Главная · Язва · Рпга 1 40 что значит. Трепонемные тесты на сифилис. Реакции на разных стадиях заболевания

Рпга 1 40 что значит. Трепонемные тесты на сифилис. Реакции на разных стадиях заболевания

Многие пациенты неоднократно задавались вопросом: «Анализ крови РПГА – что это такое?» Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – такое исследование, которое помогает определить наличие в организме возбудителя, способного провоцировать сифилис. Данный анализ предоставляет достоверные результаты и помогает начать своевременную терапию, которая назначается исключительно специалистом. Для получения качественных результатов рекомендуется соблюдать советы врача. Расшифровкой анализа занимается специалист, поэтому не стоит заниматься самостоятельной диагностикой, так как это может привести к негативным последствиям. Рекомендовано обследование во многих ситуациях.

Значение анализа крови РПГА

Это исследование подразумевает особую реакцию, которая выявляет в организме неактивную гемагглютинацию, помогает вычислить наличие антигенов бледной трепонемы, считающейся контагием сифилиса – опасного заболевания, приводящего к неблагоприятным последствиям, сопровождающегося различной симптоматикой.

В организме она способна спровоцировать определенную реакцию иммунитета, то есть выработку специфических антител. Если после сдачи анализа в крови будут отмечаться положительные результаты, то это свидетельствует о прогрессировании данного организма. Означать это может только одно - срочная терапия.

Серологические исследования бывают:

  • специфические;
  • неспецифические.

Данное подразделение опирается на разновидности антител, которые можно выявить в крови пациента в результате обследования. В общей сложности, реакция пассивной гемагглютинации – РПГА – специфическое исследование в отношении бледной трепонемы. Установление сифилиса в организме относится к категории специфических диагностик, которые позволяют определить заболевание в любое время его развития.

Иногда РПГА может повлечь за собой ложноположительный результат исследования у пациента. Данная ситуация наблюдается, если у человека развиваются и диагностируются аутоиммунные заболевания и патологии.

Получение ложных результатов теста могут быть спровоцированы из-за вирусных заболеваний, которые увеличивают в человеческом организме неспецифические антитела. Поэтому пациенту могут назначить иные виды исследований для выявления прогрессирующих патологий, а также повторные анализы РПГА.

Необходимость анализа

Так как сифилис – заболевание, которое передается половым путем, анализ РПГА помогает выявить заражение и поспособствует своевременно начатой терапии. Если проигнорировать незащищенный половой акт, то это может привести к серьезным необратимым последствиям и различным половым заболеваниям.

Данное исследование необходимо:

  • Для определения наличия сифилиса в организме, так как это заболевание передается не только половым путем, может протекать на начальных стадиях практически бессимптомно.
  • Для устройства на работу в различные организации, где сотрудник будет работать с людьми – столовые, больницы, военные организации.

  • При постановке на учет в период вынашивания ребенка. В такой ситуации может корректироваться терапия при беременности (т.к. заболевание может привести к различным отклонениям в развитии плода).
  • Перед операционным вмешательством и при госпитализации пациента.
  • Для доноров крови, чтобы исключить распространение вируса.
  • Для людей, которые отбывают срок в местах заключения.
  • Для пациентов, у которых существует вероятность прогрессирования сифилиса.
  • Для пациентов, у которых скрининговое исследование показало положительный результат.
  • После незащищенного полового акта с непроверенным партнером.
  • Проводится детям, которые были рождены от зараженной бледной трепонемой матери. В данной ситуации ребенку назначается специальная терапия, которая поможет улучшить его здоровье и избавиться от проблемы.
  • Для отслеживания положительных результатов в период активной терапии.
  • Для убеждения, что лечение привело к полному излечению пациента.

Анализ крови РПГА – исследование, которое помогает выявить в организме прогрессирование трепонемы – возбудитель сифилиса.

Иные обследования

Сифилис – болезнь, которая требует своевременной диагностики и лечения, если выявить патологии в первые дни после заражения, то существует большая вероятность полного излечения. Если есть сомнения, по поводу заражения, то необходимо обратиться за дополнительной консультацией к дерматовенерологу, который будет курировать лечение, подбирающееся под каждого пациента в отдельности в зависимости от стадии патологии.

Чтобы поставить точный диагноз специалист осматривает пациента, уделяется отдельное внимание половым органам.

При данной патологии будут отмечаться специфические признаки:

  • высыпание на половых органах;
  • уплотнение кожного покрова;
  • увеличение лимфатических узлов.

После этого врач берет материал с поврежденных участков кожи для изучения его под микроскопом. Если специалист обнаружит в исследуемом материале трепонему, то это будет означать, что пациент заражен.

Но стоит помнить, что на некоторых стадиях патологии лабораторные анализы могут показать отрицательный результат, поэтому может потребоваться повторное обследование спустя некоторый период.

  • РНГА (реакция непрямой гемагглютинации).

Результаты анализов РПГА

Результат анализа будет готов уже через несколько дней, и пациент сможет узнать свой диагноз (если таковой имеется). Определить заражение можно лабораторным путем только через месяц прогрессирования бледной трепонемы в организме, то есть после первичного инфицирования.

Очень часто первичный анализ характерен для первичной стадии. Что касается вторичной, то заболевание уже сопровождается повышением показаний. При скрытом сифилисе также отмечаются пониженные отметки.

После пройденной терапии, которая будет отличаться между собой в зависимости от стадии патологии, у пациента сохранится положительный результат анализа. Не стоит этому удивляться, так как данная ситуация отмечается у большинства зараженных больных.

