Головна · Гастрит · Методи дослідження сказу. Сучасні методи лабораторної діагностики сказу собак. I. мікроскопічні дослідження

Методи дослідження сказу. Сучасні методи лабораторної діагностики сказу собак. I. мікроскопічні дослідження

Сказ - гостра інфекційна хвороба, що протікає з важким ураженням нервової системи, як правило, з летальним кінцем.

Сприйнятливі людина та всі теплокровні тварини. Сказ реєструється в різних країнах світу.

Характеристика збудника. Вірус відноситься до сімейства Rhabdoviridae, роду Lyssavirus. РНК-містить. Геном представлений єдиною односиірую лінійною молекулою мінус-РНК. Віріони вірусу складаються з нуклеокапсиду спіральної симетрії та ліпопротеїдної оболонки з глікопротеїновими булавоподібними виступами. Віріон кулеподібної форми, середній розмір його 180-175 нм.

Стійкість до фізико-хімічних впливів. Низькі температури консервують вірус. Для нього згубні високі температури (80-100 ° С), в матеріалі, що гниє, вірус може зберігатися до двох тижнів. Дезінфікуючі засоби (розчини формальдегіду, їдкого лугу, хлорного вапна) у звичайних концентраціях діють на вірус згубно.

Антигенна структура. Віріони вірусу сказу містять глікопротеїдний (зовнішній) та нуклеокапсидний (внутрішній) антигени. Глікопротеїдний антиген індукує утворення віруснейтралізуючих та антигемагглютинуючих антитіл і забезпечує розвиток імунітету у тварин, а нуклеокапсидний - комплементзв'язуючих і.

Вірус сказу має 4 серотипи (прототипи): вірус сказу, Лагос, Мокола, Дювенхейдж. Епізоотичні штами вірусу сказу в імунобіологічному відношенні споріднені, але розрізняються за вірулентністю. Усі виділені штами вірусу по вірулентності поділяють на 5 груп. Штами першої групи характеризуються високою, а п'ятої групи – низькою вірулентністю.

Спектр патогенності вірусу тісно пов'язаний із його екологією, яка має особливості. Так, необхідно розрізняти два основні та незалежні епізоотичні прояви лісовірусної інфекції:

1) епізоотії сказу, що підтримуються наземними тваринами (лисиці, вовки, єнотовидні собаки, шакали, мангусти, скунси, єноти-смужки та ін);

2) епізоотії хіроптерного походження, що підтримуються вампірами, комахоїдними та м'ясоїдними кажанами.

З 1960-х років сказ диких тварин став переважним. Основним резервуаром та джерелом інфекції виявилися лисиці та інші дикі тварини. Хвороба у них може протікати латентно, забезпечуючи персистенцію вірусу у природних умовах. Сказ собак при міських епізоотіях, як правило, закінчується їхньою загибеллю.

Антигенна активність. Тварини, імунізовані проти сказу, продукують віруснейтралізуючі, комплементзв'язувальні, преципітуючі, антигемагглютинуючі та літичні (руйнівні клітини, заражені вірусом, у присутності комплементу) антитіла.

Вірус має гемагглютинуючі властивості щодо еритроцитів гусей, курей, морських свинок, овець, людини (групи 0). Зазвичай реакцію гемаглютинації ставлять з еритроцитами гуски при 0-4 ° С, pH 6,2-6,4. Між інфекційною та гемагглютиніруюгцею активністю існує лінійна залежність.

Культивування вірусу. У лабораторних умовах вірус можна культивувати на лабораторних тваринах (мишатах, кроликах, хом'ячках, морських свинках та ін.) при інтрацеребральному методі бою. Вірус репродукується в первинних і культурах клітин, що перевиваються (нирках сирійського хом'ячка, ембріонах овець, телят, ВНК-21, клітинах невриноми Гассерова вузла щура та ін). У перших пасажах вірус розмножується повільно, не спричиняючи ЦПД. До вірусу сказу після попередньої адаптації сприйнятливі курячі ембріони.

Експериментальна інфекція. Легко відтворюється усім видах теплокровних тварин.

Клінічні ознаки. Тривалість інкубаційного періоду залежить від місця укусу, характеру рани, кількості та вірулентності вірусу, виду, віку та резистентності покусаної тварини, що потрапив у рану. Інкубаційний період триває від одного тижня до року і навіть довше. Клінічне прояв хвороби в основному однаково у всіх тварин, але найбільш типово воно у собак, у яких можна спостерігати як буйний, так і тихий (паралітичний) перебіг хвороби. У великої рогатої худоби сказ може протікати атипово (втрата апетиту, атонія рубця, параліч глотки, слинотеча). Стадії збудження може бути.

Патологоанатомічні зміни. Розкривати підозрілих щодо захворювання на сказ тварин у польових умовах заборонено.

У м'ясоїдних (переважно у собак) у шлунку можна виявити сторонні предмети.

Локалізація вірусу. Вірус сказу має виражену нейропробазію. Проникаючи доцентрово з периферії (місце укусу) по нервових стовбурах в центральну нервову систему, в організмі він поширюється відцентрово по периферичних нервах і потрапляє в різні органи, включаючи слинні залози.

В організмі вірус локалізується головним чином у центральній нервовій системі, а також у слинних залозах та слині. Доведено знаходження вірусу у деяких внутрішніх органах. З організму виділяється зі слиною, через легені, кишечник та із сечею.

Джерело інфекції- Хворі тварини. Вони передають вірус під час укусу. Можливе зараження при ослюненні пошкодженої шкіри. Плотоядні тварини можуть заражатися при поїданні головного та спинного мозку загиблих від сказу тварин. Доведено можливість зараження на сказ аерогенним шляхом (у місцях, де є кажани). До 1960-х років основним джерелом поширення сказу були собаки та кішки, пізніше лисиці, вовки, корсаки та інші дикі тварини.

Діагностика. Діагноз на сказ ставлять на підставі епізоотологічних, клінічних даних та результатів лабораторних досліджень, що мають вирішальне значення.

При роботі з хворими тваринами та інфекційним матеріалом необхідно суворо дотримуватись заходів особистої безпеки: одягати гумові рукавички, халати з нарукавниками, гумовий або поліетиленовий фартух, гумові чоботи, захисні окуляри, захисну маску на обличчя.

Лабораторна діагностика. Для дослідження на сказ спрямовують до лабораторії свіжі трупи дрібних тварин цілком, а від великих і середніх тварин - голову з двома першими шийними хребцями. Трупи дрібних тварин перед відправкою дослідження обробляють інсектицидами.

Патологічний матеріал упаковують у пластмасові мішки, вкладають у ящики, що щільно закриваються, з вологопоглинаючою прокладкою, просоченою дезінфектантом. Матеріал та супровідний лист, у якому вказують відправника та його адресу, вид тварини, анамнестичні дані та обґрунтування підозри у захворюванні тварини на сказ, дату та підпис лікаря, відправляють із нарочним.

