Ручна мікроскопія мазка крові. Дослідження клітинних елементів у периферичній крові є одним із. Коли призначається дослідження

Ціль заняття. Навчитися диференціювати формені елементи крові за пофарбованими мазками, виводити лейкограму.

Об'єкти дослідження та обладнання. Пофарбовані мазки крові тварин різних видів.

Мікроскопи, препаратів, 11-клавішні лічильники, скляні палички, імерсійне масло, бензин, вата.

Дослідження забарвлених мазків крові. Забарвлені мазки крові досліджують під мікроскопом, використовуючи при цьому об'єктив X 90 та імерсійну олію. Останнє після роботи видаляють із мазка сухою ваткою, щоб зберегти препарат.

У забарвлених мазках крові визначають розмір, форму, характер забарвлення клітин та їх структурних елементів - ядра, цитоплазми та включень; співвідношення між форменими елементами різних видів.

Еритроцити.При оцінці еритроцитів звертають увагу на їх розмір, форму, фарбування та клітинні включення. Еритроцити ссавців у мазках крові округлої форми (у верблюдів та лам овальної), у птахів та риб – овальної форми та містять ядро. Еритроцити фарбуються кислими барвниками в рожевий колір (ацидофільні),причому центральна частина виявляється блідою, так як центр еритроцита увігнутий. Таке фарбування - більш інтенсивне по периферії та бліде в центрі - називають ортохромазією,а еритроцити - ортохромнимиклітинами. Діаметр еритроцитів становить (1 · 10" 3 мм): у великої рогатої худоби 4,4-7,7; овець 3-5,6; кіз 2,1-4,9; коней 4,5-7,5; свиней 4-9; собак 4,2-10; кішок 5-6,2; курей 9,3 ? 5,6-12,2 х 7,2; риб 9,8 ? 14-10,2 ?

тромбоцити.У мазках крові тромбоцити, або кров'яні пластинки, овальної, округлої або незграбної форми. Периферична, гомогенна їх частина - гіаломір -забарвлюється в блакитний колір, а центральна, що складається з зернят, - грануломір- у фіолетовий або червоно-фіолетовий. Найчастіше тромбоцити в мазках лежать групами, утворюючи конгломерати з п'яти-шести пластинок і більше, що вказує на їхню хорошу здатність до аглютинації. Діаметр тромбоцитів 1-4 мкм.

Лейкоцити.Залежно від властивостей цитоплазми та характеру зернистості лейкоцити поділяють на гранулоцити, або зернисті (базофіли, еозинофіли та нейтрофіли), і агранулоцити, або незернисті (лімфоцити та моноцити) (див. цв. вкл., рис. 9-15).

Базофіли (Б) - округлої або овальної форми клітини діаметром 11 - 17 10" 3 мм. У зрілих форм ядро ​​поліморфне, погано помітне, з неясними обрисами, пофарбоване в фіолетовий колір або слабо-фіолетовий з бордовим відтінком кольору. Цитоплазма блідо-рожева блідо-фіолетова, що обумовлено розчиненням гранул у процесі приготування мазка.Больші гранули округлі або розпливчасті, пофарбовані в темно-фіолетовий, темно-синій або чорний колір, нерідко зруйновані - на їх місці утворюються вакуолі.

Еозинофіли (Е) - великі округлої форми клітини діаметром 9-22 10 3 мм. Ядро пофарбоване у фіолетовий колір. Цитоплазма ніжно-блакитна з рожево-червоною або яскраво-червоною зернистістю (круглі гранули або злегка овальні). Характер ядра залежить від ступеня зрілості клітини: у зрілих форм ядро ​​сегментоване, у молодих округле. У коней, великої рогатої худоби та свиней ядро ​​найчастіше складається з двох сегментів, а у овець, кіз та собак – із трьох. Найбільші гранули зустрічаються в цитоплазмі еозинофілів у коней (до 3 10" 3 мм), собак та кроликів

(До 1,5 10мм); у кішок гранули розташовані дуже густо, нерідко вони паличкоподібної форми та неоднакових розмірів. При розчиненні гранул на місці утворюються вакуолі, в розчавлених клітинах гранули лежать вільно, «розсипавшись».

Нейтрофіли (Н) - клітини округлої форми, розміром 9,5 - 14,5 · 10" 3 мм. Залежно від форми та ступеня забарвлення ядра розрізняють мієлоцити, юні (метамієлоцити), паличкоядерні та сегментоядерні нейтрофіли.

Мієлоцити (М) -наймолодші клітини з нерівномірно забарвленим у фіолетовий колір масивним круглим або овальним ядром, розташованим частіше ексцентрично. Для ядерного хроматину характерне чергування темних та світлих ділянок. Цитоплазма клітин рожевого або світло-синього кольору, з дрібною ніжною рожевою зернистістю. У крові здорових тварин мієлоцити не трапляються.

Юні (Ю)нейтрофіли містять забарвлене у фіолетовий колір ядро: широке з центральним втиском (бобовидної форми) або трохи витягнуте (підковообразне). Світлі ділянки хроматину змінюються темнішими. Цитоплазма рожевого кольору, іноді погано профарбована, з дрібною ніжною рожевою зернистістю. У периферичній крові дорослих тварин молоді нейтрофіли який завжди вдається виявити.

Паличкоядерні (Я)нейтрофіли характеризуються трансформацією ядра в ковбасоподібну або паличкоподібну форму. Ядро нерівномірно забарвлене у темно-фіолетовий колір; приблизно одного діаметра по всій довжині, але може бути вигнуто у вигляді дужки, півмісяця, латинської літери S, на кінцях булавовидно здуто; в окремих місцях на ядрі помітні невеликі перехоплення-містки шириною не менше */2 основної частини ядра. Цитоплазма блідо-рожевого кольору, з азурофільною зернистістю, містить безліч дрібних (часто погано видимих), рівномірно розташованих гранул.