Для получения достоверных результатов, необходимо предварительно подготовиться:

  1. Кровь сдается на голодный желудок в утренние часы.
  2. Перед тестом не стоит пить большое количество жидкости, так как это может повлиять на кровь. Также компоненты напитков могут оказать свое влияние на результат.
  3. Стоит отказаться от табакокурения перед прохождением исследования и употребления алкогольных напитков накануне.

Кровь для исследования берется из вены, которая располагается на локтевом сгибе. Если вены находятся слишком глубоко (невозможно взять кровь на анализы), то забор может осуществляться из вен, которые находятся на кисти или в области предплечья.

Необходимо понимать, что если проигнорировать рекомендации специалиста по поводу предварительной подготовки и получить недостоверный результат исследования, то пациенту будет назначено неверное лечение, которое может привести к негативным побочным эффектам и развитию иных патологий в организме, поэтому не стоит рисковать своим здоровьем.

Очень часто пациенты выходят из кабинета с квадратными глазами, разглядывая кучу бланков на сдачу анализов в руках. Общий анализ крови и анализ мочи вопросов не вызывают, зато все остальные!

Например, кровь на РПГА. Что это за странные буквы? Для чего берут "лишнюю" кровь, когда уже все ясно?

Это только пациенту кажется, что все понятно, а врачу для того, чтобы поставить диагноз, нужен именно этот анализ.

Что это за хитрый анализ?

Если дали направление с этими странными буквами в бланке "на РПГА", что это будет обозначать? Это исследование не назначается при обычной диагностике.

Анализ очень специфический. Делается, чтобы определить стадию сифилиса. В том случае, когда общепринятый анализ на RW - реакцию Вассермана - оказался положительным, или доктор сомневается, что его показатель достоверный. Врачу требуются значения РПГА, чтобы назначить адекватную терапию.

В чем сущность РПГА?

Для тех, кто хочет узнать подробнее о том, РПГА - что это, мы даем ответ. Это специфический трепонемный тест. Если говорить медицинским языком, не совсем понятным простым обывателям, - реакция пассивной гемагглютинации.

В ее основу легло то, что агглютинация эритроцитов, на поверхности которых нашел приют возбудитель сифилиса, называемый или спирохетой, происходит с образованием трепонемных антител.

Агглютинация - процесс, при котором из состава взятой на анализ крови под воздействием специальных реактивов выпадает осадок из каких-либо бактерий, вирусов и прочих инородных включений.

Чем больше оседает эритроцитов с внедрившейся в них трепонемой, тем выше стадия заражения.

Что такое сифилис?

Даже столкнувшись с таким заболеванием, как сифилис, не все могут понять, насколько оно серьезно и чем чревато.

Это венерическая болезнь. Заразиться можно:

  • через слюну;
  • через влагалищный секрет;
  • через сперму;
  • бытовым путем при наличии повреждений на поверхности кожи;
  • ребенку может передаться сифилис через молоко больной матери.

На первой стадии заражения болезнью появляются шанкры - плотные образования или язвы, затем они исчезают.

Вторичная стадия характеризуется сыпью и увеличением лимфатических узлов.

Третья и четвертая стадии этой неприятной болезни могут выразиться в поражении головного мозга, сердечно-сосудистой системы, костных разрушениях и прочих патологических изменениях в организме.

Если у беременной женщины сифилис, то дети рождаются с острыми патологиями, которые касаются практически всех жизненно важных систем.

Если врач назначил сдать кровь на РПГА, что это такое, можно уточнить для общего развития, но отмахиваться от такого серьезного анализа нельзя! Сифилис требует обязательного лечения.

Те, кто имеют это заболевание, представляют серьезную опасность для окружающих.

Экспересс-диагностику заболевания - реакцию Вассермана или RW - обязательно делают всем, кто устраивается на работу или попадает на лечение в стационар.

Как прочитать результаты анализа?

Анализ сдан, и на руки выдали бланк с непонятными цифрами. Например, РПГА - 1/320. Что это может обозначать?

Цифры пишутся на бланке в том случае, если в организме обнаружена Если ее нет, то там будет написано слово "отрицательно". Значит, заболевание отсутствует, даже если реакция Вассермана была положительной.

РПГА показывает заболевание не ранее чем через 4 недели после внедрения трепонемы в организм, то есть после окончания инкубационного периода.

Цифры значения - это титры.

Анализ РПГА положительный еще будет долгие годы после того, как сифилис излечен.

Это интересно

Тема специфическая, но и сифилис - инфекция непростая. Страх заразиться им может отравить жизнь. Положительный РПГА и RW так выбивают из колеи, что некоторых особо нервных пациентов это заставляет задумываться о самоубийстве.

Не нужно сразу впадать в панику! Например, реакция Вассермана может показать наличие сифилиса во время беременности, при ангине и некоторых других заболеваниях. Именно для уточнения того, есть ли болезнь, и берут дополнительные анализы, один из которых - РПГА - анализ крови, который точно показывает, есть ли трепонема в организме, и какая стадия у заболевания.

Но и это исследование может оказаться неточным при некоторых воспалительных заболеваниях внутренних органов. Ложноположительный РПГА - что это может означать, кроме сифилиса? Например, острое воспаление селезенки.

Поэтому получив на руки первичные результаты, не нужно паниковать. Есть вероятность, что после повторной сдачи крови результат окажется отрицательным.

Если несколько специфических анализов крови на сифилис показывают положительный результат, только тогда заражение считается 100%.