Лабораторна діагностика включає: виявлення вірусного антигену в РІФ та РДП, тілець Бабеша-Негрі та біопробу на білих мишенятах.

РІФ. Для даної реакції біопромисловість випускає флуоресціюючий антирабічний γ-глобулін.

На знежирених предметних скла готують тонкі відбитки або мазки з різних відділів головного мозку лівої і правої сторони (аммонів ріг, кора півкуль, мозок і довгастий мозок). Готують щонайменше двох препаратів кожного відділу мозку. Можна також дослідити спинний мозок, підщелепні слинні залози. Для контролю роблять препарати з мозку здорової тварини (зазвичай білої миші).

Препарати висушують на повітрі, фіксують у охолодженому ацетоні (мінус 15-20 °С) від 4 до 12 год, висушують на повітрі, наносять специфічний флуоресцентний γ-глобулін, поміщають у вологу камеру при 37 °С на 25-30 хв. Потім ретельно промивають фізіологічним розчином або фосфатним буфером з pH 7,4, споліскують дистильованою водою, висушують на повітрі, наносять нефлуоресціюючу іммерсійну олію і переглядають під люмінесцентним мікроскопом. У препаратах, що містять антиген вірусу сказу, спостерігають різної величини і форми гранули, що флуорескують жовто-зеленим кольором, в нейронах, але частіше поза клітинами. У контролі подібного свічення не повинно бути, нервова тканина зазвичай світиться тьмяним сіруватим або зеленим кольором. Інтенсивність світіння оцінюють у хрестах. Негативним вважають результат за відсутності специфічної флуоресценції.

Матеріал від тварин, вакцинованих проти сказу, не можна досліджувати в РІФ 3 місяці після щеплення, так як може бути флуоресценція антигену вакцинного вірусу.

У РІФ не підлягають дослідженню тканини, консервовані гліцерином, формаліном, спиртом тощо, а також матеріал, що має ознаки навіть незначного загнивання.

РДП в агаровому гелі. Метод заснований на властивості антитіл та антигенів дифундувати в агаровому гелі та при зустрічі утворювати видимі візуально лінії преципітації (комплекс антиген + антитіло). Застосовують виявлення антигену у мозку тварин, полеглих від вуличного вірусу сказу, або за експериментальної інфекції (біопробу).

Реакцію ставлять на предметних стеклах, на які наливають 2,5-3 мл розплавленого 1,5% розчину агару.

Агаровий гель: агар Діфко - 15 г, натрію хлорид - 8,5 г, 1%-ний розчин метилового помаранчевого в 50%-му етиловому спирті - 10 мл, мертіолят - 0,01 г, дистильована вода - 1000 мл.

Після застигання в агарі роблять лунки трафаретом діаметром 4-5 мм, поміщеному під предметне скло з агаром. Агарові стовпчики виймають учнівським пером. Лунки в агарі заповнюють компонентами за схемою.

Від великих тварин досліджують усі відділи головного мозку (лівої та правої сторони), від середніх (щури, хом'яки та ін.) – якісь три відділи мозку, у мишей – весь мозок. За допомогою пінцету з мозку готують пастоподібну масу, яку поміщають у відповідні лунки.

Контролі з позитивним та негативним антигенами ставлять на окремому склі за тим самим трафаретом.

Після заповнення лунок компонентами препарати поміщають у вологу камеру і ставлять термостат при 37 °С на 6 год, потім залишають при кімнатній температурі на 18 год. Облік результатів ведуть протягом 48 год.

Реакцію вважають позитивною з появою між лунками, що містять суспензію мозку та антирабічний γ-глобулін, однією або двох-трьох ліній преципітації будь-якої інтенсивності.

Бактеріальна контамінація та загнивання мозку не перешкоджають використанню його для РДП. Матеріал, консервований гліцерином, формаліном та іншими засобами для РДП непридатний.

Виявлення тілець Бабеша-Негрі. На предметних стеклах роблять тонкі мазки або відбитки з усіх відділів головного мозку (як для РІФ), не менше двох препаратів з кожного відділу мозку, і фарбують по одному з методів (Селлерс, Муромцева, Манну, Ленц і т. д.).

Приклад забарвлення по Селлерсу: на свіжий, невисохлий препарат наносять барвник (одна частина 1% розчину основного фуксину, змішана з двома частинами 1% метилового синього), покриваючи їм весь препарат, витримують 10-30 с і змивають фосфатним буфером ( pH 7,0-7,5), висушують у вертикальному положенні при кімнатній температурі (в затемненому місці) і переглядають під мікроскопом з масляною іммерсією.

Позитивним результатом вважають наявність тілець Бабеша-Негрі - чітко окреслених овальних або довгастих гранульованих утворень рожево-червоного кольору, розташованих у цитоплазмі клітин або поза ними.

Цей метод має діагностичне значення лише за виявленні типових специфічних включень.

Біопроба. Вона ефективніша порівняно з усіма зазначеними вище методами. Її ставлять при отриманні негативних результатів попередніми методами та у сумнівних випадках.

Для біопроби відбирають білих мишей масою 16-20 г. Нервову тканину з усіх відділів головного мозку розтирають у ступці зі стерильним піском, додають фізіологічний розчин до отримання 10% суспензії, відстоюють 30-40 хв і використовують надосадову рідину для зараження мишенят. При підозрі на бактеріальне забруднення додають на 1 мл суспензії по 500 ОД пеніциліну та стрептоміцину та витримують 30-40 хв при кімнатній температурі.

На одну біопробу заражають 10 - 12 мишенят: половину інтрацеребрально по 0,03 мл, половину підшкірно в ділянку носика або у верхню губу по 0,1-0,2 мл.

Заражених мишенят поміщають у скляні банки (краще акваріуми) і спостерігають їх протягом 30 днів, ведучи щоденну реєстрацію. Загибель мишей протягом 48 год вважають неспецифічним і не враховують в оцінці результатів. За наявності вірусу сказу в патологічному матеріалі з 7-10-го дня після зараження у мишей спостерігають такі симптоми: скуйовдженість вовни, своєрідну горбатість спини, порушення координації рухів, параліч задніх, потім передніх кінцівок і загибель. У загиблих мишей головний мозок досліджують у РІФ, на виявлення тілець Бабеша-Негрі і ставлять РДП.

Біопробу на сказ вважають позитивною, якщо в препаратах із мозку заражених мишенят виявляють тільця Бабеша-Негрі або виявляють антиген методами РІФ або РДП. Негативний діагноз – відсутність загибелі мишенят протягом 30 днів.

