Аналіз на сказ у собак має на увазі проведення спеціальних експрес-тестів на наявність у крові специфічних антирабічних антитіл. Іноді його застосовують у комплексній діагностиці при підозрі на зараження домашніх вихованців вірусом сказу. Дане захворювання становить загрозу для життя тварин, людини, тому заводчики собак повинні мати поняття про те, як проявляється ця недуга. Якщо є підозра на зараження, якщо вихованець мав контакт із можливим бактеріоносієм, потрібно відразу відвезти вихованця до ветлікарні, для проведення лабораторної діагностики, без якої неможливо встановити точний діагноз.

(rabies) – гостропротекає захворювання теплокровних тварин інфекційної етіології, що викликається вірусом, який вражає ЦНС, провокуючи серйозні порушення в організмі. На жаль, ефективного лікування на даний момент не розроблено, тому інфекція завжди закінчується летальним кінцем.

Збудник інфекційної недуги – РНК-вірус (рабдовірус). Вражає свійських та диких тварин. Існує так званий «природний» вірус та «лабораторний».

ВАЖЛИВО! Сказ відносяться до зооантропозоонозних ХВОРОБ, ТО Є ІНФЕКЦІЯ ПЕРЕДАЄТЬСЯ ЛЮДИНІ. СПАЛАХ ІНФЕКЦІЇ ВІДЗНАЧАЮТЬ СКРІЗІ. ХВОРОБА МАЄ ПРИРОДНО-ВОСЕРЕДНИЙ ХАРАКТЕР.

Природним резервуаром рабдовірусу є інфіковані м'ясоїдні хижаки.Смертельно небезпечний вірус міститься у слині інфікованих особин. Інфікування відбувається контактним шляхом, при укусах, проникненні слини в садна, ранки на дермі.

Проникнувши в організм, вірус нервовими шляхами миттєво переміщається в головний, спинний мозок, слинні залози, де надалі він розмножується.

У слині інфікованих тварин рабдовірус утворюється приблизно за три-сім днів до моменту прояву перших симптомів. При цьому інфікована особина є вірусуносієм, представляючи реальну загрозу для людини, інших домашніх тварин. Тому зараження на сказ може статися навіть у тому випадку, якщо вас чи вашого вихованця вкусила зовні здорова тварина.

Форми, стадії сказу

Інкубаційний період триває від 2-7 доби до декількох тижнів. Інтенсивність прояву симптоматики залежить від віку, резистентності, імунного захисту, вірулентності, концентрації рабдовірусу в організмі. Смертельно небезпечна недуга у тварин протікає у тихій, буйній, рідше в атиповій формах.

У собак відзначають переважно буйну форму інфекції, тривалість якої становить від шести до десяти діб. Має три стадії прояви:

• Продромальну.Термін протікання меланхолійної стадії – не більше двох діб. На цьому етапі розвитку інфекції відзначають зміну поведінкових манер собаки. Тварини сильно пригнічені, виглядають пригніченими, ховаються у темних затишних місцях, неохоче йдуть на контакт, неадекватно реагують на подразники.
• Маніакальну(Стадія збудження). Тривалість перебігу не більше трьох-чотирьох діб. Хворі тварини виявляють безпричинну агресію до своїх побратимів, інших домашніх вихованців, людини, включаючи господаря. Агресія змінюється лагідною поведінкою. Вихованець вимагає уваги, лиже руки, обличчя людини. Хворі вихованці поїдають неїстівні предмети. Нерідко собаки тікають із дому і можуть пробігти невтомно 20-30 км.
• Паралітичну(Депресивну). Для даної стадії, тривалість якої не більше шести діб, характерні важкі збої у функціонуванні ЦНС. Зазначають параліч глотки, гортані, м'язові судоми, спазми. Нижня щелепа відвисає. Відсутня ковтальний рефлекс. З пащі постійно тече слина. Гучні звуки, шум води викликає найсильнішу паніку. Координацію руху порушено. Вихованець впадає в кому, гине від виснаження, порушення дихальної, серцевої функції.

Варто відзначити, що скажений собака, незалежно від форми та стадії захворювання кусає людину, тварин не попереджаючи про напад гавканням.

Тиха, атипова форми

Для тихої форми хвороби характерно відсутність стадії збудження. Тривалість – від двох до п'яти діб. Характеризується загальним пригніченням, меланхолічністю, відсутністю реакцію зовнішні подразники. Тварини гинуть через параліч м'язових структур тіла, глотки. Хвороба завжди закінчується летальним кінцем.

Рідше у собак відзначають атипову форму хвороби, яка проявляється нетиповими, нехарактерними для цієї інфекції проявами. Протікає гостро, підгостро, рідше хронічно (два-три місяці). У тварин відзначають зміну поведінки, збої у роботі ЦНС, ШКТ.

Помітивши нехарактерну поведінку свого домашнього улюбленця, зміну звичок, прояв агресії, а також якщо собака мала контакт або була укушена бездомними, дикими тваринами, обов'язково потрібно відвезти вихованця до ветлікарні, перевірити собаку на сказ. Не слід забувати, що симптоматика наростає спонтанно у певній послідовності.

Діагностичні методики

При постановці попереднього діагнозу мають бути враховані дані анамнезу, паталагоанатомічні результати, епізоотологічна ситуація, симптоми. Проводиться серія лабораторних, гістологічних, мікроскопічних, бактреріологічних досліджень, експрес-тести.

З огляду на схожість симптоматики з іншими інфекціями проводиться диференціальна діагностика (ІФА, ПЛР). Необхідно виключити хворобу Ауески, чуму м'ясоїдних, енцефаломієліт.

Важливо! Якщо є підозра на інфекцію, тварина покусала людину, собаку поміщають у спеціальні ізольовані бокси і протягом десяти днів, доки не будуть готові результати аналізів, спостерігають за її станом. Якщо діагноз підтвердився, на жаль, проводиться евтаназія. Тварин присипляють, оскільки лікування цієї інфекції немає.