Сегментоядерні (С)нейтрофіли відрізняються від паличкоядерних лише характером ядра, яке складається з двох - п'яти сегментів, з'єднаних тонкими, іноді ледь помітними перемичками. Ядро забарвлюється нерівномірно темно-фіолетовий колір.

Лімфоцити (Л) за розміром поділяють на малі (6-9 · 10' 3 мм), середні (10-14 · 10" 3 мм) і великі (14 · 10~ 3 мм і більше). або злегка овальної форми, інтенсивно забарвлене в темно-синій колір.Хроматин розподілений таким чином, що темніші ділянки переходять без різкої межі в світліші.Цитоплазма світло-синя, зазвичай з перинуклеарною зоною (просвітлення навколо ядра), іноді в ній виявляють азурофільну зернистість Найбільше в периферичній крові виявляють малі лімфоцити (до 95%), у яких цитоплазма розташована у вигляді вузького обідка, або «серпа», навколо темнозабарвленого ядра.

Моноцити (М) - це великі клітини діаметром 12-24 · 10 3 мм, округлої або нерідко неправильної форми. Ядро характеризується різноманітністю форми: може бути бобоподібним, округлим, багатолопатевим, підковоподібним; забарвлюється нерівномірно в слабофіолетовий колір з темно-фіолетовими плямами, так як хроматин ядра пухкий, розподілений нерівномірно, як утворюючи осередки різних розмірів і форми. Цитоплазма моноцитів сіро-блакитного, сіро-синюватого кольору зі світлим фіолетовим відтінком, поблизу ядра містить дрібну пилоподібну зернистість.

Особливості клітин крові птахів. У всіх птахів на відміну від ссавців еритроцитиовальної (еліпсоїдної) форми, за розміром більше лейкоцитів, містять ядро. Тромбоцитиверетеноподібної форми і також містять ядро. Серед лейкоцитіввиділяють псевдоеозинофіли, які відповідають нейтрофілам ссавців. Цитоплазма псевдоеозинофілів містить великі червоні гранули у вигляді зерен або паличок; ядро пофарбоване у синьо-фіолетовий колір. У справжніх еозинофілів гранули округлої форми та неоднакові за розмірами, рожевого кольору; ядро складається з двох - п'яти сегментів, забарвлюється в темно-синьо-фіолетовий колір інтенсивніше, ніж у псевдоеозинофілів.

Виведення лейкограми (лейкоцитарної формули). Лейкограма є відсоткове співвідношення між окремими видами лейкоцитів у крові.

Методи диференціального підрахунку лейкоцитів.Лейкограму виводять за пофарбованими мазками в імерсійній системі шляхом диференціального підрахунку 100 (краще 200) лейкоцитів одним з методів, що наводяться далі (рис. 7.11).

Чотирьохпольний метод (за Шиллінгом): з кожної сторони мазка на початку і в кінці його (тобто на чотирьох досліджуваних ділянках) визначають по 25 лейкоцитів (або по 50, якщо вважають 200 клітин). При цьому від краю мазка заглиблюються на три-чотири поля зору, потім просуваються на два-три поля вздовж мазка і повертаються до краю. Кожен знайдений лейкоцит реєструють на 11 клавішному лічильнику.

Мал. 7.11.

1 - чотирипільний; 2 - Трипільний; 3 - однопільний; 4 - ступінчастий

Трипільний метод (за Пилипченком): клітини підраховують на трьох ділянках, розташованих упоперек мазка (від одного краю до іншого). На початку мазка підраховують 35 (або 70) лейкоцитів, у середині 30 (або 60) та в кінці мазка 35 (або 70) клітин.

Однопільний метод (по Мухіну): підраховують 100 лейкоцитів у середній частині мазка, проходячи поперек його від краю до іншого і назад.

Ступінчастий метод: підрахунок клітин починають від одного краю і ведуть по зигзагоподібній лінії до кінця мазка. Виводити лейкограму цим способом рекомендують у великої рогатої худоби при діагностиці лейкозів.

При записі результатів окремі види лейкоцитів розташовують у такій послідовності: базофіли (Б), еозинофіли (Е), нейтрофіли - мієлоцити (М), юні (Ю), паличкоядерні (П), сегментоядерні (С), лімфоцити (Л), моноцити ( М). Лейкограма крові здорових тварин представлена ​​у табл. 7.3.

Для диференціального підрахунку лейкоцитів можна використовувати такі прилади, як "Технікою", Hemalog (Н-В), "Культер" модель ВІГ-3.

Таблиця 7.3

Лейкограма крові здорових тварин %

* Псевдоеозинофіли.

Визначення абсолютного числа окремих видів лейкоцитів у 1 10 3 мл крові.Спочатку необхідно підрахувати лейкоцити та вивести лейкограму. Потім число лейкоцитів послідовно множать на відсоток клітин кожного виду лейкограми і ділять на 100, отримуючи абсолютну кількість окремих форм лейкоцитів в 1 · КГ 3 мл крові.

Наприклад, у корови в 1 · 10 мл крові визначено 8000 лейкоцитів, а в лейкограмі відсотковий вміст лейкоцитів становить: Б – 1, Е – 5, П – 4, С – 28, Л – 55, М – 7. Щоб обчислити вміст лейкоцитів кожного виду в 1 · 10" 3 мл крові, складають відповідні пропорції. Для базофілів пропорція буде мати такий вигляд: 100% лейкоцитів - 8000 лейкоцитів; 1% базофілів - X базофілів, звідки х = 1 · 8000: 100 = 8. , в 1 · 10 '3 мл крові міститься 80 базофілів.Подібним чином визначають абсолютну кількість лейкоцитів інших видів і отримують наступні значення: Б - 80, Е - 400, П - 320, С - 2240, Л - 4400, М - 560.