Поэтому и проводят комплексное обследование. Оно состоит из:

  • реакции Вассермана;
  • РПГА;
  • ИФА - иммуноферментного анализа;
  • РИБТ, который выявляет сифилис при отсутствии внешней симптоматики на поздних стадиях.

К сожалению, сифилис - такая болезнь, которой можно заражаться несколько раз. Иммунитет после перенесенного заболевания не появляется.

При первичном сифилисе исследуется на бледную трепонему отделяемое твердого шанкра или пунктат лимфатических узлов. При вторичном сифилисе материал берется с поверхности эрозированных папул на коже, слизистых, с трещин и др. Перед взятием материала с целью очищения от различных загрязнений поверхность очагов (эрозии, язвы, трещины) необходимо тщательно протереть стерильным ватно-марлевым тампоном, который смачивается изотоническим раствором хлорида натрия или назначить примочки с этим же раствором. Очищенную поверхность осушивают сухим тампоном и платиновой петлей или лопаточкой слегка раздражают периферические участки, одновременно слегка сдавливая пальцами в резиновой перчатке основание элемента до появления тканевой жидкости (серума), из которой готовят препарат для исследования. Получение тканевой жидкости имеет важное значение для диагностики сифилиса, так как бледные трепонемы находятся в просветах лимфатических капилляров, в тканевых щелях вокруг лимфатических и кровеносных сосудов.

Пункция регионарных лимфатических узлов

Кожу над лимфатическими узлами обрабатывают 96% спиртом и 3-5% спиртовым раствором йода. Затем 1 и 2 пальцами левой кисти фиксируют лимфатический узел. Правой рукой берут стерильный шприц с несколькими каплями изотонического раствора хлорида натрия, который вкалывается параллельно продольной оси лимфатического узла. Игла проталкивается в разных направлениях до противоположной стенки капсулы узла и содержимое шприца медленно вводится. Пальцами левой кисти лимфатический узел слегка массируется. При медленном извлечении иглы одновременно выдвигают поршень шприца, аспирируя содержимое лимфатического узла. Материал наносится на предметное стекло (при малом количестве материала добавляется капля изотонического раствора хлорида натрия), покрывается покровным стеклом. Исследование нативного препарата проводится в темном поле зрения при помощи светооптического микроскопа с темнопольным конденсором (объектив 40, 7х, 10х или 15х). Бледные трепонемы могут обнаруживаться также в окрашенных препаратах. При окраске по Романовскому-Гимзе бледные трепонемы окрашиваются в розовый цвет, по Фонтану и Морозову в коричневый (черный), по методу Бурри неокрашенные трепонемы выявляются на темном фоне.

Серологическая диагностика

Важное значение в диагностике сифилиса, оценке эффективности лечения, установлении критерия излеченности, выявления скрытых, резистентных форм придается стандартным (классическим) и специфическим серологическим реакциям. К стандартным или классическим серологическим реакциям (КСР) относятся:
  • Реакция Вассермана (РВ),
  • осадочные реакции Кана и Закса-Витебского (цитохолевая),
  • реакция на стекле (экспресс-метод),
к специфическим:
  • реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ),
  • реакция иммунофлюоресценции (РИФ).

Реакция Вассермана (РВ)

- разработана А.Вассерманом (A.Wasserman) совместно с А.Нейссером (A.Neisser) и Ц.Бруком (C.Bruck) в 1906 году. Реакции Вассермана основана на феномене связывания комплемента (реакция Борде-Жангу) и позволяет определять противолипидные антитела (реагины). Согласно современным представлениям, в реакции Вассермана определяются антитела к липидам макроорганизма, а не бледной трепонемы и реакция выявляет аутоиммунный процесс, который вызывается денатурированием бледными трепонемами тканей макроорганизма с образованием липопротеидного комплекса (конъюгата), в котором липиды (гаптены) являются детерминантой.

Обычно РВ ставится с двумя или тремя антигенами. Наиболее часто применяется отличающийся высокой чувствительностью кардиолипиновый антиген (экстракт из сердца быка, обогащенный холестерином и лецитином) и трепонемный антиген (обработанная ультразвуком взвесь анатогенных культуральных бледных трепонем). Совместно с реагинами сыворотки крови больного эти антигены образуют иммунный комплекс, способный адсорбировать и связывать комплемент. Для визуального определения образованного комплекса (реагины + антиген + комплемент) в качестве индикатора применяется гемолитическая система (смесь эритроцитов барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент связан в 1 фазе реакции (реагины + антиген + комплемент), гемолиз не наступает - эритроциты выпадают в легко заметный осадок (РВ положительная). Если в 1 фазе комплемент не связан вследствие отсутствия в испытуемой сыворотке реагинов, он будет использован гемолитической системой и произойдет гемолиз (РВ отрицательная). Степень выраженности гемолиза при постановке РВ оценивается плюсами: полное отсутствие гемолиза ++++ или 4+ (РВ резкоположительная); едва начавшийся гемолиз +++ или 3+ (РВ положительная); значительный гемолиз ++ или 2+ (РВ слабоположительная); непонятная картина гемолиза ± (РВ сомнительная); полный гемолиз - (реакция Вассермана отрицательная).