Точний діагноз вдається встановити лише після смерті тварин. Отриманий патматеріал досліджують різними методами.

Основні діагностичні дослідження

Найбільш достовірний метод, який завжди підтверджує хворобу – мікроскопічні дослідження біоматеріалу на наявність специфічних включень у мозку – тілець Бабеша-Негрі. Розташовані в рогах амонових.

Для виявлення специфічного антигену у мозку застосовують реакцію дифузної преципітації; імунофлуоресцентний аналіз відбитка рогівки.

Імунофлуоресцентний метод дозволяє максимально швидко діагностувати наявність вірусу в організмі собак. Метод визначає вірусний антиген у 93-97% випадках.

Аналіз крові на антитіла

Враховуючи те, що вірус переміщається нервовими стовбурами, його вкрай рідко вдається визначити в кровоносному руслі. Як правило, при підозрі на зараження для аналізів досліджують спинномозкову рідину.

Серологічні дослідження полягають у проведенні загального, біохімічного аналізу крові. Відзначають зміну лейкоцитарної формули (лейкоцитоз), олігурію, альбумінурію, глюкозурію, збільшення концентрації моноцитів.

Протестувати свого вихованця на сказ, визначити напруженість поствакцинального імунітету дозволить тест на наявність специфічних антирабічних антитіл у крові. Проводиться ця процедура лише в акредитованих лабораторіях, деяких ветклініках. Вартість даного аналізу досить висока. Результати після проведення процедури будуть готові за 10-20 діб.

Сьогодні проводиться два види тестів на антирабічні антитіла – RFFIT (тест швидкого гальмування фокусу флюоресценції) та FAVN – тест флуоресцентних віруснейтралізуючих антитіл, який визначає титр антитіл у МО/мл. Дані методики виконують на живих культурах клітинних структур з додаванням реакцію збудника інфекції. У собак береться 0.5-1 мл сироватки крові.

Тест проводять переважно в тому випадку, якщо ви хочете вивезти свого вихованця закордон. Багато країн ЄС забороняють ввозити на свою територію тварин, які не щеплені від сказу, а також собак, котів, які не мають результатів щодо даного аналізу.

Здавати тест на антитіла потрібно тоді, коли у крові собаки виробляться антитіла до цієї інфекції. Специфічний імунітет після імунізації формується через місяць після щеплення. З цього моменту можна везти вихованця до лабораторії для проходження тесту на антитіла до сказу. При цьому після імунізації, якщо виникає потреба у проведенні тесту, від дати щеплення не повинно пройти більше року. Тест потрібно здати пізніше місяця до терміну проведення ревакцинації.

Якщо титр антирабічних антитіл становить менше 0,50 МО/мл – собаку ревакцинують. За місяць здається повторний аналіз. Продукування захисних антитіл після імунізації впливають деякі чинники: порода, вік, індивідуальні особливості організму, кратність антирабічної імунізації. Ветлікарі рекомендують проводити моніторинг титру антитіл у собак, котів після вакцинації, навіть якщо не планується виїзд за кордон.

Багато власників вивозять своїх вихованців на дачу, на природу, у ліс, на полювання. Не слід забувати, що собаку можуть покусати дикі звірі, які можуть бути інфіковані або є вірусоносіями.

Єдиний спосіб захистити собаку від смертельно небезпечної інфекції – вчасно проведена вакцинація.

Надалі, залежно від вибраного препарату, щорічно проводиться ревакцинація. Деякі вакцини формують імунний захист терміном три роки. Оптимальну схему вакцинацій, ревакцинацій підбере ветлікар.

Сказ - гостра інфекційна хвороба, що протікає з тяжким ураженням нервової системи, як правило, з летальним кінцем. Сприйнятливі людина і всі ссавці.

Сказ поширений повсюдно. Збудника інфекції передають собаки, кішки, дикі гризуни та хижаки, а також кровососні кажани-вампіри.

Тривалість інкубаційного періоду залежить від місця і сили укусу, кількості та вірулентності вірусу, що потрапив у рану, резистентності покусаної тварини. Інкубаційний період триває від 1-3 тижнів до року і навіть більше.

Хвороба протікаєгостро. Клінічні ознаки її в основному однакові у всіх тварин, але найбільш типові вони у собак, у яких може спостерігатися як буйний, так і тихий (паралітичний) перебіг хвороби. У великої рогатої худоби сказ може протікати атипово (втрата апетиту, атонія рубця, параліч глотки, слинотеча). Стадії збудження може бути.

Патологоанатомічні змінинеспецифічні. У м'ясоїдних (переважно у собак) у шлунку можна виявити сторонні предмети.

Вірус сказу має виражену нейропробазію. Проникаючи з периферії (місце укусу) по нервових стовбурах в центральну нервову систему доцентрово, він поширюється в організмі відцентрово по периферичних нервах і потрапляє в різні органи, включаючи слинні залози.

Вірус відноситьсядо сімейства Rhabdoviridae,роду Lyssavirus. Віріони мають форму стрижня із обрубаним кінцем. Віріон вірусу РНК-міститьзі спіральним типом симетрії, має ліпопротеїдну оболонку. Низькі температури консервують вірус. Температура 60 ° С вбиває його через 5-10 хв, сонячне світло – за 5-7 днів. Розчини формаліну, фенолу, соляної кислоти (5%-ні) інактивують вірус за 5-10 хв.

Віріон вірусу сказу містить глікопротеїдний (зовнішній) та нуклеокапсидний (внутрішній) антигени. Глікопротеїдний антиген індукує утворення віруснейтралізуючих антитіл, а нуклеокапсидний - комплементзв'язуючих та преципітуючих антитіл.

В організмі вірус локалізується головним чином у центральній нервовій системі, а також у слинних залозах та слині.

Культивуєтьсяна мишах, кроликах, морських свинках та інших тварин, а також у первинних культурах клітин (нирки хом'ячка, ембріона овець, телят та ін) і клітинах, що перевиваються. Розмноження вірусу у культурах клітин який завжди проявляється ЦПД. До вірусу сказу після попередньої адаптації сприйнятливі курячі ембріони. Вірус індукує утворення цитоплазматичних тілець-включень, які найчастіше виявляють у клітинах амонового рогу, мозочка, кори головного мозку.