Зміни лейкограми. При різних захворюваннях лейкограма у тварин може змінюватися у трьох напрямках: збільшуватися або зменшуватися вміст лейкоцитів окремих видів (видові лейкоцитози та лейкопенії - нейтрофілія та нейтропенія, лімфоцитоз і лімфоцитопенія, еозинофілія та еозиноспіви, моноцитоз і моноцитоз); з'являтися молоді незрілі форми (нейтрофілії зі зсувом ядра вліво); виникати патологічні зміни в ядрі та цитоплазмі лейкоцитів.

Кожен вид лейкоцитозу може бути абсолютним та відносним. Абсолютний видовий лейкоцитозхарактеризується збільшенням абсолютного числа лейкоцитів даного виду при нормальному чи підвищеному загальному числі лейкоцитів у крові. Відносний видовий лейкоцитозсупроводжується зменшенням загального числа лейкоцитів та переважанням у крові лейкоцитів даного виду за рахунок зменшення числа інших форм клітин, при цьому абсолютна кількість лейкоцитів переважаючого виду залишається в межах норми.

Нейтрофілія (нейтрофілоз, нейтрофільний лейкоцитоз) – збільшення числа нейтрофілів. У клінічній практиці зустрічається найчастіше. Поруч із збільшенням відсотка нейтрофілів в лейкограмі зростає відсоток паличкоядерних форм і можуть виникнути молоді нейтрофіли і мієлоцити, тобто. відбувається ядерний зсув «вліво» (у лейкограмі ці різновиди нейтрофілів записують ліворуч від сегментоядерних форм). Помітне зростання відсотка лише сегментоядерних нейтрофілів позначають як ядерне зрушення праворуч. Розрізняють чотири різновиди нейтрофілії.

Нейтрофілія із простим регенеративним зрушеннямхарактеризується збільшенням числа паличкоядерних нейтрофілів до 10-13%; відсоток сегментоядерних клітин при цьому в нормі або трохи зменшений; загальна кількість лейкоцитів збільшено незначно. Спостерігають при хронічних і прихованих інфекціях (сап, туберкульоз легень), при легкопротікаючих гострих інфекціях, протозойних захворюваннях, ендокардиті, гнійних осумкованих процесах з доброякісним перебігом (рани, що нагноилися, місцеві гнійні осередки).

Нейтрофілія з різким регенеративним (гіперрегенеративним) зсувомсупроводжується появою в периферичній крові юних нейтрофілів та мієлоцитів, відсоток паличкоядерних нейтрофілів також підвищений; загальна кількість клітин збільшено. Зустрічається при гострих інфекціях (гострий сап, контагіозна плевропневмонія, мити, перипневмонія великої рогатої худоби та ін), сепсисі, перитоніті, тяжкому фарингіті та інших септичних процесах.

Нейтрофілія з дегенеративним (гіпопластичним) зсувомхарактеризується збільшенням числа паличкоядерних нейтрофілів, при цьому відсоток сегментоядерних клітин зменшений; у нейтрофілах спостерігають ознаки дегенеративних змін (безструктурний характер ядра, наявність токсичної зернистості та вакуолей у цитоплазмі), з'являються атипові клітини. Загальна кількість лейкоцитів у нормі чи навіть зменшено. Цей стан розвивається при тривалому та сильному впливі на кровотворні органи бактерійних токсинів, отруєннях хімічними речовинами, при тяжких гельмінтозах, гіповітамінозах, кахексії, раку.

Нейтрофілія зі зсувом ядра праворучхарактеризується збільшенням вмісту старих, гіперсегментованих (більше п'яти сегментів) нейтрофілів при нормальному або незначно зниженому відсотку паличкоядерних форм. Вона може бути трьох варіантів:

• незначне підвищення відсотка сегментоядерних нейтрофілів на тлі невеликого лейкоцитозу, яке спостерігається після крововтрат, при легкій течії інфекцій, м'язовій напрузі;
• збільшення числа сегментоядерних нейтрофілів при нормальному чи зниженому числі лейкоцитів, що зустрічається у старих та виснажених тварин;
• значне зростання числа сегментоядерних нейтрофілів з появою в них ознак дегенерації при зниженні або відсутності в лейкограмі паличкоядерних форм та вираженої лейкопенії, що відзначають при хронічних септичних процесах, раку, інвазійних захворюваннях, що важко протікають. Нейтропенія – зменшення відсотка нейтрофілів у лейкограмі. Спостерігають у період одужання при інфекційних, вірусних хворобах, що протікають із лімфоцитозом (чума свиней, інфекційна анемія). Різко виражену нейтропенію (агранулоцитоз) відзначають при апластичних та гіпопластичних процесах, внаслідок застосування деяких лікарських засобів (цитостатичні препарати, що використовуються при лікуванні раку, сульфаніламіди, антибіотики та ін.), впливу іонізуючого випромінювання.

Лімфоцитоз - збільшення (відносне та абсолютне) відсотка лімфоцитів у лейкограмі - зустрічається переважно при хронічних вірусних і бактеріальних інфекціях (бруцельоз, туберкульоз), хроніосепсисі, інтоксикаціях, при виснаженні, анаплазмозі, бамезіозі, піреплазмі катарі шлунка, сильні опіки шкіри, при ураженні залоз внутрішньої секреції (цукровий діабет, тиреотоксикоз), у період одужання при гострих інфекціях, а також при лімфолейкозі.

Лімфоцитопенія (лімфопенія) - зниження вмісту лімфоцитів у крові. Найчастіше лімфопенія супроводжує нейтрофілію, що спостерігають при сепсисі (тяжкопротікаючі гнійні та септичні захворювання), туберкульозі, ботулізмі, кровоп'ятнистій хворобі, чумі свиней. Стійка лімфопенія служить однією з важливих ознак набутого імунодефіциту, для діагностики якого важливо також знати загальну кількість лімфоцитів та їх субпопуляцій – В- та Т-лімфоцитів.