Рекомендують для ранньої діагностики методом біопроби (особливо це важливо, коли досліджувана тварина покусала людину) використовувати для зараження не 10-12, а 20-30 мишенят, і з третього дня після зараження щодня забивати по 1-2 мишеня для дослідження їх головного мозку РІФ. Це дозволяє (у позитивних випадках) скоротити термін дослідження кілька днів.

У лабораторній практиці іноді ставлять метод так званої специфічної біопроби. Сутність його в тому, що миші хворіють при зараженні мозковою тканиною хворих на сказ тварин і не хворіють, якщо цю тканину попередньо обробити (10 хв при 37 ° С) на антирабічну сироватку.

Деякі дослідники рекомендують проводити прижиттєву діагностику сказу методом імунофлуоресцентного дослідженнявідбитків рогівки підозрюваних у захворюванні на сказ тварин, але ефективність цього методу невисока.

Зазвичай у лабораторії проводять дослідження в наступній послідовності: з головного мозку роблять мазки-відбитки для РІФ та виявлення тілець Бабеша-Негрі, ставлять РДП, при отриманні негативних результатів роблять біопробу.

При висококваліфікованому виконанні РІФ отримують 99-100% збігу з біопробою. Тільця Бабеша-Негрі виявляють лише у 65-85 % випадків сказу, у РДП - від 45 до 70 %.

Специфічна профілактика. В даний час для профілактики сказу застосовують інактивовані та живі вакцини. Умовно вакцини можна розділити:

на вакцини першого покоління, які готують із мозку тварин, інфікованих фіксованим вірусом сказу;

вакцини другого покоління, які готують із штамів вірусу сказу, адаптованих до культури клітин;

вакцини третього покоління, які одержують за допомогою генно-інженерних методів.

За кордоном розробили і в деяких країнах успішно застосовують рекомбінантну вакцину, яка містить рекомбінантний вірус віспи, що несе ген основного глікопротеїну оболонки вірусу сказу.

В даний час розпочато розробку та показано можливість застосування ДНК-вакцин для профілактики сказу. У Росії та СНД широко застосовують інактивовану вакцину зі штаму Щелково-51, яку готують з використанням культури клітин ВНК-21.

Досягнення науки з оральної вакцинації лисиць у природних умовах природи становлять значну віху у боротьбі з природними осередками інфекції.

Якщо ви знайшли помилку, будь ласка, виділіть фрагмент тексту та натисніть Ctrl+Enter.

Сказ(Rabies) – інфекційне захворювання, небезпечне для тварин та людини. Це захворювання зустрічається у всіх країнах світу. Характеризується 100% летальним кінцем.

Збудник- РНК-вірус, що відноситься до сімейства Рабдовірусів. Цей вірус має тропність до нервової тканини. У найбільших титрах виявляється у головному мозку хворих тварин. Крім того, знаходять віруси і в спинному мозку, слинних та слізних залозах.
Розрізняють:

  1. "дикий" вірус, який циркулює в природних умовах і характеризується високою патогенністю для людини та тварин.
  2. І «фіксований», отриманий у лабораторних умовах, не є патогенним для тварин і людини при екстраневральному введенні.

Вірус сказу не стійкий до високих температур: при 60С інактивується через 10 хвилин, при 100С - майже миттєво. Але в замороженому мозку може зберігати життєздатність до кількох місяців. Також зберігається кілька місяців у тканинах, що гниють. Стійкий до дії розчинів йоду. Але швидко інактивується дезрозчинами на основі формаліну, хлораміну та лугу.

Епізоотологічні дані.

До вірусу сказу сприйнятливі всі теплокровні. Найбільшу чутливість мають дикі собачі (такі як: лисиці, песці, вовки, єнотовидний собака, шакали), куні, гризуни кішки. Менш сприйнятливі птахи.

У дикій природі резервуарами вірусу сказу є хижі тварини та кажани, у місті - бродячі собаки.
Джерелом зараження є хворі тварини, у яких вірус виділяється зі слиною. Наявність вірусу в слині спостерігається вже за 8-10 днів до появи ознак хвороби. Зараження відбувається при укусі, при попаданні слини на слизові оболонки або пошкоджені ділянки шкіри.

Патогенез .

Після проникнення в організм вірус починає розмножуватися у місці застосування. І через 24 години починає проникати у нервову тканину. У нервах він просувається у напрямку спинного та головного мозку зі швидкістю 7 см/день. Діставшись до мозку вірус починає посилено розмножуватися, потім по нервах вірус потрапляє в усі органи і насамперед у слинні залози та очі. Інкубаційний період (від моменту зараження до появи клінічних ознак) становить середньому 14 – 60 днів, іноді може досягати 6-12 місяців.
Клінічні ознаки

Розрізняють 3 види перебігу хвороби.

  1. Класичне триетапне протягом або буйна форма. Спочатку відзначається зміна поведінки тварини (1 етап), вона стає дуже ласкавою або навпаки полохливою, нетовариською. Цей етап може тривати від кількох годин до 4 днів. Потім настає наступний етап – збудження (2 етап), який триває 1-4 дні. Тварини стають агресивними, схильні до блукаючим пересуванням та нападом на тварин та людей. Розвивається анорексія, неспокій, слинотеча. І за 3-4 дні до смерті розвиваються паралітична, або депресивна стадія, що характеризується прогресуючими паралічами.
  2. Паралітична, чи тиха, форма.Характеризується розвитком паралічів без попередньої стадії збудження. При цій формі відзначають слинотечу, відвисання нижньої щелепи, утруднене ковтання, анорексію. Потім розвивається параліч м'язів тулуба та кінцівок. Смерть тварини настає через 3-4 дні.
  3. «Атипове сказ».Це хронічний субклінічний (без розвитку симптомів) перебіг хвороби, який може тривати до 3 місяців.

Діагноз.

Попередній діагноз ставлять на підставі анамнезу та клінічних симптомів. При підозрі на сказ після смерті тварини до лабораторії направляють труп тварини. При неможливості цього – голову чи головний мозок. При взятті матеріалу необхідно дотримуватися суворих запобіжних заходів!
Лабораторна діагностика сказу включає кілька методів дослідження.

  1. Виявлення тілець Бабеша-Негрі. Для встановлення діагнозу на сказ у лабораторії проводять гістологічне дослідження головного мозку померлої тварини. Відзначають наявність рабичних вузликів у структурах дна четвертого шлуночка мозку та наявність у головному мозку тілець Бабеша-Негрі (цитоплазматичні еозинофільні включення, що складається з частинок вірусу сказу). Їх можна виявити в гіпокампі, кіркових та стовбурових структурах мозку, у мозочку та дорсальних гангліях спинного мозку та епітелії рогівки ока. Однак якщо тільця Бабеша-Негрі не виявляються, сказ не виключається.
  2. Виявлення антигену методом флюоресціюючих антитіл (МФА) або методом імунофлюоресцентного аналізу (ІФА). Крім цих реакцій нині йде розробка нового методу діагностики полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР).
  3. Біологічна проба із зараженням новонароджених мишенят вірусом із суспензії головного мозку, слинних залоз.