Помимо качественной оценки РВ имеется количественная постановка с различными разведениями сыворотки (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титр реагинов определяется максимальным разведением, еще дающим резко положительный (4+) результат. Количественная постановка РВ имеет значение в диагностике некоторых клинических форм сифилитической инфекции, а также при проведении контроля за эффективностью лечения. В настоящее время реакция Вассермана ставится с двумя антигенами (кардиолипиновый и трепонемный озвученный штамм Рейтера). Как правило, РВ становится положительной на 5-6 неделе после заражения у 25-60% больных, на 7-8 неделе - у 75-96%, на 9-19 неделе - у 100%, хотя в последние годы иногда раньше или позже. При этом, титр реагинов постепенно нарастает и достигает максимальной величины (1:160-1:320 и выше) в случае появления генерализованных высыпаний (сифилис вторичный свежий). При позитивации РВ выставляется диагноз первичного серопозитивного сифилиса.
При вторичном свежем и вторичном рецидивном сифилисе РВ положительная у 100% больных, но у истощенных больных с ослабленным иммунитетом может наблюдаться отрицательный результат. Впоследствии титр реагинов постепенно понижается и при вторичном рецидивном сифилисе обычно не превышает 1:80-1:120.
При третичном сифилисе РВ положительная у 65-70% больных и обычно наблюдается низкий титр реагинов (1:20-1:40). При поздних формах сифилиса (сифилис внутренних органов, нервной системы) положительная РВ наблюдается в 50-80% случаев. Титр реагинов колеблется от 1:5 до 1:320.
При скрытом сифилисе положительная РВ отмечается у 100% больных. Титр реагинов от 1:80 до 1:640, а при позднем скрытом сифилисе от 1:10 до 1:20. Быстрое снижение титра реагинов (вплоть до полной негативации) во время лечения свидетельствует об эффективности лечения.

Недостатки реакции Вассермана - недостаточная чувствительность (в начальной стадии первичного сифилиса отрицательная). Она негативная также у 1/3 больных, если они в прошлом лечились антибиотиками, у пациентов третичным активным сифилисом с поражениями кожи и слизистых, костно-суставного аппарата, внутренних органов, центральной нервной системы, при позднем врожденном сифилисе.
Недостаточная специфичность - реакция Вассермана может быть положительная у лиц, которые ранее не болели и не болеют сифилисом. В частности ложноположительные (неспецифические) результаты РВ отмечаются у больных, которые страдают системной красной волчанкой, лепрой, малярией, злокачественными новообразованиями, поражениями печени, обширными инфарктами миокарда и другими заболеваниями, а иногда у совершенно здоровых людей.
Кратковременная ложноположительная реакция Вассермана выявляется у некоторых женщин перед родами или после них, у лиц, злоупотребляющих наркотиками, после наркоза, приема алкоголя. Как правило, ложноположительная РВ выражена слабо, чаще с низким титром реагинов (1:5-1:20), положительная (3+) или слабо положительная (2+). При массовых серологических обследованиях частота ложноположительных результатов составляет 0,1-0,15%. Для преодоления недостаточной чувствительности, пользуются постановкой на холоде (реакция Колляра) и одновременно она ставится с другими серологическими реакциями.

Осадочные реакции Кана и Закса-Витебского

Реакция Вассермана применяется в комплексе с двумя осадочными реакциями (Кана и Закса-Витебского ), при постановке которых готовятся более концентрированные антигены. Экспресс метод (микрореакция на стекле) - относится к липидным реакциям и основан на реакции преципитации. Ставится со специфическим кардиолипиновым антигеном, 1 каплю которого смешивают с 2-3 каплями исследуемой сыворотки крови в лунках специальной стеклянной пластины.
Преимущество - быстрота получения ответа (через 30-40 мин). Результаты оцениваются по количеству выпавшего осадка и величины хлопьев. Выраженность определяют как КСР - 4+, 3+, 2+ и отрицательная. Следует отметить, что ложноположительные результаты наблюдаются чаще, чем при РВ. Как правило, экспресс-метод применяется при массовых обследованиях на сифилис, при обследовании в клинико-диагностических лабораториях, соматических отделениях и больницах. На основании результатов экспресс-метода диагноз сифилиса выставлять запрещается, исключается его применение у беременных, доноров, а также для контроля после лечения.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ)