Джерелом інфекціїє хворі тварини. Вони передають вірус під час укусу. Плотоядні тварини можуть заражатися при поїданні головного та спинного мозку загиблих від сказу тварин. Доведено можливість зараження на сказ аерогенним шляхом (у місцях, де є кажани). До 60-х років основним джерелом поширення сказу були собаки та кішки, пізніше лисиці, вовки, корсаки та інші дикі тварини.

Діагнозна сказ ставлять на підставі епізоотологічних, клінічних даних та результатів лабораторних досліджень, що мають вирішальне значення.

При роботі з хворими тваринами та інфекційним матеріалом необхідно суворо дотримуватись заходів особистої безпеки: одягати гумові рукавички, халати з нарукавниками, гумовий або поліетиленовий фартух, гумові чоботи, захисні окуляри, захисну маску на обличчя.

Розкривати підозрілих на захворювання на сказ тварин у польових умовах заборонено.

Отримання пат.. Для дослідження на сказ спрямовують до лабораторії свіжі трупи дрібних тварин цілком, а від великих і середніх тварин - голову з двома першими шийними хребцями. Трупи дрібних тварин перед відправкою дослідження обробляють інсектицидами.

Патологічний матеріал упаковують у пластмасові мішки, вкладають у ящики, що щільно закриваються, з вологопоглинаючою прокладкою, просоченою дезінфектантом. Матеріал та супровідний лист, в якому зазначені відправник та його адреса, вид тварини, анамнестичні дані та обґрунтування підозр у захворюванні тварини на сказ, дата та підпис лікаря.

Лабораторна діагностика. Вона включає: виявлення вірусного антигену в РІФ та РДП, тілець Бабеша-Негрі та біопроби на білих мишах.

РІФ.Для цієї реакції біопромисловість випускає флуоресціюючий антирабічний гамма-глобулін.

Методика постановки РІФ . На знежирених предметних скла готують тонкі відбитки або мазки з різних відділів головного мозку лівої та правої сторони (аммонів ріг, кора півкуль, мозок, довгастий мозок). Готують щонайменше двох препаратів кожного відділу мозку. Можна також досліджувати спинний мозок, підщелепні, слинні залози. Для контролю роблять препарати з мозку здорової тварини (зазвичай білої миші).

Препарати висушують на повітрі, фіксують в охолодженому ацетоні (мінус 20 °С від 4 до 12 год), висушують на повітрі наносять флуоресцентний гамма-глобулін, поміщають у вологу камеру при 37 °С на 25-30 хв, потім ретельно промивають фосфатним буфером з рН 7,4, споліскують дистильованою водою, висушують на повітрі, наносять нефлуоресціюючу іммерсійну олію і переглядають під люмінесцентним мікроскопом.

У препаратах, що містять антиген вірусу сказуспостерігаються різної величини та форми флуоресціюючий жовто-зеленим кольором гранули в нейронахале частіше поза клітинами.

У контролі такого свічення не повинно бути, нервова тканина зазвичай світиться тьмяним сіруватим або зеленуватим кольором. Інтенсивність світіння оцінюють у хрестах.

Негативним вважають результатза відсутності специфічної флуоресценції.

Матеріал від тварин, вакцинованих проти сказу, не можна досліджувати у РІФ протягом 3 місяців. після щеплення, оскільки може бути флуоресценція антигену вакцинного вірусу.

У РІФ не підлягають дослідженню тканини, консервовані гліцерином, формаліном, спиртом та

т. д., і навіть матеріал, має ознаки навіть незначного загнивання.

РДП в агаровому гелі . Метод заснований на властивості антитіл та антигенів дифундувати в агаровому гелі та при зустрічі утворювати видимі візуально лінії преципітації (комплекс антиген + антитіло). Застосовують виявлення антигену у мозку тварин, полеглих від вуличного вірусу сказу, або за експериментальної інфекції (біопробу).

МЕТОДИЧНІ ВКАЗІВКИ
ПО ЛАБОРАТОРНІЙ ДІАГНОСТИЦІ Скази

1. Діагноз на сказ ставлять на підставі комплексу епізоотологічних, клінічних, патологоанатомічних даних та головним чином – на підставі лабораторних досліджень.

2. Для дослідження направляють до лабораторії з навмисним: свіжий труп або голову від собаки (кішки, лисиці, песця, вівці, теляти та ін.), від великих тварин - голову або головний мозок (свіжий або консервований у 30 - 50%-ному розчині гліцерину). Для серологічних досліджень придатний лише неконсервований мозок.

3. Лабораторна діагностика сказу полягає в мікроскопічному дослідженні головного мозку (з метою виявлення тілець Бабеша-Негрі), серологічному (виявлення специфічного рабічного антигену), а також постановці біологічної проби на білих мишах або кроликах.

Порядок досліджень.

4. З головного мозку, що надійшов для дослідження, роблять спочатку засів на живильні середовища. Частину мозку відразу ж поміщають у холодильник і зберігають у разі необхідності повторного дослідження. З частини мозку беруть матеріал для мікроскопічного дослідження, серологічних реакцій і біологічної проби.

Примітка. Розтин трупа, вилучення мозку та інші роботи проводять у стерильних умовах за суворого дотримання заходів особистої профілактики (міцна фіксація голови тварини, захист рук двома парами рукавичок: хірургічними та анатомічними; для захисту очей надягають окуляри, а ніс і рот закривають марлевою пов'язкою).

I. МІКРОСКОПІЧНІ ДОСЛІДЖЕННЯ

5. Для мікроскопічного дослідження роблять відбитки та мазки з різних ділянок головного мозку.

6. Для приготування відбитка шматочки головного мозку (аммонів ріг, кора півкуль, мозок, довгастий мозок) кладуть на фільтрувальний папір, складений у 4 - 6 шарів. До поверхні зрізу кілька разів (3 - 4) поспіль торкаються чистого предметного скла, злегка натискаючи, щоб на склі вийшов тонкий відбиток.