Відповідно до законодавства РФ, у випадках покусів людей собаками або іншими тваринами (крім явно хворих на сказ) постраждалі повинні негайно звернутися до медичних закладів. А тварини, які їх покусали, мають бути доставлені до найближчої державної ветеринарної установи для огляду фахівцями та карантину протягом 10 днів.

Для профілактики поширення сказу передбачено щорічну обов'язкову вакцинацію собак і кішок антирабічними вакцинами.

В даний час для ввезення тварин до ряду країн потрібний документ, що підтверджує кількість валідних антитіл до вірусу сказу. Для ефективного захисту від сказу мінімальний рівень віруснейтралізуючих антитіл у крові повинен становити не менше 0,5 МО/мл. Даний вид дослідження не є діагностичним і призначений лише визначення напруженості імунітету проти сказу.
У Москві здати кров визначення титру антитіл до вірусу сказу можна у Центрі Молекулярної Діагностики, розташованому на Звенигородському шосе, д.5. ЦДМ отримав міжнародну акредитацію на проведення даного тесту та видає Міжнародні сертифікати, дійсні протягом усього життя тварини за дотримання термінів ревакцинації.

Визначення титрів антитіл проводять не раніше як через 30 днів після вакцинації. Тому якщо Ви плануєте виїжджати зі своїми вихованцями до країн ЄС чи інших країн, то необхідно заздалегідь подбати про вакцинацію та здачу крові на цей тест (результати видаються через 7-14 днів).

Лікар-лаборант ветеринарної лабораторії
"БіоВетЛаб" Лазарєва Н.В.

Викликане вірусом сказу. При цьому як для самого вихованця, але його оточення (власника та інших членів сім'ї). Вірус викликає запалення головного мозку у людини та тварин. Особливо сприйнятливі до захворювання лисиці, вовки, кішки, велика і дрібна рогата худоба, собаки, вівці, кози, коні та ін. Домашні тварини та людина заражаються при укусі хворої на сказ твариниабо від попадання слини на пошкоджену ділянку шкіри, слизові оболонки чи очі. Слина може стати заразною за 10 діб до появи ознак сказу.
В даний час існують описи інших шляхів передачі: повітряно-краплинний спосіб (аліментарний - через їжу та воду) та трансплацентарний спосіб (через плаценту в період вагітності).
Вірус, поширюючись нервовими шляхами, досягає слинних залоз і нервових клітин кори головного мозку і, вражаючи їх, викликає важкі незворотні порушення.

Захворювання на сказ тваринреєструють на всій земній кулі (винятком є ​​лише Японія, Австралія та Великобританія).

На жаль, Росія не входить до списку винятків. Москва та Московська область також є сприятливим середовищем для виникнення захворювань на сказ у домашніх та диких тварин.
Вірус нестійкий у зовнішньому середовищі – гине при нагріванні до 56 градусів за 15 хвилин, а при кип'ятінні за 2 хвилини. Вірус сказу також чутливий до ультрафіолетового та прямого сонячного проміння. Однак, вірус сказу стійкий до низьких температур та антибіотиків.

Інкубаційний період під час зараження на сказ може тривати від кількох діб до кількох місяців (в середньому 3-6 тижнів). Сказ у людини може протікати навіть до року. Прояву клінічної картини передує прихований (інкубаційний) період. Тварина тим часом також небезпечна.

Симптоми та ознаки сказу у тварин

Ознаки захворювання на сказможуть з'явитися у тварин через кілька тижнів після укусу скаженої тварини або контакту з вірусом. Звертайте увагу на поведінку вихованця. Будь-яка неадекватна та неприродна поведінка тварини повинна вас насторожити і бути більш спостережливими. У деяких випадках може збільшитися температура.
Як відомо, дикі тварини бояться людини. У разі захворювання дикі звірі можуть наближатися до будинку і навіть нападати на худобу та людей. Тому, якщо ваш вихованець почав поводитися агресивно або надмірно ласкаво, то це серйозний дзвіночок, щоб не ризикувати і викликати ветеринарного фахівця для обстеження та діагностики на ймовірність захворювання на сказ.

Часто неспецифічна симптоматика і ненадійна прижиттєва діагностика повинні унеможливлювати варіанти «на авось», т.к. мова йде про летальні наслідки не тільки для вихованця, але і з великою ймовірністю для власника.

Діагностика сказу у тварин

Діагноз ставиться на основі комплексних даних та лабораторних аналізів. 100% надійного способу прижиттєвої діагностики сказу у тварин, що застосовуються у ветеринарній практиці, на сьогоднішній день не існує.
Прижиттєво вірусний антиген може бути виявлений за допомогою МФА у відбитках рогівки хворих на сказ тварин. А також вірус може бути виділений з деяких тканин і рідин організму. Але все ж таки негативний результат даного методу не виключає все ж таки можливість зараження сказом.
При посмертної діагностики сказу тварин результати точніше, т.к. використовуються інші методи. Наприклад, одним із точних патологоанатомічних діагнозів при дослідженні головного мозку є виявлення специфічних включень (телець Бабеша-Негрі). Також найважливішим методом залишається біопроб - інтрацеребральне зараження.
Перешкодою для діагностування сказу у тварин є наявність різних форм перебігу захворювання. Ветеринарні лікарі умовно поділили прояв сказу на три форми (деякі форми мають різні стадії).


Форми розвитку та перебігу сказу у тварин (клінічна картина):

Буйна форма сказу:
1 Стадія. Тварина уникає людей, ховається у темному та затишному місці. Може проявлятися атипова поведінка – підвищена лагідність чи пасивна агресія. При цьому можливий прояв сверблячки на місці укусу. Тварина може розлизувати чи викушувати місце проникнення вірусу (завданої травми). Апетит знижується. З'являються блювання, слинотеча та галюцинації. Важко акт ковтання.
2 Стадія. З'являється яскраво виражена агресія. Наростає занепокоєння, з'являється схильність до поїдання неїстівних предметів. Неусвідомлене прагнення руху. Тварина може кусати своє тіло (самотравматизм), є навколишні предмети, амуніцію, землю. Напад інших тварин і навіть господаря. Вихованець не може ковтати воду. Через це рясне та неконтрольоване слиновиділення. Прийом їжі неможливий. Прояв судомних нападів. Настає часткова паралізація м'язів особи та груп кінцівок. Внаслідок чого розвивається косоокість, нижня щелепа відвисає, мова випадає з пащі.
3 Стадія (Термінальна - паралітична). Депресивний стан. Сильне виснаження організму, розвиток паралічу. Вихованець майже постійно лежить і впадає в коматозний стан і кому. Смерть настає внаслідок зупинки дихання і натомість паралічу дихальної мускулатури.