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) - предложена в 1949 году Р.Нельсоном (R.W.Nelson) и М.Мейером (M.Mayer). Является наиболее специфичным диагностическим тестом на сифилис. Однако сложность и дороговизна постановки ограничивает ее применение. В сыворотке крови больных производится определение видеоспецифичных антител (иммобилизинов), которые приводят к неподвижности бледных трепонем в присутствии комплемента. Антигеном являются живые патогенные бледные трепонемы, выделяемые от зараженных сифилисом кроликов. С помощью микроскопа проводится посчет утративших подвижность (иммобилизованных) бледных трепонем и оцениваются результаты РИБТ: иммобилизация бледных трепонем от 51 до 100% - положительная; от 31 до 50% - слабо положительная; от 21 до 30% - сомнительная; от 0 до 20% - отрицательная.
РИБТ имеет значение при дифференциальной диагностике для отграничения ложноположительных серологических реакций от реакций, обусловленных сифилисом. Поздно становится положительной чем РВ, РИФ и поэтому для диагностики заразных форм сифилиса ее не применяют , хотя во вторичном периоде сифилиса она положительная у 85-100% больных.
В третичном периоде сифилиса с поражением внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы РИБТ положительная в 98-100% случаев (РВ часто отрицательная ).
Необходимо помнить, что РИБТ может оказаться ложноположительной в случае наличия в исследуемой сыворотке трепонемоцидных препаратов (пенициллин, тетрациклин, макролиты и др.), которые вызывают неспецифическую иммобилизацию бледных трепонем. С этой целью кровь на РИБТ исследуется не ранее 2 недель после окончания приема антибиотиков и других лекарственных средств.
РИБТ как и РИФ в процессе лечения медленно негативируются, поэтому она не применяется в качестве контроля в процессе лечения.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) - разработана в 1954 году A.Coons и впервые применена для диагностики сифилитической инфекции Deacon, Falcone, Harris в 1957 году. РИФ основана на непрямом методе определения флюоресцирующих антител. Антигеном для постановки являются фиксированные на предметных стеклах тканевые патогенные бледные трепонемы, на которые наносят исследуемую сыворотку. Если в исследуемой сыворотке имеются противотрепонемные антитела, относящиеся к IgM и IgG, они прочно связываются с антигеном - трепонемами, что выявляется в люминесцентном микроскопе с помощью антивидовой ("противочеловеческой") флюоресцирующей сыворотки.
Результаты РИФ учитываются по интенсивности свечения бледных трепонем в препарате (желто-зеленое свечение). При отсутствии противотрепонемных антител в сыворотке, бледные трепонемы не определяются. При наличии антител выявляется свечение бледных трепонем, степень которого выражается в плюсах: 0 и 1+ - отрицательная реакция; от 2+ до 4+ - положительная.
РИФ относится к групповым трепонемным реакциям и ставится в разведении исследуемой сыворотки в 10 и 200 раз (РИФ-10 и РИФ-200). РИФ-10 считается более чувствительной, однако часто выпадают неспецифические положительные результаты, чем при постановке РИФ-200 (отличается более высокой специфичностью). Как правило, РИФ становится положительной раньше, чем РВ - положительная при первичном серонегативном сифилисе у 80% больных, у 100% во вторичном периоде сифилиса, всегда положительная при скрытом сифилисе и в 95-100% случаев при поздних формах и врожденном сифилисе.
Специфичность РИФ повышается после предварительной обработки исследуемой сыворотки сорбентом-ультраозвученным трепонемным антигеном, который связывает групповые антитела (РИФ - абс).
Показания к постановке РИБТ и РИФ - диагностика скрытого сифилиса для подтверждения специфичности комплекса липидных реакций в случае предположения сифилитической инфекции на основании положительной РВ. Положительные РИБТ и РИФ являются доказательством латентного сифилиса. При ложноположительной РВ при различных болезнях (системная красная волчанка, злокачественные новообразования и др.) и если повторные результаты РИБТ и РИФ отрицательные, это свидетельствует о неспецифическом характере РВ. Подозрение на поздние сифилитические поражения внутренних органов, опорно-двигательного аппарата, нервной системы при наличии у больных отрицательной РВ. Подозрение на первичный серонегативный сифилис, когда у пациентов при многократных исследованиях отделяемого с поверхности эрозии (язвы), при пунктате из увеличенных регионарных лимфатических узлов бледная трепонема не обнаруживается - в этом случае ставится только РИФ - 10.
При обследовании лиц с отрицательной РВ , которые имели длительные половые и бытовые контакты с больными сифилисом, учитывая вероятную возможность лечения их в недавнем прошлом противосифилитическими препаратами, вызвавшими негативацию РВ. Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA - enzymelinked immunosorbent assay) - метод разработан E.Engvall и соавт., S.Avrames (1971). Сущность состоит в соединении сифилитического антигена, сорбированного на поверхности твердофазного носителя с антителом исследуемой сыворотки крови и выявлении специфического комплекса антиген-антитело при помощи меченной ферментом антивидовой иммунной сыворотки крови. Это позволяет оценивать результаты ИФА визуально по степени изменения окраски субстрата под действием фермента, входящего в состав конъюгата. Недостоверные результаты ИФА могут возникать в результате недостаточного разведения инградиентов, нарушения температурного и временного режимов, несоответствии рН растворов, загрязнении лабораторной посуды, неправильной технике промывки носителя.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА)

Предложена в качестве диагностического теста на сифилис T.Rathlev (1965,1967), T.Tomizawa (1966). Макромодификация реакции называется ТРНА, микромодификация - МНА-ТР, автоматизированный вариант - AMNA-TR, реакция с макрокапсулами из полимочевины вместо эритроцитов - МСА-ТР. Чувствительность и специфичность РПГА аналогичны РИБТ, РИФ, но РПГА имеет меньшую чувствительность при ранних формах сифилиса по сравнению с РИФ-абс и большую при поздних, при врожденном сифилисе. РПГА ставится в качественном и количественном вариантах.

Техника взятия крови для серологических реакций

Для исследования на РВ, РИФ, РИБТ кровь берут из локтевой вены натощак или не раньше 4 час после приема пищи стерильным шприцом или одной иглой (самотеком). В месте взятия кожу предварительно обрабатывают 70% спиртом. Шприц и игла должны быть промыты изотоническим раствором хлорида натрия. В чистую сухую холодную пробирку вливают 5-7 мл исследуемой крови. На пробирку клеится чистая бумага с фамилией, инициалами пациента, номером истории болезни или амбулаторной карты, датой взятия крови. После взятия крови пробирка помещается в холодильник с температурным режимом +4°+8°С до следующего дня. На следующий день сыворотка сливается для исследования. В случае не использования крови на следующий день, сыворотку необходимо слить со сгустка и хранить в холодильнике не более 1 недели. Для исследования на РИБТ пробирка должна быть специально подготовлена и стерильна. В случае нарушения правил забора крови на исследование, несоблюдение условий может произойти искажение результатов.
Не рекомендуется производить забор крови для исследования после приема пищи, алкоголя, различных медикаментозных препаратов, после введения различных вакцин, во время менструального цикла у женщин.
Для исследования на экспресс-метод кровь берегся из кончика пальца, как это делается при ее взятии на СОЭ, но берут кровь на 1 капилляр больше. Экспресс-метод можно также ставить с сывороткой крови, полученной при помощи венопункции. Если возникает необходимость исследования крови в отдаленных лабораториях, вместо крови можно пересылать сухую сыворотку (метод сухой капли). Для этого на следующий день после взятия крови, сыворотку отделяют от сгустка и набирают в стерильный шприц в количестве 1 мл. Затем сыворотку выливают в виде 2 отдельных кружков на полоску плотной писчей бумаги (вощаная бумага или целлофан) размером 6x8 см. На свободном крае бумаги пишется фамилия, инициалы обследуемого и дата забора крови. Бумагу с сывороткой защищают от прямых солнечных лучей и оставляют при комнатной температуре до следующего дня. Сыворотка засыхает в виде небольших кружочков блестящей желтоватой стекловидной пленки. После этого, полоски бумаги с высушенной сывороткой свертывают как аптечный порошок и отсылают в лабораторию, указывая диагноз и с какой целью исследуется.