7. Мазки роблять із тих же ділянок головного мозку. Для цього шматочки мозку розтирають у фарфоровій ступці маточкою або в пробірці скляною паличкою до утворення гомогенної маси, з якої роблять грубі мазки на знежиреному предметному склі.

Можна робити мазки та іншим способом. Для цього невеликий шматочок мозку кладуть на край предметного скла, а іншим склом роздавлюють його і розмазують від краю до іншого, в результаті чого на поверхні скла виходить тонкий рівномірний мазок.

8. Отримані мазки або відбитки фарбують одним із наступних способів:

а) забарвлення за Муромцевим. Виготовлені, ще вологі мазки або відбитки відразу ж фіксують в етиловому або метиловому спирті або суміші спирту навпіл з ефіром або ацетоном (хімічно чистим) протягом 1 - 2 год і після цього промивають водою. Посудина з фіксатором повинна бути добре закрита, щоб попередити випаровування фіксуючої рідини. Після промивання водою вологі мазки поміщають на 5 - 10 хв розчин фарби Мансона, розведеної водою 1:40. Потім фарбу зливають і відразу мазки занурюють в 10%-ний водний розчин таніну на 8 - 10 хв до появи блакитного забарвлення. Після цього мазки промивають водою, висушують фільтрувальним папером, проводять через суміш з рівних частин спирту з ацетоном (хімічно чистим) або спирту з ксилолом і знову висушують фільтрувальним папером. Забарвлений мазок повинен мати світло-блакитний фон, при цьому ядра нервових клітин забарвлюються у синій колір, а тільця Бабеша-Негрі – у блідо-фіолетовий з темними включеннями;

б) забарвлення за Селлерсом. На приготовлений вологий відбиток або мазок наносять на 4 - суміш реактиву «А» (метиленовий синій - 2 г, метиловий спирт без ацетону - 100 мл) і реактиву «Б» (основний фуксин - 0,5 г, етиловий спирт без слідів ацетону - 100мл). Робочий розчин барвника складається з 15 мл реактиву А, 2 - 4 мл реактиву Б і 25 мл метилового спирту. Після фарбування препарат промивають проточною водою та висушують. У пофарбованому мазку цитоплазма нейронів яскраво-синя, ядерця темно-сині, еритроцити цегляно-червоні, тільця Бабеша-Негрі пурпурно-червоні з чітко видною базофільною структурою тілець;

в) забарвлення по Міхіну. Мазки або відбитки фіксують у суміші спирту та ефіру (порівну) протягом 5 - 10 хв, після чого їх просушують фільтрувальним папером і забарвлюють протягом 30 - 40 хв фарбою Гімза (1 - 2 краплі на 1 мл дистильованої води), швидко промивають підкисленим спиртом (1 крапля крижаної оцтової кислоти на 30 мл 96°-ного спирту), а потім водою, просушують фільтрувальним папером і піддають дослідженню. Якщо матеріал був у гліцерині, його попередньо добре прополіскують у воді і просушують фільтрувальним папером.

У забарвленому препараті при мікроскопічному дослідженні основне тло має бути червоним з фіолетовим відтінком. При переважанні синього тону мазок знову обмивають підкисленим спиртом та промивають водою. Пірамідальні нервові клітини мають синюватий колір з інтенсивно чорним ядром, а тільця Бабеша-Негрі – рожево-червоний із точковими включеннями темно-синього кольору;

г) забарвлення за Борманом-Гайнулліною. Тонкі мазки або відбитки протягом 5 хв фіксують у суміші наступного складу: спирту та ефіру (порівну) - 98 мл, крижаної оцтової кислоти - 2 мл; після фіксації їх занурюють на 5 хв в 10% розчин кристалічної соди, а потім промивають водою і просушують на повітрі. Зафіксовані мазки протягом 2 хв забарвлюють фарбою, приготованою перед її вживанням (насиченого водного розчину метиленової сині – 3 краплі, насиченого основного розчину фуксину – 2 краплі, водопровідної води – 20 мл). Розчин фарби наливають на мазок, фіксують над полум'ям пальника, потім залишають фарбу ще на одну хвилину, після чого промивають водою і просушують фільтрувальним папером. У пофарбованому мазку основне тло має бути яскраво-червоним, протоплазма нервових клітин забарвлюється в червонувато-синій колір, які ядра - в темно-синій, тільця Бабеша-Негри забарвлюються в сунично-червоний колір із типово гранулярної структурою. Еритроцити мають вигляд незабарвлених кружальців.

ІІ. СЕРОЛОГІЧНІ ДОСЛІДЖЕННЯ

9. Реакція дифузної преципітації в агаровому гелі. Реакція застосовується для виявлення специфічного рабічного антигену в неконсервованому головному мозку тварин, що загинули від вуличного сказу, а також у тварин, на яких ставилася біопроба. Для реакції можна використовувати несвіжий (до 1 місяця) головний мозок.

Реакцію виконують на предметних знежирених стеклах, на які наносять 2,5 мл розплавленого та охолодженого до 60 °С агарового гелю, приготованого за прописом: сухий агар-агар - 12 - 15 г; хімічно чистий хлористий натрій – 8,6 г; 1% розчин (фільтрований) метилоранжу на 50°-ному спирті - 5 - 10 мл; мертіолят – 0,01 г; вода дистильована – 1 л.

Примітка. Для постановки реакції краще використовувати агар-агар компанії «Діфко», він повністю розчиняється, фільтрування середовища не потрібно. Інші сорти агар-агару потребують ретельної фільтрації.

Після застигання агару в ньому роблять лунки за допомогою тонкостінної металевої або скляної трубочки з внутрішнім діаметром 4 - 5 мм, розташовуючи їх згідно з трафаретом (див. рис. - ).