Тиха форма сказу:
Тиха форма характеризується розвитком паралічу, слинотечею, нездатністю приймати їжу. Через 2 - 4 дні вихованець гине. Фаза збудження (шаленства) короткочасна або відсутня.

Атипова форма сказу:
Атипова форма (складна діагностується). Можлива поява діареї чи атонії кишечника. Можливе короткочасне покращення стану з наступними прогресуючими неврологічними симптомами. В результаті вихованець гине. Ця стадія перебігу сказу може тривати до 3-х місяців і більше.

У великої рогатої худобипревалює тиха форма. Порушення у разі виражено слабко, відзначають хрипке мукання, слинотеча, хитка хода, швидко розвиваються паралічі кінцівок. Нерідко атипова течія – відмова від корму, атонія передшлунків, часті позиви на дефекацію, напади судом, потім розвиваються паралічі. При буйній формі в момент нападу тварини рвуться з прив'язі, ревуть, риють землю, кидаються на стіни, нападають на інших тварин свого вигляду, особливо агресивні щодо собак.
У овець та кізхвороба протікає майже так само, як у великої рогатої худоби, але паралічі розвиваються швидше (на другу добу).
У коней та свинейпереважає буйна форма.

Профілактика сказу у тварин

Найдієвішим та найефективнішим способом профілактики сказу тваринє вакцинація. За законом РФ щорічна вакцинація обов'язкова всім домашніх і сільськогосподарських тварин. Сьогодні є великий вибір вакцин від сказу у тварин як імпортних, так і вітчизняних виробників. Сучасні вакцини забезпечують формування імунітету протягом трьох років. Щорічна вакцинація від сказу тварин не становить небезпеки для здорового вихованця.

Сказ - це вкрай небезпечне вірусне захворювання, що характеризується важким ураженням головного та спинного мозку. Воно часто закінчується летальним кінцем.

Сказ зустрічається у всіх ссавців і передається з біологічними рідинами, в основному зі слиною. Людина, як правило, заражається нею в результаті укусу інфікованої тварини, найчастіше собаки, кішки, кролика, тхора, лисиці, вовка, єнота, кажана та ін.

На початковому етапі захворювання проявляється посиленим слиновиділенням і острахом води, а також пригніченим станом, який змінюється нападами агресії та збудження.

Людям, які входять до групи ризику розвитку сказу, необхідно проходити вакцинацію.

На жаль, поява симптомів захворювання неминуче закінчується летальним кінцем, отже лікування передбачає лише полегшення стану хворого.

Синоніми росіяни

Рабієс, гідрофобія, водобоязнь.

Синоніми англійські

Rabies, Hydrophobia, Canine madness, Lyssa, Madnessan.

Симптоми

Зазвичай сказ не викликає жодних симптомів аж до останньої стадії захворювання, коли лікування вже неможливе. Інкубаційний період (від зараження до появи симптомів) становить від 7 днів до 1 року, середньому 20-90 днів. Ознаки захворювання часто з'являються за кілька днів до смерті хворого:

  • перед появою основних симптомів на місці укусу може виникати припухлість, почервоніння, свербіж,
  • лихоманка,
  • головний біль, нездужання,
  • втрата апетиту, нудота, блювання, пронос,
  • занепокоєння, порушення сну,
  • депресія,
  • підвищена чутливість до слухових, зорових подразників,
  • пригнічений стан свідомості, тривожність, апатія змінюються нападами збудження, занепокоєння, агресії. Приступи збудження при цьому супроводжуються почастішанням дихання та серцебиття,
  • розлади дихання та ковтання,
  • гідрофобія - страх води (при розмові про неї або при спробі попити хворий відчуває жах, у нього виникають хворобливі спазми глотки і гортані),
  • надмірне слиновиділення,
  • галюцинації,
  • судоми,
  • частковий параліч.

Загальна інформація про захворювання

Сказ – це небезпечне вірусне захворювання, яке характеризується важким ураженням центральної нервової системи (головного та спинного мозку). На початковому етапі воно протікає безсимптомно, симптоми з'являються на пізній стадії, коли лікування вже неможливе.

Поширеність сказу залежить від ступеня вакцинованості свійських тварин. Найбільш поширене воно у сільській місцевості і частіше виникає у літній період.

Сказ може вражати всіх ссавців і передається з біологічними рідинами, переважно зі слиною. У людини зараження сказом, як правило, відбувається в результаті укусу зараженим тваринам, попадання слини зараженої тварини на пошкоджену шкіру, слизову оболонку рота, носа, очей. Значно рідше сказ передається при вживанні інфікованого м'яса. Від людини до людини захворювання не переходить, дуже рідко може траплятися зараження через пересадку органів від інфікованих донорів.

Найчастіше людина заражається від свійських тварин - від собак, кішок, кроликів, коней, тхорів, рідше - від диких - лисиць, єнотовидних собак, вовків, єнотів, кажанів та ін. Дикі тварини, у свою чергу, заражають сказом домашніх.

Після того як вірус потрапляє в організм через шкіру або слизову оболонку, він по нервових волокнах досягає спинного та головного мозку, де фіксується та починає ділитися. Виникає енцефаліт – запалення мозку. Це призводить до підвищення рефлекторної збудливості та розвитку паралічів. Потім вірус поширюється нервовими волокнами у зворотному напрямку, потрапляючи в печінку, нирки, надниркові залози, шкіру, серце, слинні залози, скелет, викликаючи порушення діяльності нервової системи та порушення функцій різних органів.

Швидкість поширення вірусу залежить від розташування укусу (при укусах голови, рук вона буде високою), його глибини, кількості збудників, що потрапили в рану, від активності мікроорганізмів, від імунного статусу інфікованої людини.

Інкубаційний період захворювання в середньому становить 20-90 днів, проте може змінюватись від тижня до одного року. З появою симптомів летальний кінець, зазвичай, неминучий.

Смерть зазвичай настає внаслідок ураження дихального центру, що спричиняє зупинку дихання.

Хто у групі ризику?

  • Які зазнали укусів домашніх чи диких тварин.
  • Жителі сільської місцевості, що тримають будинки тварин, не вакцинованих від сказу.
  • Мандрівні країнами, що розвиваються (по Африці, Південно-Східній Азії).
  • Виїжджають на природу і контактують з дикими тваринами (лисицями, єнотами, кажанами та ін.)
  • Мисливці, звіролови.
  • Службовці зоопарків, розплідників, притулків для тварин.
  • Ветеринари.
  • Які працюють з вірусом сказу в лабораторії.

Діагностика

Діагноз "сказ" передбачається за наявності симптомів захворювання після укусу тварини і підтверджується дослідженням зразка шкіри із потилиці, виділенням вірусу зі слини, слізної та спинномозкової рідини.