Еозинопенія (анеозинофілія) - зниження відсотка еозинофілів у лейкограмі. Спостерігають при сепсисі, вірусних захворюваннях, бабезіозі (піроплазмозі), інтоксикаціях, уремії, при апластичних станах, у стресових ситуаціях, при ^-дефіцитній анемії, в термінальну стадію лімфолейкозу, а також після застосування стероїдних гормонів.

Моноцитоз – збільшення відсотка моноцитів у лейкограмі. Спостерігають при згасанні інфекційного процесу, що свідчить про сприятливий результат хвороби. Моноцитоз може зустрічатися при нейтрофіліях (сепсисі) і лімфоцитозах з нейтропенією (піро-плазмідози, нутталіоз, трипанозамоз) та ін.

Моноцитопенія – зменшення відсотка моноцитів у лейкограмі. Зустрічається при сильно виражених нейтрофілії, викликаних септичними захворюваннями. Повне зникнення моноцитів вважають несприятливим прогностичним ознакою.

Базофілія – збільшення відсотка базофілів у лейкограмі. Відзначають при хронічному мієлолейкозі, гельмінтозах, алергічних станах, голодуванні, чумі свиней, паралітичній міоглобінурії.

М. Пулетті

Виготовлення мазків крові технічно просте та швидке. Для отримання максимальної інформації оцінку клітин крові необхідно систематизувати.

Підготовка та фарбування мазків крові

При заборі матеріалу у ідеально спокійної тварини із середнім діаметром розширення вен кров повинна швидко надходити в пробірку, що містить антикоагулянт. Найчастіше використовується ЕДТА (етилендіамінтетраацетат), тому що цей антикоагулянт дозволяє краще зберегти досліджувані формові елементи крові. Однак для попередження різного роду морфологічної деградації клітин проміжок часу між взяттям свіжої та добре гомогенізованої крові та виготовленням препарату має бути максимально коротким (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008).

Класичне забарвлення відрізняється від швидкого. В останні час такі методи швидкого фарбування, як Diff-Quick ® , мають переваги, оскільки вони стійкі до варіацій рН розчинів та утворення депо фарбуючої речовини. Проте вони менш ефективні виявлення поліхроматофілів і погано забарвлюють гранули базофілів і мастоцитів (J.W. Harvey, 2001; D. Walker, 2008). Щоб отримати специфічну візуальну картину ретикулоцитів, необхідно провести забарвлення з новим синім метиленовим (NBM). У пластиковій пробірці краплю крові перемішують із двома краплями NBM. Пробірку залишають за кімнатної температури на 10 хвилин. Маленьку краплю після перемішування поміщають на предметне скло і розмазують так само, як і під час мазка крові. Потім предметне скло швидко висушують на повітрі та досліджують під мікроскопом з великим збільшенням (50-100).

Систематичне дослідження мазків крові

Оцінюючи мазка крові дуже важливо керуватися єдиною схемою дослідження.

Мазок крові, виконаний одним тонким (моноцелюлярним) шаром з округлістю на кінці, потовщується до основи. Клітини крові оцінюють на тонкому шарі, тому що товстий шар несе мало інформації. При малому збільшенні (10 або 20) крайову частину мазка, в основному його округлий кінець, зазвичай обстежують на виявлення агрегатів тромбоцитів або широких атипових клітин (ліфмобластів або дендритних клітин) (фото 4). Агрегати тромбоцитів після їхньої активації формуються in vitro. Цей феномен відбувається іноді в результаті важкого забору крові, що, наприклад, найчастіше відзначають у кішок (E. Duan Lassen, G. Weiser, 2006; S. L. Stockhman, M. A. Skkott, 2008; D. Walker, 2008).

Фото 4Мікроскопія мазка крові здорового собаки (×1000). Згустки тромбоцитів

Дослідження мазків крові - це досить поширений метод, що дозволяє швидко діагностувати багато часто зустрічаються порушення у собак і кішок. Основними умовами ефективного використання цього методу діагностики є суворе дотримання техніки підготовки мазка та систематичне дослідження з дотриманням алгоритму дослідження.

Основні положення

Після забору матеріалу слід швидко помістити кров у пробірку з антикоагулянтом для того, щоб зберегти якість клітин.

Забарвлення новим блакитним метиленовим дозволяє ідентифікувати ретикулоцити.

Оцінку здійснюють на тонкому шарі мазка крові зі зчитуванням під мікроскопом лише на рівні його кісок.

Під систематичним дослідженням мазка крові мається на увазі алгоритм APEL.

СВМ № 5/2010

В даний час найбільш широко застосовується дослідження загального аналізу крові, що дозволяє оцінити якісний та кількісний склад крові. Гематологічна норма є статистичним показником і відбиває середню величину, що у популяції здорових осіб.

Забір крові для проведення аналізу виробляють із пальця або з вени. Аналіз здається вранці, натще. Протягом 8 годин до здачі аналізу не допускається прийом їжі, у тому числі соки, чай, кава, алкоголь. Можна пити просту воду.

Підрахунок кількості еритроцитів, лейкоцитів, тромбоцитів можна проводити з використанням мікроскопа та камери Горяєва-Розенталя та сучасних геманалізаторів. У той же час дослідження мазка крові здатне допомогти в діагностиці патологічних процесів, при яких кількісний вміст клітин може залишатися нормальним.

Еритроцити

Еритроцити становлять основну масу формених елементів крові. Людина вони позбавлені ядра і мають двояковогнутую форму.

Зниження кількості еритроцитів найбільше часто зустрічається в клінічній практиці і є однією з ознак анемічного синдрому. Але слід пам'ятати, що відносне зменшення кількості еритроцитів може спостерігатися зі збільшенням обсягу плазми (гідремії), за рахунок посиленого припливу тканинної рідини в період сходження серцевих та ниркових набряків, при введенні великої кількості рідини внутрішньовенно.