Для реакції у великих тварин використовують шматочки головного мозку - амонів ріг, кору півкуль, мозок, довгастий мозок; у щурів, ховрахів, морських свинок, хом'яків та ін. - три будь-які відділи мозку; у мишей – весь головний мозок.

Схема постановки мікропреципітації:
А - кора (ліва півкуля); У- кора (права півкуля); З- Амонів ріг (лівий);
Д- амонів ріг (правий); Е- мозок; Ж- продовгуватий мозок;
1 , 2 , 3 , 4 - розведень глобуліну відповідно 1:2, 1:4, 1:8, 1:16.

Позитивна РП з усіма розведеннями глобуліну
(кора головного мозку вівці, вуличне сказ)

Позитивна РП із розведеннями глобуліну 1:4; 1:8, 1:16
(Аммонів ріг собаки, вуличне сказ)

Позитивна РП з розведеннями глобуліну 1:16,
відсутні лінії преципітації з розведеннями 1:2, 1:4,
(довгастий мозок собаки, вуличне сказ)

Мозок розтирають у фарфоровій ступці маточкою або в самій черепній коробці в «пасту», якою заповнюють ямочки для антигену. Інші луночки заповнюють преципітуючим антирабічним глобуліном у розведенні 1:2, 1:4, 1:8, 1:16. Об'єм інгредієнтів становить 0,02 мл.

Контролі з позитивними та негативними антигенами ставлять одночасно на окремому склі з використанням того ж агару за тим самим трафаретом.

Після того, як інгредієнти реакції поміщені у відповідні луночки, предметні стекла переносять у вологу камеру (чашки Петрі з вологим фільтрувальним папером або ватою) і ставлять у термостат на 6 год при температурі 37 - 38 °С. Потім чашки залишають за кімнатної температури ще на 18 год.

Облік реакції проводять через 3, 6 та 24 год після її постановки. Щоб уникнути висихання агару скла з реакцією після кожного перегляду поміщають у ті самі чашки Петрі, що містять зволожену вату.

При позитивній реакції преципітації в агарі між лунками з глобуліном і антигеном можуть утворюватися одна, дві та дуже рідко три паралельно розташовані лінії преципітації. Лінії преципітації, що утворилися, видимі візуально при просвічуванні скла освітлювачем знизу вгору під кутом приблизно 45°.

За негативних показань реакції преципітації ставлять біопробу.

10. Реакція імунофлуоресценції. Заснована на виявленні спеціальними мікроскопами (МЛ-1, МЛ-2, МЛ-3 та ін) вірусного антигену, що вступив у реакцію зі специфічною антирабічною сироваткою, міченою флуоресцентним барвником.

Для реакції роблять тонкі та рівношарові відбитки на ретельно знежиреному склі зі свіжого або свіжомороженого головного мозку. Відбитки готують зі шматочків головного мозку (аммонів ріг, кора півкуль, мозочок, довгастий мозок) так само, як і для мікроскопічного дослідження. Від кожного шматочка мозку готують щонайменше 4 препаратів. Для контролю аналогічно роблять препарати з мозку здорової тварини.

Після висушування на повітрі препарати фіксують в ацетоні протягом 4 год. при температурі не вище 4 °С. Посудина з фіксатором повинна бути добре закрита, щоб попередити випаровування фіксуючої рідини. Після фіксації ацетоном наносять на препарати кілька крапель кон'югату (флуоресціюючий антирабічний гамма-глобулін) у робочому розведенні. Потім їх поміщають у вологу камеру (кухоль Петрі або закритий емальований кювет з зволоженим дном) на 20 - 30 хв при температурі 25 °С.

Після цього препарати промивають водою або буферним фосфатним розчином (pH 7,2 - 7,4) протягом 1 год, потім обполіскують дистильованою водою, висушують на повітрі і піддають дослідженню. Препарати проглядають під імерсійною системою. Для імерсії використовують нелюмінесцентну олію.

У забарвленому препараті при люмінесцентній мікроскопії мозкова тканина флуоресціює (світиться) тьмяним сірувато-жовтим кольором. Антиген вірусу сказу виявляється у препаратах у вигляді яскравих жовтувато-зелених або зелених гранул різної форми та величини – від ледь помітних до тих, що мають 15 – 20 мкм у діаметрі.

У контрольному препараті жовто-зелених гранул, що інтенсивно світяться, не відзначається.

При дослідженні за допомогою методу флуоресціюючих антитіл діагноз сказу вважається встановленим, якщо в кількох полях зору мікроскопа виявляють достатню кількість (не менше 10) типових гранул з яскравим зеленим свіченням різної величини. У контролі таких утворень не повинно бути.

За відсутності позитивної флуоресценції ставлять біологічну пробу.

ІІІ. БІОЛОГІЧНА ПРОБА

11. Біологічну пробу на сказ ставлять, якщо отримано негативний результат при мікроскопічному дослідженні (тільця Бабеша-Негри не виявлено), при серологічних реакціях (специфічного рабічного антигену не виявлено), а також при виявленні атипових включень. Біологічну пробу проводять на білих мишах чи кроликах.

12. Досвідчених мишей або кроликів заражають 10% суспензією з досліджуваного мозку на фізіологічному розчині або м'ясопептонному бульйоні з pH 7,2 - 7,4. Для приготування суспензії використовуються самі ділянки головного мозку, з яких брали матеріал для мікроскопічного та серологічного досліджень.

Вирізані ділянки головного мозку збирають у стерильну пробірку і зважують, а потім ретельно розтирають у ступці маточкою, після чого додають фізіологічний розчин або м'ясопептонний бульйон з розрахунку отримання 10% суспензії. Отриману суспензію відстоюють протягом 10 хв і для зараження використовують надосадову рідину.

Якщо патологічний матеріал був забруднений, то надосадову рідину зливають в іншу судину (пробірку) і до неї додають по 500 - 1000 ОД пеніциліну та стрептоміцину на 1 мл рідини, після чого відстоюють ще 30 хв при кімнатній температурі і потім використовують для зараження. Суспензію необхідно готувати в стерильних умовах і за суворого виконання правил особистої профілактики.