Лабораторні дослідження

  • Загальний аналіз крові (без лейкоцитарної формули та ШОЕ). Рівень лейкоцитів може бути підвищений.
  • Загальний аналіз сечі . При сказі може спостерігатися значне збільшення числа лейкоцитів у сечі за відсутності бактеріального запалення.
  • Дослідження крові, спрямоване визначення антитіл до збудника сказу. У ході аналізу за допомогою спеціального імунофлюоресцентного фарбування виявляється наявність у крові молекул, що виробляються імунною системою у відповідь на потрапляння в організм вірусу сказу. Діагноз підтверджується при значному (4 та більше разів) підвищенні кількості (титру) антитіл до вірусу сказу у хворих, які не піддавалися вакцинації.
  • Визначення збудника сказу в біологічних рідинах та тканинах організму.
    • Дослідження біоптатів (фрагментів тканин) шкіри потилиці, відбитків рогівки. В отриманий матеріал додаються мічені антитіла (молекули, що специфічно зв'язуються з молекулою вірусу сказу). Під впливом ультрафіолетового випромінювання комплекс з вірусів, "склеєних" з антитілами, дає характерне зелене свічення, що говорить про присутність вірусу сказу у взятому матеріалі. Цей аналіз є найбільш достовірним протягом першого тижня захворювання.
    • Дослідження генетичного матеріалу вірусу методом полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Може використовуватися слина, кров, спинномозкова рідина, також уражені тканини. Достовірність результатів наближається до 100%.
    • Дослідження тканин мозку під час електронної мікроскопії. Проводиться взяття ділянки тканини мозку (біопсія), яка потім піддається спеціальному фарбуванню та вивчається під електронним мікроскопом, який дозволяє досягти дуже високого ступеня збільшення. При цьому в уражених вірусом сказу клітинах нервової тканини виділяються спеціальні включення або виявляється сам вірус.

Інші методи дослідження

  • Електроенцефалографія (ЕЕГ) – це метод, який оцінює електричні потенціали головного мозку.

Лікування

Специфічного лікування сказу немає. Як правило, захворювання невиліковне і призводить до летального результату.

При укусі дикої тварини проводиться промивання, ретельний огляд предметів сторонніх тіл (наприклад, зламаних зубів) та хірургічна обробка рани. Потім терміново вводять імуноглобуліни – спеціальні клітини імунної системи. Далі протягом двох тижнів проводиться вакцинація пацієнта (загалом застосовується 5 вакцин). Тільки цей спосіб дозволяє запобігти захворюванню.

Після укусу за твариною необхідно спостерігати протягом приблизно 10 днів і при появі симптомів сказу терміново звернутися до лікаря для вжиття заходів щодо імунізації пацієнта. Джерело сказу – хвора тварина – необхідно ізолювати.

Лікування сказу спрямовано полегшення його симптомів – зняття судом, зменшення болю. Для цього застосовуються, відповідно, протисудомні, знеболювальні, заспокійливі лікарські препарати.

Для зменшення контакту з потенційними подразниками хворий поміщається до спеціальної палати.

Заповнюються втрати рідини, мінеральних речовин; проводиться штучна вентиляція легень.

Профілактика

  • Людям, які входять до групи ризику розвитку сказу, слід обов'язково пройти вакцинацію.
  • Після укусу дикої тварини необхідно ретельно промити рану водою з милом і терміново звернутися до лікаря, щоб пройти курс імунізації та вакцинації проти сказу.
  • Профілактична вакцинація свійських тварин.
  • Домашніх тварин слід тримати вдома та контролювати їх під час перебування на вулиці. Для цього можуть застосовуватися клітини та закриті загони. Це допоможе уникнути зараження свійських тварин від диких. Слід приділити особливу увагу кроликам, морським свинкам, хом'якам та іншим дрібним вихованцям, оскільки вони не можуть бути вакциновані проти сказу. Нерідко домашня тварина заражається за містом, де має можливість контактувати з дикими, наприклад коти, собаки можуть тікати в ліс і контактувати там з інфікованими гризунами, лисицями.
  • Слід дотримуватись правил спілкування при зустрічі з бродячими тваринами – не чіпати їх, не гладити, щоб уникнути укусу.
  • Необхідно уникати контакту з дикими тваринами (наприклад, лисицями, єнотами). Здорові дикі тварини самі уникають людей, тому звір, який не боїться людей і не намагається втекти, має викликати підозру.
  • Приводом для звернення до лікаря може стати і укус домашньої тварини, наприклад, якщо ви не знаєте, чи може бути вона заражена сказом, і тим більше якщо тварина протягом декількох днів після укусу загинула.
  • Загальний аналіз крові
  • Загальний аналіз сечі

Література

  • Dan L. Longo, Dennis L. Kasper, J. Larry Jameson, Anthony S. Fauci, Harrison's principles of internal medicine (18th ed.).
  • Manning SE, Rupprecht CE, Fishbein D, et al. Human rabies prevention--United States, 2008: recommendations of Advisory Committee on Immunization Practices. MMWR Recomm Rep. May 23 2008;57:1-28.
  • Hemachudha T. Human rabies: клінічні аспекти, pathogenesis, і потенційна терапія. Curr Top Microbiol Immunol. 1994; 187: 121-43.
  • Gerald L. Mandell. Mandell, Douglas, і Bennett's Principles and Practice of Infectious Diseases: Експерт Consult Premium Edition. Churchill Livingstone, 2009.


ЕКСПРЕС-ДІАГНОСТИКА ШАЛУ

Методи виявлення антигенів. При сказі для експрес-діагностики можна використовувати методи флуоресціюючих антитіл (МФА), реакції преципітації (РП) в агаровому гелі, методи імуноферментного аналізу (ІФА), полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Для прижиттєвої діагностики сказу в людини потрібно кілька тестів.

Визначення антитіл до антигенів вірусу сказу. Виявлення антитіл у сироватці крові або в цереброспінальній рідині – важливий метод діагностики. Серологічне дослідження рабієс-специфічних антитіл проводиться в сироватці крові для визначення перед- та постекспозиційної вакцинації та визначення часу бустерної імунізації з метою підвищення імунної відповіді.

Виділення вірусу. Для виділення та ідентифікації вірусу використовують метод біопроби на білих мишах. Досліджуваний матеріал суспендують у фізіологічному розчині, що містить антибіотики та ембріональну сироватку великої рогатої худоби. Суспензія вводиться інтрацеребрально білим мишам масою 5-6 г. Для доказу розвитку інфекції за мишами щодня спостерігають до 30-го дня після інокуляції. Миші, у яких цей період розвивається захворювання, негайно піддаються евтаназії, і тканини мозку досліджуються методом прямої МФА.

