нейтрализации также проводились с использованием многоспецифических противоядий, выработанных для каждого из ядов, и с использованием полиспецифических противоядий, выработанных для смеси 1:1:1:1 этих ядов. В контрольных экспериментах использовали в точности аналогичные схемы, включая источники яда, иммунизацию, очистку и испытания, как и в эксперименте со смешанным моноспецифическим противоядием. Результаты показаны на фиг.2, где видно, что смешанное моноспецифическое противоядие обладает большей или равной эффективностью по сравнению с соответствующими полиспецифическими антисыворотками для нейтрализации активности PLA2 яда. Действительно, для трех из четырех испытываемых ядов потребовалось значительно меньше противоядия для достижения 50%-ной нейтрализации. Кроме того, смешанные моноспецифические противоядия обладают также сходной или большей эффективностью, чем гомологическое моноспецифическое противоядие, указывая на то, что смешанное моноспецифическое противоядие имеет более высокую степень перекрестной реакционноспособности. Эти результаты привели к выводу, что в случае нейтрализации PLA2 смешанная моноспецифическая антисыворотка гораздо эффективнее, чем ее полиспецифический аналог.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ямкоголовая гадюка представитель семейства Trimeresurus*, которая изображена на фото, в руках научного сотрудника Института Клодомиро Пикадо (всемирно известного змеиного исследовательского центра) Университета Коста-Рики - это змея, с которой связанно больше всего несчастных случаев в вышеупомянутой стране.

*Эта змея, также известна под названиями terciopelo («бархатная кожа»), barba amarilla («жёлтая борода») и equis («икс» в переводе с испанского, благодаря особому, икс-образному расположению узора на её коже).

Если она впрыснет Вам свой яд, кроме ужасной боли, возникнет сильный отёк и омертвение тканей в месте укуса, а протеины, обладающие противосвертывающими свойствами, которые содержит её яд, начинают вызывать внутренние кровотечения, что может привести к сердечному приступу и вызвать смертельный исход.

Гораздо реже, но также случаются укусы коралловой змеи из семейства аспидовых (Elapidae). Их яд обладает другой схемой действия на организм укушенного. Равно как и яд кобры, яд коралловой змеи содержит нейротоксические вещества, которые блокируют коммуникацию между нервами и мускулами, приводя к параличу в поврежденной зоне и даже к смерти из-за остановки дыхания, в худших случаях.

Улучшение наступит, только в том случае, если Вам введут одну из антизмеиных сывороток, приготовленных в этом центре, созданном в 70-ых годах с целью борьбы против укусов змей в Коста-Рике. Институт Клодомиро Пикадо за небольшое количество времени начал снабжать сывороткой всю Центральную Америку, и сейчас превратился в центр исследования и производства, который экспортирует свою продукцию по всему миру и печатает двадцать научных работ в год в сотрудничестве с лабораториями различных стран (например, Институт Биомедицины в Валенсии).

Процесс производства концептуально простой: ученые Института Клодомиро Пикадо добывают яд змей, которых они держат в местном серпентарии и делают инъекцию маленькими дозами 120 лошадям, которые находятся у них в собственности. По истечении нескольких дней ученые берут у каждой лошади по 6 литров крови и выделяют антитела, которые выработались в лошадином организме в ответ на змеиный яд.

Из этих антител в собственных лабораториях, они изготавливают сыворотки.

Такие, как нам демонстрирует заместитель директора Института Хосе Гутиеррес.

Если коралловой змее удастся открыть рот достаточно чтоб укусить человека и впрыснуть свой яд, после инъекции этой антизмеиной сыворотки антитела вступят в реакцию с нейротоксическими протеинами яда и нейтрализуют их.

Это работа вносит неоценимый вклад в содействие Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) в области оказания помощи людям, укушенным змеями. Коста-риканские ученые делают всё возможное, чтобы сократить количество смертей от змеиных укусов, ведь, по данным ВОЗ, в год от укусов змей погибают до 125.000 человек.