Біологічна проба на білих мишах. Для зараження використовують білих мишей масою 8 – 10 г. Для кожного дослідження беруть 6 мишей, з яких 3 заражають у головний мозок, а 3 – підшкірно. При зараженні в мозок голку вводять у точці за лінією, що з'єднує задні кути і трохи осторонь лінії, що проходить посередині голови. Місце зараження протирають спиртом. Суспензію вводять у дозі 0,03мл. Для попередження глибокого проникнення голки в мозок на її кінчик одягають обмежувач – невеликий шматочок гумової трубки, який зміцнюють на відстані 2 – 3 мм від кінця голки. При підшкірному зараженні вводять суспензію в область кінчика носа (у верхню губу) в дозі 0,05 мл. На місці введення суспензії утворюється невелика припухлість. Заражених мишей поміщають у скляні банки та спостерігають за ними протягом 30 діб. При позитивному результаті біологічної проби мишей зазвичай на 7 - 15-й день після зараження розвивається клініка паралітичного сказу.

Спочатку відзначаються млявість, скуйовдженість вовни та своєрідна горбатість, а також порушення координації рухів. Потім настає параліч задніх кінцівок, а пізніше - передніх, що переходять у загальний параліч, що закінчується смертю. Тривалість хвороби 2 – 3 діб.

З розвитком загального паралічу мишей умертвляють за допомогою ефірного чи хлороформеного наркозу. У полеглих і вбитих мишей розкривають черепну порожнину, роблять засів із мозку на живильні середовища, після чого витягують головний мозок, з якого готують препарати для мікроскопічного та імунобіологічних досліджень.

За відсутності клінічних проявів сказу у заражених мишей протягом 30 діб їх знищують. Банки, де вони утримувалися, ретельно дезінфікують.

Біологічна проба на кроликах. Для постановки біологічної проби беруть 4 кролики масою не менше 1,5 кг кожен. 2 кроликів заражають у мозок і 2 внутрішньом'язово в ділянці стегна. Суспензію вводять інтрацеребрально у дозі 0,2 мл, а внутрішньом'язово – у дозі 2 мл.

При позитивному результаті біологічної проби кролики хворіють протягом 16 – 21 дня. Захворювання на сказ протікає у кроликів у тихій паралітичній формі зі смертельним результатом. У полеглих кроликів витягують головний мозок і подальше дослідження проводять так само, як і при зараженні мишей. Спостереження за кроликами ведуть протягом 45 – 50 діб. Після закінчення зазначеного терміну кроликів знищують. Клітини, у яких містилися піддослідні тварини, дезінфікують.

IV. ГІСТОЛОГІЧНЕ ДОСЛІДЖЕННЯ 1

1 Гістологічне дослідження використовують як додатковий метод

Для гістологічного дослідження беруть шматочки амонового рогу, кори півкуль, мозочка, довгастого мозку і фіксують в одній або двох порціях ацетону так, щоб тривалість фіксації була в межах 6 - 18 год.

Найкраще фіксацію в ацетоні залишати на ніч. Потім патматеріал проводять через дві порції ксилолу, витримуючи по 30 хв у кожній і через дві порції парафіну - по 1 год в кожній. Готові зрізи депарафінують звичайним методом і забарвлюють за Ленцом або Туревичем:

Забарвлення по Ленц. Зрізи фарбують розчином еозину 1 - 3 хв (0,5 г еозину розчиняють у 100 мл 60°-ного етилового спирту). Еозин швидко змивають водою і протягом 1 хв забарвлюють метиленової синькою Лефлера, промивають водою, обережно підсушують фільтрувальним папером і диференціюють розчином од. кого натру в абсолютному спирті (5 крапель їдкого натру на 30 мл спирту) до блідо-рожевого кольору. На препарат наливають розчин оцтової кислоти (1 крапля крижаної оцтової кислоти на 60 мл абсолютного спирту) і тримають до появи слабо-синього забарвлення, швидко змивають спиртом і просвітлюють ксилолом протягом 4-5 хв. Тільці Бабеша-Негрі забарвлюються у яскраво-червоний колір із синіми включеннями, цитоплазма гангліозних клітин – у блідо-блакитний;

Забарвлення за Туревичем. Депарафіновані зрізи відразу після проведення через спирти та дистильовану воду забарвлюють гематоксиліном Вейгерта або Ерліха, промивають дистильованою водою. Потім фарбують 1%-ним водним розчином кислого фуксину протягом 1 хв і ретельно промивають дистильованою водою до появи блідо-рожевого відтінку. Після промивання обробляють сумішшю (у рівних частинах) насиченого водного розчину пікринової кислоти (на 1 л гарячої води, що дистилює 25 - 30 г пікринової кислоти) і 96°-ного спирту. При обробці спостерігають відходження хмаринок червоної фарби, і зрізи через 10 - 20 с набувають жовтого відтінку. Зрізи швидко прополіскують у воді і злегка обсушують фільтрувальним папером. Потім швидко проводять через абсолютний або 96°-ний спирт, карбол-ксилол, чистий ксилол і укладають в бальзам. Тільця Бабеша-Негрі – вишнево-червоного кольору, ядра клітин – чорні чи сині залежно від того, яким гематоксиліном вони пофарбовані. За формою та величиною тільця Бабеша-Негрі дуже різноманітні, знаходяться в цитоплазмі та відростках нервових клітин у вигляді численних чи одиночних екземплярів. Найчастіше тільця Бабеша-Негрі виявляють у великих гангліозних клітинах, причому клітини, що їх містять, не мають виражених ознак дегенерації.

Нерідко виявляють інші включення, які через низку подібних ознак іноді приймають за тільця Негрі. Слід пам'ятати, що у мозку здорових кішок і білих мишей іноді містяться неспецифічні ацидофільні тільця-включення. Ці тільця можна віддиференціювати від тілець Негри за відсутністю внутрішніх гранул та гомогенності основної субстанції.