Підвищення кількості еритроцитів спостерігається при еритреміях (хвороба Вакеза), а також при вторинних абсолютних та відносних еритроцитозах.

Абсолютні еритроцитози зустрічаються при:

• хронічних обструктивних захворюваннях легень,
• уроджених або набутих пороках серця,
• первинної легеневої гіпертензії,
• синдромі Піквіка,
• перебування у високогірних районах,
• стенозі ниркових артерій,
• полікістозі нирок,
• гідронефроз,
• злоякісних новоутвореннях (наприклад, надниркових залоз),
• хвороби та синдромі Кушинга,
• лікування стероїдами.

Відносні еритроцитози зустрічаються при неприборканому блюванні, діареї, масивних опіках та шоці.

При дослідженні патологічних змін морфології еритроцитів можна виявити:

• клітини різної форми (пойкілоцитоз),
• клітини різного забарвлення (анізохромія),
• клітини різного розміру (анізоцитоз),
• різні внутрішньоклітинні включення.

Розміри нормальних еритроцитів (нормоцитів) становлять 7,2 - 8,0 мкм у діаметрі. Анізоцитоз - патологічний стан, при якому відбувається зміна розмірів еритроцитів:

• мікроцитоз (менше 7,0 мкм у діаметрі) спостерігається при залізодефіцитних анеміях, гемоглобінопатії;
• макроцитоз (понад 8,0 мкм у діаметрі) — при анемії вагітних, дефіциті вітаміну В 12 та фолієвої кислоти, а також при захворюваннях печінки, алкоголізмі та злоякісних новоутвореннях;
• мегалоцитоз (понад 11 мкм у діаметрі) - при дефіциті вітаміну В 12 та фолієвої кислоти, анеміях вагітних, глистових інвазіях.

У крові здорової людини вміст нормоцитів вбирається у 70 % від усього обсягу, тоді як частку мікроцитів і макроцитів доводиться до 15 %. Зміна цього співвідношення, що може бути визначено аналізом крові, свідчить про розвиток анізоцитозу. Клінічні симптоми анізоцитозу подібні до анемії або серцевої недостатності і характеризуються швидкою стомлюваністю, занепадом сил, прискореним серцебиттям і задишкою. Лікування анізоцитозу, як правило, зводиться до усунення причин його появи.

Анізоцитоз та пойкілоцитоз зустрічаються практично при всіх видах анемій. При цьому форма еритроцитів може бути:

• кулястої (хвороба Мінковського - Шоффара),
• серповидної (спадкова серповидноклітинна гемолітична анемія),
• овальної (при спадковому овалоцитозі),
• мішенеподібної (при таласемії та свинцевому отруєнні).

Забарвлення еритроцитів також може змінюватись:

• гіпохромія (зменшення інтенсивності забарвлення еритроцитів) характерна для численних залізодефіцитних анемій, таласемії, свинцевого отруєння;
• Гіперхромія (підвищення насичення еритроцитів гемоглобіном) зустрічається при дефіциті вітаміну В 12 та фолієвої кислоти, алкоголізмі, вагітності.

Поліхроматофіли (еритроцити з недостатнім накопиченням гемоглобіну та залишками базофільної субстанції) спостерігаються як у нормі, так і при збільшенні регенераторної активності кісткового мозку під час гострої крововтрати, масивному гемолізі.

Розрахункові показники

Під час проведення досліджень з допомогою автоматичних аналізаторів часто використовуються розрахункові величини.

Колірний показник

Колірний показник ( ЦП) відображає середній вміст гемоглобіну в еритроциті та визначається за формулою:

ЦП = Hb × 3 11 / Er, де Hb – гемоглобін (г/л), Er – число еритроцитів в 1 літрі крові.

Норми колірного показника дорівнюють 0,82 - 1,05. За величиною колірного показника анемії поділяють на:

• гіпохромні (0,82 і нижче),
• нормохромні (0,82 - 1,05),
• гіперхромні (1,1 та вище).

Величина гематокриту

Визначення гематокриту ( Ht) проводять мікроцентрифугування або автоматичним способом. Величина гематокриту дає уявлення про співвідношення між обсягами плазми та формених елементів (головним чином еритроцитів), отриманими після центрифугування крові. Виражається у відсотках та розраховується за формулою:

Ht = 11,72 + 5,045 × Er / 10 11 де Er - число еритроцитів в 1 літрі крові.

Норма гематокриту у чоловіків 40,7-50,3%, у жінок – 36,1-44,3%. Цей показник змінюється як у бік підвищення, і зниження.

• Підвищення спостерігається при зневодненні організму, зменшенні ОЦП (масивні опіки, шок), первинних та вторинних еритроцитозах.
• Зниження можливо при гіпергідратації організму, збільшенні ОЦП.

Середній еритроцитарний об'єм

Середній еритроцитарний обсяг ( СЕО) визначають за допомогою геманалізатора та обчислюють за формулою:

СЕО = Ht / Er × 10 -9 де Ht - гематокрит, Er - число еритроцитів в 1 мкл крові.

Одиницею СЕО є фемтолітри (фл). Цей показник у середньому однаковий для чоловіків та жінок – 80-94 фл.

• Зменшення СЕО трапляється при мікроцитарних анеміях.
• Збільшення – при макроцитарних та мегалобластичних анеміях.

ССГЕ = Hb/Er, де Hb – вміст гемоглобіну (г/л), Er – число еритроцитів в 1 літрі.

Середня концентрація гемоглобіну в еритроциті

Середня концентрація гемоглобіну в еритроциті ( СКГЕ) відбиває ступінь насичення еритроциту гемоглобіном, виявляється у г/дцл. Обчислюється за такою формулою:

СКГЕ = Hb/Ht, де Hb – вміст гемоглобіну (г/л), Ht – гематокрит (%).

Нормальне значення цього показника становить 34,4 г/дцл (30 – 38,5). СКГЕ може лише знижуватись як при гіпохромних анеміях, так і гіперхромних.