Серологическая резистентность

У части (2% и более) больных сифилисом, несмотря на проведенную полноценную противосифилитическую терапию, наблюдается замедление (отсутствие) негативации серологических реакций после окончания лечения до 12 мес и более. Возникает так называемая серологическая резистентность, которая в последние годы стала часто наблюдаться. Различают формы серологической резистентности:
  • Истинная (абсолютная, безусловная) - необходимо провести дополнительное противосифилитическое лечение, комбинируя с неспецифической терапией для повышения иммунных сил организма.
  • Относительная - после полноценного лечения бледные трепонемы образуют цист- или L-формы, которые находятся в организме в маловирулентном состоянии и вследствие этого дополнительное лечение не изменяет показатели серологических реакций, особенно РИФ и РИБТ.
В то же время в цист-формах происходят незначительные обменные процессы, а оболочки цист-форм являются чужеродным белком (антигеном). Для своей защиты организм вырабатывает специфические антнтела, которые положительны или резко положительны при постановке серологических реакций, отсутствии проявлений заболевания. При L-формах обменные процессы более снижены и антигенные свойства отсутствуют или незначительно выражены. Специфические антитела не вырабатываются или они в небольшом количестве, серологические реакции слабо положительные или отрицательные. Чем больший период времени от момента заражения, тем большее количество бледных трепонем трансформируется в формы выживания (цисты, споры, L-формы, зерна), при которых противосифилитическая терапия не эффективна.

Псевдорезистентность - после проведенного лечения несмотря на положительные серологические реакции бледная трепонема в организме отсутствует. Антигена в организме нет, но продолжается выработка антител, которые фиксируются при постановке серологических реакций.
Серологическая резистентность может развиваться вследствие:

  • неполноценного лечения без учета давности и стадии заболевания;
  • недостаточной дозы и в частности из-за неучета массы тела пациентов;
  • нарушения интервала между введением препаратов;
  • сохранения в организме бледных трепонем несмотря на проведенное полноценное специфическое лечение, из-за их стойкости к пенициллину и другим химиопрепаратам в случае наличия скрытых, осумкованных очагов поражения во внутренних органах, нервной системе, лимфатических узлах, которые малодоступны для антибактериальных препаратов (нередко бледные трепонемы обнаруживаются в тканях рубца через много лет после окончания терапии, в лимфатических узлах иногда удается обнаружить бледные трепонемы через 3-5 лет после противосифилитической терапии);
  • снижения защитных сил при различных заболеваниях и интоксикациях (эндокринопатии, алкоголизм, наркомания и др.);
  • общего истощения (приемом пищи бедной витаминами, белками, жирами).
Кроме этого, нередко выявляется ложная позитивация серологических реакций, не связанная с наличие у больных сифилиса и вызванная:
  • сопутствующими неспецифическими заболеваниями внутренних органов, нарушениями сердечнососудистой системы, ревматизмом, дисфункциями эндокринной и нервной систем, тяжелыми хроническими дерматозами, злокачественными новообразованиями;
  • поражениями нервной системы (тяжелые травмы, сотрясение головного мозга, психические травмы);
  • беременностью; хроническими интоксикациями алкоголем, никотином наркотиками; инфекционными болезнями (малярия, туберкулез, вирусный гепатит, дизентерия, сыпной, брюшной и возвратный тифы).
Указанные факторы могут оказывать влияние на иммунологическую реактивность организма как в период активного развития сифилитических проявлений, так и во время их регресса.

РПГА является одним из самых значимых анализов крови. Он позволяет выявить сифилис на любых стадиях, а также ряд других заболеваний. Этот анализ считается одним из самых точных методов выявления возбудителей сифилиса. В каких случаях пациента могут отправить на обследование и что значат результаты?

Что такое РПГА

РПГА является реакцией пассивной гемагглютинации, а если точнее - анализом для выявления этого процесса. В ходе исследования легко можно обнаружить антигены бледной трепонемы, именно этот микроорганизм провоцирует сифилис. Если человек полностью здоров, бледная трепонема, попав в организм, провоцирует ответную реакцию со стороны иммунной системы - выработку особых антител. По их наличию и определяется, есть заболевание или нет.

Все лабораторные исследования на сифилис делятся на два типа:

  • специфические;
  • неспецифические.

Всё зависит от того, какие именно антитела присутствуют в крови. РПГА относят к специфическому типу анализа для выявления возбудителей сифилиса. Впервые такие исследования стали проводить в 1965 году, РПГА оказался настолько точным анализом, что быстро стал наиболее популярным среди остальных методик диагностики сифилиса. Исследование позволяет выявить болезнь на любой стадии, включая латентную.