Для сказу також характерні ознаки гострого енцефаломієліту: переважно навколо дрібних вен виявляють периваскулярні інфільтрати, що складаються в основному з лімфоїдних клітин, що мають вигляд клітинних муфт.

У гангліозних клітинах головного мозку можуть бути хроматоліз, вакуолізація та гостре набухання клітин, а також загибель окремих клітин. В області пошкоджених нервових клітин досить постійна проліферативна реакція глії, що набуває форми істинної нейронофагії з наступним заміщенням нервових клітин елементами глії, що розмножилася. Таке скупчення клітин проліферату дома розпалася нервової клітини зветься «вузлика сказу» - на зрізі іноді можна простежити процес розвитку вузлика (1).

Сказ є вірус, що передається людині через інфіковану тварину внаслідок укусу або шляхом попадання зараженої слини. Це захворювання не піддається лікуванню, адже досі медицина не знайшла протидії подібному зараженню. Сказ починає проявлятися лише через кілька днів, летальний кінець настає через пару днів після початку зараження. Щоб не зіткнутися з цією проблемою, можна запобігти її появі шляхом вакцинації. Так само щеплення може протидіяти в перші ж години після укусу.

При укусі тваринам необхідно негайно здати аналіз на сказ. Цей вірус передається людині від зараженої тварини. Найбільш поширені випадки зараження від диких не щеплених тварин (лисиця, вовк, миша, єнот) або домашніх, які не були щеплені протягом року (собака, кішка, рогата худоба).

Заразитися від хворої тварини можна в наступних обставинах:

• під час укусу зараженої тварини;
• при попаданні слинних виділень на слизову оболонку людини або пошкоджені ділянки шкіри. Це може бути рана або звичайна подряпина.

При будь-якому вигляді контакту зі слиною зараженої тварини необхідно негайно звернутися до медичного закладу для проведення профілактичних заходів, оскільки лікуванню даний вид зараження не піддається. Не виключено зараження у процеси вдихання повітря або частинок пилу, які містять інфекцію, у медичній практиці є випадки інфікування у процесі обробки лисячих шкір. Контакт із фекаліями або сечею хворої тварини не загрожує захворюванням, те саме стосується і неушкодженої шкіри. М'ясо без обробки не містить вірусу, профілактика після вживання необробленого м'яса не потрібна.

Важливо знати, що вірус сказу не передається від людей до людини, тому не треба побоюватися такої людини, потрібно своєчасно їй допомогти.

Симптоматика

Інфікування не супроводжується симптомами миттєво, для їх виявлення може знадобитися кілька днів, але на цій стадії будь-які дії порятунку будуть уже безглузді. Інкубаційний період у середньому буває близько місяця, але може сягати й року. Яким чином проявляється сказ? Найбільш виражені ознаки:

• набряк, свербіж, почервоніння дома укусу тваринам;
• лихоманка; підвищення температури тіла;
• відсутність сил, постійна втома, нездужання;
• часті головні болі;
• порушення нормального сну, безсоння;
• загострення до зорових та слухових подразників;
• судоми;
• депресивний настрій, почуття апатії;
• постійна зміна страху та тривоги на агресію та занепокоєння;
• розлади у роботі дихальної системи та проблеми з ковтанням;
• почастішання серцевого ритму, задишка;
• збільшення слиновиділення;
• неясність свідомості, галюцинації;
• параліч кінцівок чи іншої частини тіла.

Інкубаційний період

Цей період є проміжок від зараження вірусом досі появи перших ознак недуги. Він триватиме протягом місяця, але діапазон становить від кількох днів до цілого року. Такі випадки дуже рідкісні і трапляються один раз на мільйон випадків.

Швидкість розвитку інкубаційного періоду залежить від розташування інфекції до головного мозку. Чим ближче цей вірус, тим швидше настане неминуча загибель. Укус обличчя чи плеча сприятиме швидшому розвитку подій, інкубаційний період у разі може настати вже за кілька днів. Цей період дуже важливий для людини, тому що за цей час потрібно встигнути здати кров і дізнатися про результати аналізу на сказ у людини. Оперативна вакцинація дає шанс порятунку життя.

Наступна симптоматика

Після перших видимих ​​проявів настають виражені ознаки зараження. Існує два різновиди сказу, що прогресує:

• в більшості випадків, у 80 зі 100 настає буйне сказ;
• тихе сказ, його ще називають паралітичним. Воно зустрічається рідше.

Заключна стадія – гострий неврологічний період.

Буйний тип зараження

У період буйного сказу у людей може спостерігатися невластива їм гіперактивна поведінка, яка змінюється відносним нетривалим спокоєм. Люди в цей момент поводяться дивно. Можуть виявлятися такі ознаки цього типу:

• збудження, що часто межує з агресією та озлобленістю. Людина може почати бійку, завдавати шкоди, не замислюючись про наслідки;
• посилене слиновиділення, неконтрольоване;
• жар, висока температура тіла, гарячка;
• надмірна пітливість;
• галюциногенні сплески, плутанина насправді;
• мурашки, волосся на шкірі стає дибки;
• стійка ерекція у чоловіків.

Під час буяння у людей, заражених вірусом сказу, може розвиватися страх води – гідрофобія. Виникають складнощі в дихальній системі, виникають проблеми з ковтанням. Під час ковтання м'язи охоплюють спазм, що унеможливлює здійснення такого знайомого рефлексу. Спазм може тривати кілька секунд, але повторюється при черговій спробі. Далі людина боїться робити спроби через страх знову випробувати спазм. Можуть також виявлятися й інші фобії, наприклад, страх повітря або яскравого світла.

Вже через пару днів людина впадає в кому, організм відчуває легеневу або серцеву недостатність і невдовзі гине.

Тихий сказ

Такий тип викликаний слабкістю у м'язовій структурі. М'язи не тільки втрачають чинність, а й позбавлені чутливості, а іноді й частково паралізовані. Наприклад, у кистях чи стопах може виникнути легке оніміння, що переростає в нездатність рухати якимись елементами кінцівок. Така недуга може поширитися по всьому тілу і повністю знерухомити людину.