Ретикулоцити

Ретикулоцити - молоді форми еритроцитів, що утворилися з нормобласти після втрати ними ядра. У нормі їх кількість дорівнює 0,5-1,5% у периферичній крові. Ретикулоцитоз відбиває еритропоетичну активність кісткового мозку.

• Збільшення числа ретикулоцитів спостерігається при посиленій регенерації кісткового мозку, наприклад, при гострій крововтраті, гемолітичній анемії.
• Зменшення - при гіпо-і апластичних анеміях, У 12-дефіцитної анемії, метастазах в кістковий мозок, вказуючи на зниження регенераторної функції кісткового мозку.

Ще більш точним показником еритропоезу є ретикулоцитарний індекс ( РІ), який обчислюється з урахуванням гематокриту за формулою:

РІ = R × Ht / 45 × 1,85, де R – число ретикулоцитів (%), Ht – гематокрит пацієнта (%), 45 – гематокрит людини в нормі, 1,85 – кількість діб, які необхідні для надходження нових ретикулоцитів у периферичну кров.

Показник РІ:

• менше 2 - свідчить про знижену продукцію еритроцитів,
• більше 2-3 – свідчення збільшення освіти еритроцитів.

Швидкість осідання еритроцитів

Швидкість осідання еритроцитів ( ШОЕ) залежить від вмісту білків у плазмі крові, головним чином фібриногену та γ-глобулінів, що складаються в основному з імуноглобулінів, та кількості формених елементів.

Основними причинами підвищення ШОЕ є запальні бактеріальні та асептичні процеси, що супроводжуються змінами білкового спектру плазми крові (системні захворювання сполучної тканини, хронічні гепатити та цирози печінки, інфаркт міокарда та ін.).

При злоякісних новоутвореннях збільшення ШОЕ обумовлено тією самою причиною. Значне підвищення ШОЕ виявляють зі збільшенням у плазмі концентрації парапротеїнів при мієломній хворобі та макроглобулінемії Вальденстрему. За всіх видів анемій відбувається збільшення ШОЕ.

Зменшення ШОЕ є ознакою підвищення в'язкості крові при захворюваннях та синдромах, що супроводжуються збільшенням числа еритроцитів.

Тромбоцити

Тромбоцити відіграють важливу роль у підтримці балансу між системами згортання та протизгортання крові, будучи важливою ланкою тромбоцитарно-судинного механізму гемостазу. Нормальна кількість тромбоцитів становить 180-320×109/л.

У клінічній практиці можуть спостерігатися стани, що характеризуються як збільшенням кількості тромбоцитів (тромбоцитоз), так і зменшенням (тромбоцитопенії), а також порушенням адгезивних, агрегаційних та коагуляційних функцій тромбоцитів (тромбоцитопатії).

Тромбоцитози поділяються на:

• первинні (ідіопатичний, есенціальний та хронічний мегакаріоцитарний лейкоз),
• вторинні (причинами яких є залізодефіцитні анемії, спленектомія, злоякісні новоутворення, колагенози, хронічні запальні захворювання кишечника, сублейкемічний мієлоз, еритремія та ін.)

Тромбоцитопенії також бувають:

• первинними (гостра або хронічна ідіопатична тромбоцитопенічна пурпура),
• вторинними, що розвиваються при впливі:
  • фізичних факторів - іонізуючого випромінювання та механічного пошкодження тромбоцитів;
  • біологічних факторів – імунних антитіл, цитолітичних факторів пухлинних клітин, переливання "старої" консервованої крові, вірусних захворювань;
  • хімічних факторів - промислових та побутових хімічних речовин, лікарських препаратів.

Лейкоцити

Лейкоцити - клітини крові, що утворюються в кістковому мозку та лімфатичних вузлах, характеризуються високою та складною структурною організацією та спеціалізацією. У нормі кількість лейкоцитів становить 40-88×10 9 /л.

Розрізняють 5 видів лейкоцитів: гранулоцити (нейтрофіли, еозинофіли, базофіли) та агранулоцити (моноцити та лімфоцити). Основною функцією лейкоцитів є захист організму від чужих йому антигенів (зокрема, мікроорганізмів, пухлинних клітин, клітин трансплантата).

Лейкоцитоз (збільшення кількості лейкоцитів) може зустрічатися у здорових людей після їди, багатої білками; важкої фізичної роботи та під час стресу; після перегрівання чи охолодження. У патології основними причинами лейкоцитозу є:

• гострі інфекції,
• будь-які гострі або хронічні запальні захворювання,
• захворювання, що супроводжуються розпадом тканин (інфаркт міокарда, інсульт, панкреонекроз та ін.) та/або вираженою інтоксикацією (уремія, кетоацидоз),
• патологічні стани, для яких характерна виражена гіпоксемія (гостра крововтрата),
• дія токсичних речовин (чадного газу, ртуті) та фізичних факторів (іонізуючого випромінювання),
• злоякісні новоутворення,
• гострі та хронічні лейкози, що супроводжуються проліферацією одного з паростків кровотворення,
• поліцитемія,
• захворювання, що характеризуються імунними порушеннями (колагенози, сироваткова хвороба та інші).

Лейкемоїдна реакція - це стійкий лейкоцитоз до 30-50×10 9 /л і більше, що розвивається при інфекції, злоякісних новоутвореннях, екзогенній та ендогенній інтоксикаціях та інших станах. На відміну від лейкозів при лейкемоїдній реакції у крові циркулюють нормальні, переважно зрілі нейтрофіли.

У людей похилого віку, виснажених та ослаблених хворих при розвитку низки захворювань, для яких характерний лейкоцитоз, він може бути відсутнім через зниження імунної опірності організму.