Однако в некоторых случаях РПГА может дать ложную положительную реакцию. Это может случиться из-за наличия некоторых вирусных заболеваний или при сниженном иммунитете после какой-либо болезни.

Насколько анализ достоверен?

Если человек заразился сифилисом, выявить болезнь можно не ранее чем через 2-4 недели - только на этом сроке начинают вырабатываться антитела к возбудителю. Иногда инкубационный период может длиться более месяца. РПГА, анализ крови, при ранней диагностике имеет точность 86%. Начальная стадия заболевания самая «неуловимая» для этого типа исследования. А вот на следующих стадиях сифилиса и у носителей латентного вируса, точность диагностики повышается до 99-100%.

Это позволяет применять РПГА как дополнительное исследование для подтверждения уже имеющегося диагноза или при положительных результатах других анализов (нетрепонемного типа). РПГА всё чаще используют для скрининга, но при положительных результатах так или иначе проводят ещё одно специфическое исследование.

Кто в зоне риска

Для проведения РПГА требуется направление от врача. Направить пациента на анализ могут в нескольких случаях:

  1. Если имеются видимые признаки болезни. Сюда относятся язвы на коже, увеличенные лимфоузлы, частичное облысение волосяного покрова и пр.
  2. Если у пациента был прямой контакт с больными сифилисом, для профилактики ему также необходимо пройти обследование.
  3. Все доноры, сдающие кровь, обязаны проверяться на сифилис перед процедурой.
  4. Для оформления санитарной книжки или ежегодных профосмотров на предприятиях также потребуется пройти необходимые обследования.
  5. Если скрининг дал положительный результат.
  6. На сифилис проверяют каждого, кого готовят к госпитализации в стационар.
  7. Обследование пациента перед любой операцией также требует прохождения обследования.

Врач может назначить РПГА не только при подозрении на сифилис или для планового осмотра, но и для диагностики следующих заболеваний:

  • дифтерии;
  • дизентерии;
  • сальмонеллеза.

Как проводится анализ

Для проведения РПГА берётся кровь из вены, полученный образец отправляют на исследование. Чтобы результаты были максимально точны и не искажены, важно правильно подготовиться к процедуре. Чтобы не пришлось сдавать кровь заново, необходимо руководствоваться следующими правилами перед визитом к специалисту:

  1. Кровь сдаётся ранним утром до 8-10 часов.
  2. Нельзя завтракать, пить чай или кофе, допустимо только употребление небольшого количества воды. Желательно, чтобы последний приём пищи был за 10-12 часов до анализа.
  3. Хотя бы за полчаса до обследования нельзя курить, но лучше всего сделать перерыв между сигаретами в 4-6 часов.
  4. В день анализа и минимум за сутки до него нельзя пить алкогольные напитки любой крепости.
  5. Если есть необходимость по графику принимать лекарства, об этом обязательно нужно сказать врачу, если нет возможности немного перенести это по времен.
  6. При плохом самочувствии или слабости нужно обязательно предупредить медсестру, которая забирает кровь для анализа, или врача.

Кровь из вены на РПГА

К подготовке важно относиться ответственно, поскольку от результатов анализа зависит многое, в особенности точная постановка диагноза.

Ошибки в диагностике и назначение неверного лечения могут привести к плачевным последствиям.

Когда ждать результатов

Чтобы РПГА анализ дал наконец положительную или отрицательную реакцию на сифилис, должно пройти определённое время. Положительная реакция может проявиться через месяц после заражения, однако на первичной стадии показатели титров одни из самых низких - менее 1:320. На вторичной стадии показатели увеличиваются, а вот при латентном сифилисе анализы будут такими же, как и в самом начале развития заболевания.

Когда точно определена стадия сифилиса, назначается лечение в виде курса препаратов. Но даже после излечения от заболевания, анализы РПГА могут давать положительные результаты на сифилис. Это случается в большинстве случаев, положительный анализ у людей, вылечившихся от сифилиса, может быть в течение всей оставшейся жизни.

Есть случаи, когда положительные реакции на сифилис вызваны совершенно иными причинами. Такие результаты анализа называют ложноположительными, чаще всего такие реакции бывают:

  • у беременных;
  • во время менструации;
  • если недавно была вакцинация;
  • если был инфаркт миокарда незадолго до обследования;
  • при инфекционных заболеваниях (оспа, грипп, ОРВИ, ВИЧ, гепатит (вирусный) и пр.);
  • при онкологии;
  • при ослаблении иммунитета;
  • у больных с патологиями внутренних органов.

Исследование РПГА для диагностики других инфекций

Реакция РПГА позволяет выявить не только сифилис, но и ряд других инфекционных заболеваний. Сдавать кровь понадобится, например, людям с подозрениями на острую кишечную инфекцию (сальмонеллез).

Болезнь провоцируют сальмонеллы, попадающие в организм человека. По мере развития сальмонеллеза постепенно разрушается структура ЖКТ, а также происходит сильная интоксикация. Основными симптомами кишечной инфекцией являются:

  • рвота;
  • диарея;
  • изменение запаха стула, а также появление в нём слизи или кровавых выделений;
  • боль в животе;
  • высокая температура;
  • озноб;
  • плохое самочувствие;
  • обезвоживание и пр.

Ещё одним заболеванием, для выявления которого можно применять РПГА, является корь. Она характеризуется поражениями слизистых глаза, ротовой полости и дыхательных путей. Кроме этого явными признаками болезни является сыпь на всём теле пациента, а также сильная интоксикация. Последняя сопровождается рвотой, нарушениями стула, нарушением водного баланса в организме и пр.