Фобії за такого типу сказу зазвичай виникають. Участь людини все також зумовлена: спочатку кома, потім летальний кінець.

Діагностичні дослідження

Щоб лікар міг діагностувати сказ, необхідно підтвердити його такими даними:

1. Факт взаємодії із зараженою або безпритульною твариною, яка не була щеплена протягом року. Під контактом мається на увазі взаємодія зі слиною хворої тварини, укус, обробка ран та ін.
2. Перші прояви інфікування.
3. Матеріали для аналізу зараженої або підозрілої тварини за можливості.
4. Результати обстеження людини із ознаками сказу.

При діагностиці використовують такі способи обстеження:

1. Забір тканин ділянки шкіри для виявлення антитіл у боротьбі з вірусним захворюванням. Тканини беруть із задньої поверхні шиї або ж, як матеріал використовується відбиток рогівки ока.
2. ПЛР. Матеріал для дослідження – слина чи спинномозкова рідина. Але такий аналіз є досить дорогим і виконується не в усіх лабораторіях.
3. Дослідження спинномозкової рідини та аналіз крові на визначення рівня моноцитів.
4. Дослідження ділянок головного мозку, яке доступне лише після констатації смерті хворого. Під час підтвердження діагнозу в нервових клітинах знаходяться точки – тільця Негрі, які однозначно свідчать про сказ.

Лікування зараження

Ефективних методів для лікування проявів сказу людство досі не відкрило. Раніше всі люди незалежно від своєчасності звернення до лікаря закінчували смертю. Але сучасна медицина пропонує використовувати вакцинацію як як профілактичні заходи, а й як протидії під час інкубаційного періоду зараження.

В історії є лише кілька випадків одужання після комплексу противірусного медикаментозного впливу, проте в реальному житті це працює вкрай рідко і майже нікого не рятує від загибелі.

Ефективність лікування можлива тільки відразу після укусу, в процесі зараження. Своєчасні дії можуть убезпечити від розвитку симптоматики та смерті, але не можна зволікати. При зараженні вірусом сказу важлива кожна хвилина, адже саме вона може коштувати людське життя.

Недосеков В.В., Вишняков І.О., Груздєв К.М. ВНИИВВиМ, ВГНКИ

Одним із найдавніших і найнебезпечніших інфекційних захворювань людства є сказ. Небезпека, яку становить сказ для життя людей та тварин, на жаль, не має тенденції до зниження.

Практичне значення цієї хвороби визначається широким поширенням серед багатьох видів тварин, високим летальним кінцем хворих на сказ і відсутністю ефективних засобів лікування.

Незважаючи на те, що епізоотії сказу підтримуються зараз головним чином дикими тваринами, людині загрожують насамперед собаки і кішки. Тому питанням діагностики захворювання собак приділяється пильна увага.

Сучасна та точна лабораторна діагностика сказу, особливо експрес-діагностика, залишається актуальною для практичної ветеринарної медицини.

Діагностику сказу собак проводять як посмертно, і прижиттєво.

Посмертна діагностика

а) виявлення антигену

Швидким і чутливим методом діагностики сказу собак є метод флуоресціюючих антитіл (МФА), заснований на мікроскопічному дослідженні в ультрафіолетових променях відбитків, мазків та кріоконсервованих зрізів тканин, оброблених антирабічним глобуліном кон'югованим з флуоресцеїн ізотіоціонатом. Як альтернатива МФА, в польових умовах може застосовуватися гістохімічний варіант імуноферментного аналізу, що дозволяє ідентифікувати специфічний антиген як в матеріалі, що розклався, так і в консервованому, до того ж для обліку результатів тесту достатньо світлового мікроскопа.

Широке поширення з метою діагностики сказу отримав "Сендвіч" - варіант твердофазного імуноферментного аналізу, метод заснований на сорбції антигену в різних розведеннях на іммобілізовані специфічні глобуліни з подальшим виявленням антигену глобулінами кон'югованими з пероксидазою хрону. Крім цього, реакції використовують як полі- так і моноклональні антитіла, останнім, безсумнівно, надається більша перевага у зв'язку з їх специфічністю, авидністю, стабільністю і відсутністю неспецифічних реакцій.

Одним із найбільш точних тестів детекції рабічного антигену є полімеразна ланцюгова реакція. Даний метод дозволяє діагностувати сказ навіть за наявності у матеріалі хоча б одного віріону. В основі тесту лежить комплементарне добудовування РНК матриці, яке здійснюється in vitro за допомогою ферменту РНК-полімерази. Однак полімеразна ланцюгова реакція ще недостатньо розроблена для рутинної діагностики сказу і поки не знайшла застосування у лабораторіях.

б) виділення вірусу in vitro

Виділення вірусу може бути необхідним для підтвердження результатів тестів визначення антигену і для більш детальної характеристики ізолятів. З цією метою широко використовується культура клітин мишачої нейробластоми (Na C1300). Виділення вірусу в культурі нейробластоми принаймні так само ефективно щодо виявлення невеликих кількостей вірусу сказу, як і зараження мишей. Крім того, при використанні цієї культури знижується час, потрібний для постановки діагнозу, з 10-15 до 2 днів, усувається необхідність експериментальних тварин і значно зменшується вартість досліджень. Однак, незважаючи на це, інтрацеребральне зараження мишей, як і раніше, залишається важливим методом лабораторної діагностики сказу собак.

Прижиттєва діагностика.

Важливим аспектом діагностики захворювання є прижиттєва діагностика, велике значення до ухвалення рішення про застосування засобів імунопрофілактики має постановка діагнозу як і раніше ранні терміни. Вірусний антиген може бути виявлений за допомогою МФА у відбитках рогівки або біоптатах шкіри хворих на сказ тварин. Крім цього, вірус може бути виділений з деяких тканин та рідин організму, особливо зі слини та спинно-мозкової рідини. Однак, якщо позитивний результат дослідження свідчить про захворювання на сказ, то негативний результат не виключає можливості зараження.

Інші статті цього розділу