Лейкопенія (зменшення кількості лейкоцитів) зустрічається при таких патологічних станах:

• вірусних інфекцій,
• деяких бактеріальних та протозойних інфекціях,
• гіпоплазії та аплазії кісткового мозку,
• побічну дію цитостатичних препаратів, антибіотиків, сульфаніламідів, НПЗЗ,
• спленомегалії.

Лейкоцитарна формула

Лейкоцитарна формула (лейкограма) - це відсоткове співвідношення різних видів лейкоцитів у периферичній крові. При різних захворюваннях може відбуватися зміна лейкоцитарної формули за рахунок:

• збільшення чи зменшення будь-якого виду лейкоцитів;
• поява різних дегенеративних змін у ядрі та цитоплазмі зрілих клітин лейкоцитів;
• поява у периферичній крові молодих незрілих лейкоцитів.

У клінічній практиці лейкограма має значення. За даними лейкограми можна судити про перебіг патологічного процесу, появу ускладнень та прогнозувати результат хвороби. Дані лейкограми слід зіставляти із клінічними проявами хвороби.

Нейтрофіли

Нейтрофіли - підвид гранулоцитарних лейкоцитів, що володіють, в основному, бактерицидною та дезінтоксикаційною функціями. Провідний механізм їхньої імунної функції — фагоцитоз. Вони є мікрофагами, тобто здатні поглинати лише відносно невеликі чужорідні частинки чи клітини.

Залежно від ступеня зрілості та форми ядра в периферичній крові виділяють паличкоядерні (молодші, незрілі) та сегментоядерні (зрілі) нейтрофіли. Молодші клітини нейтрофілу - метамієлоцити, мієлоцити, промієлоцити - з'являються в периферичній крові у разі патології і є свідченням стимуляції утворення клітин цього виду. Тривалість циркуляції нейтрофілів у крові становить середньому приблизно 6,5 годин, потім вони мігрують у тканини.

Сегментоядерні нейтрофіли в нормі є основним видом лейкоцитів, що циркулюють у крові людини, становлячи 45-70% загальної кількості лейкоцитів крові. Паличкоядерні нейтрофіли в нормі становлять 1-6%.

Нейтрофілоз – збільшення кількості нейтрофілів більше 6,0×10 9 /л – є відображенням своєрідного захисту організму на вплив екзогенних та ендогенних факторів, що зазвичай поєднується з лейкоцитозом і має ті ж причини.

При оцінці діагностичної та прогностичної значущості нейтрофілу важливо визначити відсоткове співвідношення незрілих і зрілих нейтрофілів.

• Зрушення формули вліво - це підвищення в периферичній крові паличкоядерних нейтрофілів (при гнійно-запальних процесах, гострих інфекціях) і (рідше) поява в невеликій кількості незрілих гранулоцитів.
• Зсув формули вправо - це збільшення в периферичній крові зрілих сегментоядерних нейтрофілів і зниження або зникнення паличкоядерних, як правило, свідчить про сприятливе перебіг захворювання.

Нейтропенія - зниження вмісту нейтрофілів нижче 1,5×10 9 /л - свідчить про функціональне або органічне пригнічення кістковомозкового кровотворення або про інтенсивне руйнування нейтрофілів. Зазвичай поєднується з лейкопенією.

Еозинофіли

Еозинофіли – підвид гранулоцитарних лейкоцитів. Вони мають фагоцитарні властивості, але цю властивість використовують насамперед для участі в алергічному процесі. Вони фагоцитують комплекс антиген-антитіло, утворені переважно Ig E. У нормі вміст еозинофілів у крові: 0-5%.

Еозинопенія — зменшення кількості еозинофілів, що зустрічається при інфекційних, гнійно-запальних процесах та прийомі глюкокортикоїдів. Найбільш виражена еозинопенія виявляється при ендокардиті Леффлера, еозинофільному лейкозі та гіпереозинофільному синдромі, прийомі глюкокортикоїдів.

Базофіли

Базофіли — дуже великі гранулоцити: вони більші за нейтрофіли та еозинофіли. Гранули базофілів містять велику кількість гістаміну, серотоніну, лейкотрієнів, простагландинів та інших медіаторів алергії та запалення. Базофіли беруть участь у запальних та алергічних процесах в організмі. У нормі вміст базофілів у крові: 0-1%.

Базофілія (збільшення числа базофілів) зустрічається рідко, наприклад, при мієлопроліферативних процесах (хронічному мієлолейкозі, поліцитемії, мієлофіброзі), гіпотиреозі, лімфогрануломатозі. Базопенія (зменшення кількості базофілів) діагностичного значення не має.

Лімфоцити

Лімфоцити - головні клітини імунної системи, що є різновидом лейкоцитів групи агранулоцитів. Лімфоцити забезпечують гуморальний імунітет (вироблення антитіл), клітинний імунітет (контактна взаємодія з клітинами-мішенями), а також регулюють діяльність клітин інших типів. У нормі вміст лімфоцитів у крові: 18-40%.

Лімфоцитоз – збільшення числа лімфоцитів у периферичній крові. Це збільшення може бути абсолютним (більше 3,5×10 9 /л) при гострих інфекціях, туберкульозі, гіпертиреозі, лімфолейкозі та лімфосаркомі. Але найчастіше зустрічається відносний лімфоцитоз (збільшення відсотка лімфоцитів при нормальній або зниженій абсолютній їх кількості). Такий стан зустрічається при вірусних інфекціях, гнійно-запальних процесах, що протікають при зниженій опірності організму, черевному тифі, агранулоцитозі.

Лімфоцитопенія – зменшення числа лімфоцитів у периферичній крові. Абсолютна лімфоцитопенія (кількість клітин менше 1,2×10 9 /л) може вказувати на недостатність Т-системи імунітету (імунодефіцит), а також характерна для міліарного туберкульозу, лімфоми, гострої та хронічної променевої хвороби, мієломної хвороби. Відносна лімфоцитопенія самостійного значення не має.