Перевага даного підходу полягає у можливості визначити малі кількості вірусу сказу у матеріалі. Недолік методу – необхідність багатоденного (7–18 діб) очікування між інокуляцією та проявом перших ознак захворювання. Для скорочення інкубаційного періоду застосовують мишей-сусунків. Для експрес-діагностики можна використовувати мишей у віці менше 3 днів: у мишей, забитих через 3 дні, виявляється антиген вірусу в мозку, який можна виявити методом МФА.

Такий метод виділення вірусу практикується в якості підтверджуючого діагностичного тесту при негативних результатах виявлення антигену і тілець Бабеша - Негрі і в разі укусу людини підозрілим на сказ тваринам. Він забезпечує належну чутливість та специфічність, тобто розцінюється на рівні діагностичної значущості методу прямої імунофлуоресценції. Крім того, цей метод є основним для ідентифікації варіантів вірусу і є перспективним для розробки діагностичних реагентів.

Виділення та ідентифікація вірусу на культурі клітин. Основним недоліком виділення вірусу під час інфікування лабораторних тварин є тривалість методу. Уникнути цього можна під час використання культур клітин. Зазвичай цих цілей використовують культуру клітин нейробластомы мишей, якщо потрібно досліджувати тканини мозку. Мозок суспендують в культуральному поживному середовищі, наносять суспензію на моношар культури клітин і інкубують від одного до декількох днів.

Чутливість даної культури до вірусу можна підвищити обробкою її ДЕАЕ декстраном. Моношар клітин потім відмивають, фіксують на холоді ацетоном або сумішшю формаліну з метанолом і досліджують методом імунофлюоресценції. Якщо тварина була інфікована вірусом сказу, то монослое культури клітин виявляються цитоплазматичні включення антигену вірусу сказу.

Показано, що на клітинах мишачої нейробластоми лінії Na C1 300 у поєднанні з МФА антиген вірусу сказу можна виявити через 2 дні. Чутливість методу можна порівняти з методом ізоляції вірусу на мишах.

Хоча вірус сказу має облігатну нейропатогенність in vivo, він здатний інфікувати широке коло клітин-господарів in vitro, що можна використовувати для дослідження інших тканин та органів на наявність вірусу сказу. Встановлено, що вірус сказу розмножується у клітинах ВНК-21 і Vero, у первинних клітинах курячих ембріонів чи нирок хом'яка. Показано, що адсорбція вірусу та впровадження його у клітину відбуваються протягом 7 годин. Через 24–48 годин усередині клітини утворюються нові вірусні частки, через 72 години відбувається брунькування їх із клітинної оболонки в міжклітинний простір.


Методи дослідження

Для експрес-діагностики сказуможуть бути використані:

а) метод БФА- для виявлення антигену вірусу сказу у відбитках рогівки або заднього відділу шиї хворого, що містить цибулини волосся;
б) метод ПЛР- для виявлення РНК вірусу в біоптатах тканин, слині, спинномозкової або слізної рідини;
в) метод ІФА- для виявлення специфічних антитіл (антигену) у хворих з типовим або атиповим перебігом.
г) метод біопроби- для виділення вірусу на ранніх етапах захворювання або виявлення антитіл у крові або спинномозкової рідини на пізніх стадіях захворювання. Для експрес-діагностики використовується комплексний метод (біопробу + МФА), що полягає в зараженні досліджуваним матеріалом 2-денних новонароджених мишей та дослідження їх мозку на 3-4 добу в МФА.

Вибір методів прижиттєвої діагностики значною мірою залежить від стадії хвороби: метод, заснований на виявленні антигенів, як правило, має високу чутливість наприкінці інкубаційного періоду, протягом перших кількох днів захворювання, тоді як віруснейтралізуючі антитіла зазвичай з'являються у спинномозковій рідині та сироватці. крові після 7-10 днів з початку хвороби.

Реакція імунофлюоресценції. Метод заснований на використанні антитіл, пов'язаних з барвником, наприклад, флюоресцеїнізотіоціанатом. РІФ широко застосовується для виявлення вірусних антигенів у матеріалі хворих та для швидкої діагностики.

Метод має найбільш високий ступінь чутливості, він покладено в основу експрес-діагностики і дозволяє виявляти вірусні антигени протягом декількох годин.

Основні переваги МФА: швидкість виконання, висока специфічність (100%). Витрачений час на діагностику захворювання за його допомогою – менше одного дня. Застосовуються прямий та непрямий варіанти МФА.

Пряма імунофлуоресценціязалишається найбільш відданим методом діагностики сказу. Предметне скло, що містить мазки-відбитки тканин мозку, або скла з моношаром культури тканин фіксують в ацетоні протягом 1-4 годин. Потім препарати висушують і обробляють поліклональними флуоресцирующими антинуклеокапсидними антитілами (імунофлуоресцентний реагент).

Цей реагент являє собою кон'югат, виготовлений із специфічних поліклональних антитіл IgG класу до нуклеокапсидного антигену вірусу та флуоресцеїну ізоціанату (ФІТЦ). Специфічні антитіла одержують шляхом гіперімунізації тварин (кролів, хом'яків або коней) сумішшю епітопів нуклеокапсиду вірусу.

В даний час для цих цілей все ширше використовують мишачі моноклональні антитіла до нуклеокапсиду вірусу сказу. Після 30-хвилинної інкубації при 37 С діагностичні препарати багаторазово відмивають фізіологічним розчином і дистильованою водою.

Антитіла, мічені ФІТЦ, фіксуються лише у місцях локалізації вірусних нуклеопротеїдних антигенів. Потім препарати висушують на повітрі та досліджують методом світлової мікроскопії, використовуючи як джерело світла ксенонову лампу та відповідний фільтр.

При непрямому варіантіантиген спочатку з'єднують з незабарвленою специфічною імунною сироваткою. Потім на утворені нефлуоресціюючі комплекси антиген-антитіло впливають міченою флуорохромом імунною сироваткою, що містить антитіла до білків специфічної сироватки. Непрямий варіант МФА поряд з виявленням антигену дозволяє кількісно визначати антитіла в сироватці, що досліджується, шляхом відповідного її розведення.

Мічені ФІТЦ утворення у клітинах різних тканин виявляються у вигляді жовто-зеленого флуоресцентного фарбування на темному тлі (у вигляді округлої або овальної форми внутрішньоцитоплазматичних включень).

Імуноферментний аналіз. Метод заснований на принципі сорбції білків на твердій фазі з подальшим утворенням комплексів антиген-антитіло, що виявляються субстрат-індикаторним розчином. Антиген, що додається в лунки, специфічно зв'язується з антитілами. На шар антигену наносять досліджувані сироватки у потрібних розведеннях. За наявності специфічних антитіл у них зв'язуються з антигеном. Для виявлення зв'язування на шар антитіл наносять імуноглобулін проти глобулінів сироватки людей, кон'югований з пероксидазою хрону. Кількість сорбуючого кон'югату пропорційно кількості людей, що зв'язалися з антигеном антитіл сироваток. Це можна визначити, використовуючи індикаторний розчин (ортофенілілендіамін + перекис водню), компоненти якого в результаті дії пероксидази кон'югату забарвлюють рідину коричнево-жовтий колір. При обстеженні неясних випадків застосування ІФА додатково до методів РП або РЗК дозволяє збільшити достовірність лабораторної діагностики сказу завдяки великій чутливості цього методу. Метод дозволяє виявляти інфекційні та дефектні частки.