Исследование РПГА также может выявить столбняк, который является острой инфекцией.

Возбудитель этого заболевания легко проникает в организм через царапины, раны, порезы, ожоги и пр. Также можно заразиться столбняком, если в больницах или при косметических процедурах использовались нестерильные инструменты и материалы. Главными симптомами, по которым можно выявить столбняк, являются:

  • тонус мышц;
  • слабость;
  • раздражительность;
  • плохой аппетит;
  • апатия;
  • судороги в мышцах лица;
  • если столбняк следствие травмы, может ощущаться тянущая вокруг повреждённого участка тела;
  • затрудняется глотание воды и пищи.

Исследование РПГА также применяется для выявления коклюша на любой стадии. Это очень важно, поскольку на начальной стадии заболевания нет чётких симптомов, позволяющих его диагностировать. Подозрения на инфекцию чаще всего появляются уже на более поздних стадиях.

При коклюше может быть повышенная температура, однако точно так же она может оставаться в пределах нормы и не превышать стандартные 36,6. Позже у больного появляется кашель, приступы которого постепенно становятся всё чаще и сильнее.

Итак, реакция пассивной гемагглютинации является крайне эффективным методом диагностики сифилиса. Несмотря на то, что чаще всего РПГА используют для выявления антител бледной трепонемы, с помощью этого анализа можно установить наличие и других инфекций - кори, коклюша, сальмонеллеза и пр. Чтобы результаты исследования были максимально чёткими, важно правильно к ним готовиться и соблюдать все необходимые условия.

Сейчас для проведения РПГА пользуются стандартизированными тест-наборами.

В них есть все необходимое для анализов:

  • Флакон с эритроцитами, которые на поверхности содержат антигены бледной трепонемы штамма Nichols.
  • Такая же емкость, но уже с «чистыми» красными кровяными тельцами (нужны для контроля).
  • Буферный раствор для разведения сыворотки пациента (ниже расскажем, зачем это делают).
  • Сыворотка от человека, заведомо больного сифилисом, тоже используется для контроля (К+).
  • Сыворотка от заведомо здорового человека (К–).
  • Пластиковая планшетка с пронумерованными луночками для смешивания образцов и оценки результатов.

Каждый тест набор содержит запас реактивов для постановки определенного числа проб. Обычно – 100. Поэтому сыворотку иногда сохраняют, пока не наберется нужное число образцов для исследования.

Методика проведения анализа РПГА

Реакция пассивной гемагглютинации может предоставить два типа результатов:

  • Качественный. Дает ответ на вопрос, есть ли в исследуемом образце антитела к возбудителю.
  • Количественный. Позволяет оценить интенсивность синтеза иммуноглобулинов и таким образом отследить активность инфекции.

Как правило, сначала проводится качественная оценка, а положительные образцы отбираются для количественных исследований.

Алгоритм простого выявления инфицированности таков:

  • В лунки планшета вносятся одинаковые дозы исследуемых образцов. На одного пациента выделяется ряд из шести лунок.
  • В первые две капают его плазму, разведенную буфером 1:20.
  • Следующая пара служит для контроля, в нее помещают сыворотку К+. И еще две лунки для материала К–.
  • Затем вносят меченные антигеном эритроциты в первую лунку из каждой пары. Во вторую – эритроциты чистые.
  • Планшет некоторое время покачивают для тщательного перемешивания реактивов и оставляют в покое. Минимум – 45 минут. Можно и на всю ночь.

Результаты оцениваются визуально. Если реакция отрицательная, эритроциты оседают на дно сферического углубления лунки.

Это должно произойти в обеих лунках с образцами пациента и там, куда были добавлены чистые контрольные эритроциты тест-системы.

При положительном результате, эритроциты не собираются в одном месте, а равномерно распределены по всему дну лунки. Подобная картина должна быть там, где меченые стандартным антигеном эритроциты смешиваются с образцом больного и сывороткой К+. Таким образом проводится контроль реакции, что позволяет избежать ложных результатов.

Количественная оценка РПГА

Образцы с положительным результатом отбирают и несколько раз разводят буферным раствором (титруют). Перед каждым разведением, сыворотку капают в соответствующую лунку планшета и отмечают над ней степень суммарного разведения. Затем к образцам добавляют эритроциты с антигеном трепонемы и определяют, при каком титре еще отмечается положительный результат. Это – количественный анализ крови на сифилис РПГА, он показывает концентрацию антител к возбудителю.

Результаты оценивают так:

  • 4+ означает, что эритроциты выстилают дно лунки равномерным слоем. Появление складчатости края говорит о высоких концентрациях антител в исследуемом образце. Реакция положительная.
  • 3+ ставят, если круг четкий, но часть эритроцитов «стекает» к центру. Картина напоминает расправленный зонтик, расценивается как положительная реакция.

  • 2+ выглядит как широкое кольцо с тенденцией к просветлению в центре. Слабоположительная.
  • 1+ означает сомнительный результат. В лунке – узкое колечко. Требует повтора через 1-2 недели.
  • При отрицательном анализе, эритроциты формируют пуговку в центре лунки.

Есть, правда, серорезистентные случаи сифилиса, при которых болезни уже вроде бы нет, а антитела сохраняются длительное время. Поэтому РПГА иногда требует подтверждения другими методами.

При необходимости сдать РПГА и пройти любое обследование на сифилис, обращайтесь к грамотным венерологам.