Моноцити

Моноцити – великі зрілі одноядерні лейкоцити групи агранулоцитів. Провідний механізм їхньої імунної функції — фагоцитоз. Вони є макрофагами, тобто можуть поглинати відносно великі чужорідні частинки і клітини (або велика кількість дрібних частинок), і, як правило, не гинуть після фагоцитування (але можлива загибель моноцитів за наявності фагоцитованого матеріалу будь-яких цитотоксичних для моноциту властивостей). Цим вони відрізняються від мікрофагів - нейтрофілів та еозинофілів, здатних поглинати лише відносно невеликі чужорідні частинки, і, як правило, гинуть після фагоцитування.

Тривалість циркуляції моноцитів у крові становить у середньому приблизно 2-3 дні, потім більшість з них або гине через апоптоз, або стають макрофагами (наприклад, в кишечнику). У нормі вміст моноцитів у крові: 2-9%.

Моноцитоз – збільшення числа моноцитів у периферичній крові. Зустрічається у вигляді абсолютного моноцитозу при деяких інфекціях (інфекційному мононуклеозі, підгострому септичному ендокардиті, вірусних, грибкових, рикетсіозних та протозойних інфекціях), тривало протікають гнійно-запальних захворюваннях, злоякісних солітарних пухлинах, захворюваннях крові: хвороби, лімфогрануломатоз, апластичної анемії.

Моноцитопенія (зниження або відсутність моноцитів у периферичній крові) розвивається при тяжких інфекційних процесах (сепсис).

Вивчення мазка периферичної крові залишається важливим частиною гематологічного дослідження. Клініцисту слід врахувати, що вивчення мазка має сенс приступати після отримання результатів автоматизованого аналізу крові. Час, що витрачається вивчення мазка, необхідне отримання додаткової інформації, а чи не для дублювання даних автоматизованого аналізу. В цілому автоматизований аналіз крові набагато ефективніший за ручні методи при визначенні середніх величин і звичайних кількісних характеристик: еритроцитарних індексів, кількості клітин, розмірів тромбоцитів і відсоткового співвідношення лімфоцитів і гранулоцитів. Проте автоматизований аналізатор у разі малонадійний, а часто зовсім непридатний виявлення рідкісних аномалій: ядросодержащих клітин еритроїдного ряду, незрілих гранулоцитів, фрагментів еритроцитів.

Еритроцити

Виявлення еритроцитів як монетних стовпчиків може бути першим поштовхом до виявлення лімфоцитарних чи плазмоцитарних порушень. Фрагменти еритроцитів вдається виявити, якщо вони становлять щонайменше 0,5% всіх клітин. Приблизно при такому рівні їх вмісту відхилення виявляються і на еритроцитарній гістограмі. Таким чином, обидва методи доповнюють один одного. Аномалії форми можуть вказувати на конкретні захворювання, наприклад, серпоподібні гемоглобінопатії, тоді як «краплинні» клітини свідчать про інфільтрацію кісткового мозку пухлиною або мієлофіброз. Мішенеподібні еритроцити та еритроцити у вигляді точильного каменю є менш специфічними аномаліями. Найчастіша морфологічна аномалія описується як «помірний анізоцитоз, помірний пойкілоцитоз». На жаль, ця аномалія настільки неспецифічна, що її виявлення марно навіть для вирішення питання про наявність гематологічного захворювання.

Поліхромазію необхідно оцінювати кількісно, ​​клініцисти повинні знати, що різна виразність поліхромазії вказує на різну міру стимуляції кісткового мозку. Базофільна зернистість є ще одним свідченням присутності залишкових кількостей РНК; вона може зустрічатися за будь-якої форми стимуляції еритроїдного паростка. Слід уважно шукати еритроцити, що містять ядро, оскільки їх присутність вказує на виражену стимуляцію еритроїдного паростка, недостатність функції селезінки або інфільтрацію кісткового мозку пухлинними клітинами.

Тромбоцити

Дослідити тромбоцити необхідно для підтвердження того, що їхня кількість відповідає результатам автоматизованого підрахунку (кожен тромбоцит у полі зору при великому збільшенні відповідає їх вмісту в крові приблизно на рівні 15 10 9 /л). Виражене злипання тромбоцитів може спричинити помилково низькі результати їх підрахунку. При значному тромбоцитозі показник СОТ зазвичай низький, у цьому випадку в мазку виділятимуться присутні у відносно невеликій кількості найбільші тромбоцити. Якщо за допомогою автоаналізатора не вдалося підрахувати число тромбоцитів та визначити СОТ через контамінацію проби або артефакту, особливо важливо дослідити мазок, щоб визначити наявність тромбоцитів, їхню приблизну кількість та ймовірну причину артефакту. Найчастіше похибки при автоматизованому підрахунку тромбоцитів виникають через присутність у пробі фрагментів еритроцитів або лейкоцитів.

Лейкоцити

Слід звернути увагу на клітини, що рідко зустрічаються: моноцити, еозинофіли, базофіли, а також перевірити, чи немає відсутніх в нормі клітин: мієлоцитів, плазмоцитів, бластів. З іншого боку, слід пошукати морфологічні аномалії. Аномалія Пельгера-Хюета (вроджена гіпосегментація гранулоцитів) та псевдоаномалія Пельгера-Хюета (придбана гіпосегментація гранулоцитів при мієлопроліферативному захворюванні) зустрічаються рідко, але їх слід відрізняти від розширення перемичок між фрагментами ядра. Гіперсегментація нейтрофілів вказує на мегалобластну анемію, ниркову недостатність чи тепловий удар. Часто зустрічається токсична зернистість, причину якої завжди вдається встановити. Нарешті, клініцист повинен знати, що у переважній більшості випадків мазок периферичної крові повинен досліджувати лише один досвідчений фахівець. Якщо мазок описаний кваліфікованим лаборантом або консультантом, навряд чи до його висновку вдасться додати багато чого при повторному дослідженні препарату іншим фахівцем.