Для визначення антирабічних антитіл у процесі вакцинації можна застосовувати непрямий метод ІФА, використовуючи як антиген очищений вірус, а для визначення антитіл класу IgG в людській сироватці - А-білок стафілококу, пов'язаний з пероксидазою хрону. Результати ІФА можна порівняти з отриманими в тестах вірусної нейтралізації на мишах. Метод дозволяє виявляти присутність IgМ на початку процесу імунізації.

Імуноферментні методи - дуже перспективні виявлення нуклеокапсидного антигену вірусу при посмертної діагностиці в тканинах мозку. Серед них, наприклад, швидкий імуноферментний метод діагностики сказу, заснований на приготуванні плашок сенсибілізованих антитілами IgG ізотипу до нуклеокапсиду першого серотипу, розведених у карбонатному буфері.

Матеріал для дослідження гомогенезують у буфері або культуральному середовищі, освітлюють центрифугуванням, вносять у лунки та інкубують у плашках. Фіксований специфічними антитілами нуклеокапсидний антиген ідентифікують додаванням пероксидазного кон'югату з антинуклеокапсидними протирабічними антитілами іншої видоспецифічності та хромогенного субстрату. Чутливість методу становить 0,8-1,0 нг/мл.

Цим методом можна виявляти антигени вірусів різних серотипів. Застосування кон'югатів нуклеокапсидспецифічних антитіл, мічених біотином, підвищує чутливість до 0,1–0,2 нг/мл.

Методом ІФА успішно виявляється антиген нуклеокапсиду, але матеріал, що навіть розклався, не повинен фіксуватися формаліном.

Метод полімеразної ланцюгової реакції. Для експрес-діагностики вірусу сказу та ідентифікації лісовірусів найбільш зручний метод полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Метод ПЛР - найнадійніший і найшвидший для виділення віріонної РНК з будь-яких проб, що містять вірус у низькій концентрації. За його допомогою можна створити багато копій РНК вірусу. Цей метод використовується для підтвердження результатів МФА та для визначення вірусу в слині, цибулинах волосся заднього відділу шиї та голови.

ПЛР заснована на принципі природної реплікації ДНК. Суть методу полягає у багаторазовому повторенні циклів синтезу (ампліфікації) вірусоспецифічної послідовності ДНК за допомогою термостабільної Taq ДНК-полімерази та двох специфічних затравок, так званих праймерів.

Кожен цикл складається з трьох стадій із різним температурним режимом. У кожному циклі подвоюється кількість копій ділянки, що синтезується. Знову синтезовані фрагменти ДНК служать як матриця для синтезу нових ниток у наступному циклі ампліфікації, що дозволяє за 25-35 циклів напрацювати достатню кількість копій обраної ділянки ДНК для її визначення, як правило, за допомогою електрофорезу в агарозному гелі.

Особливо висока чутливість ПЛР при використанні праймерів комплементарних N-гену, коли вдається виявляти РНК вірусу в пробах, що містять вірус в титрі 10 МЛД50. Методом ПЛР можна виявляти РНК вірусу навіть у патологічному матеріалі, що розклався.

В даний час розроблені та широко використовуються на практиці підтверджуючі (конфірматорні) тести, такі як ПЛР у зворотно-транскриптазному виконанні (ВІД-ПЛР). Метод ОТ-ПЛР – високочутливий та найбільш ефективний. РНК екстрагується з тканин інфікованого вірусом органу, транскрибується в кДНК, яка потім ампліфікується методом ПЛР. Для постановки ОТ-ПЛР необхідні праймери, отримані до консервативних областей геному вірусу сказу. Зазвичай використовуються гени, що кодують нуклеопротеїн або N-білок.

Метод ПЛР високоспецифічний і дуже чутливий. Є одним із найбільш точних тестів детекції рабічного антигену, що дозволяє діагностувати сказ навіть за наявності в матеріалі хоча б одного віріону. В основі тесту лежить комплементарне добудовування РНК-матриці, яке здійснюється in vitro за допомогою ферменту РНК-полімерази. В останні роки ПЛР знаходить дедалі ширше застосування для діагностики та моніторингу вірусних інфекцій. Однак методика проведення складна, дорога і поки що недостатньо уніфікована для рутинного застосування.

Цитологічні методи в даний час мають обмежене діагностичне значення, але при ряді інфекцій, як і раніше, повинні застосовуватися. Досліджуються матеріали аутопсії, біопсії, мазки, які після відповідної обробки фарбуються та аналізуються під мікроскопом. При сказі – це виявлення включень у цитоплазмі клітин (тільця Бабеша – Негрі).

Виділення вірусу. Виділення вірусу може бути необхідним для підтвердження результатів тестів визначення антигену і для більш детальної характеристики ізолятів. І хоча цей метод є одним із найстаріших і трудомістких методів діагностики, сьогодні виділення вірусу з подальшою ідентифікацією за допомогою одного із сучасних методів (ІФА з моноклональними антитілами або ПЛР) є найбільш достовірним методом діагностики, т.з. "золотий стандарт".

Результативність методів діагностики сказу може варіювати в залежності від ряду факторів (стадії хвороби, термінів забору матеріалу, якості отриманих проб, умов їх зберігання, досвідченості персоналу, якості реактивів та ін.). Якщо позитивний результат підтверджує сказ, то негативний який завжди свідчить про відсутність хвороби. Тому за сказу експерти ВООЗ рекомендують використовувати кілька тестів, особливо МФА у поєднанні з біопробою на новонароджених (2–3 денних) білих мишах.


Заходи особистої профілактики

Усі роботи з матеріалом, що, ймовірно, містить вірус сказу, так само як і з тваринами, підозрілими на сказ, повинні проводитися з дотриманням заходів особистої безпеки. Медичні працівники та ветеринарні лікарі повинні працювати у халатах, рукавичках, масках.

Після закінчення роботи бокси обробляють 3% розчином перекису водню.

Флакони, ампули та інструменти, а також матеріали, що містять вірус сказу, і весь посуд після роботи знезаражують автоклавуванням протягом 1 години при 1,5 атм (режим «вбивки»).

Кошти індивідуального захисту знезаражують кип'ятінням або автоклавуванням. Робочу поверхню столу та руки знезаражують дезрозчином (0,5% розчин хлораміну).